BIODEGRADACIN DE COMPUESTOS XENOBITICOS Y RECALCITRANTES INTRODUCCIN La actividad industrial y el desarrollo tecnolgico producen necesariamente residuos.

La contaminacin sistemtica del medio ambiente por esos residuos puede trazarse en la historia a los comienzos de las sociedades urbanas. Es, por ejemplo, interesante, la existencia de sitios contaminados por metales pesados por actividades metalrgicas del Neoltico, del Imperio Romano y de la Edad Media, por no mencionar las escombreras y vertederos en funcionamiento durante siglos en las proximidades de las grandes ciudades. El problema de la calidad del agua para consumo humano y del aire ha sido recurrente tambin a lo largo de la historia, ya que su deterioro ha procedido en muchos casos de actividades antropognicas. Sin embargo, los problemas actuales de contaminacin ambiental por especies qumicas tienen su origen mayoritario en:

El desarrollo a gran escala de la qumica de sntesis desde comienzos del siglo XX. Este desarrollo introdujo y sigue introduciendo en la Naturaleza un tipo de enlaces qumicos prcticamente desconocidos en la Biosfera (xenobiticos), sobre todo de tomos de carbono unidos covalentemente a grupos muy electronegativos (halgenos y grupos nitro y amino), lo que confiere una extraordinaria estabilidad a los productos resultantes. Las explotaciones mineras y metalrgicas masivas, cuyos procesos transforman a los metales desde formas biolgicamente inactivas a especies inicas con una alta reactividad en sistemas vivos. La extraccin y combustin de enormes cantidades de minerales fsiles (carbn y petrleo) como base energtica de todas las sociedades industrializadas, con la consiguiente descarga de CO2 y las deposiciones cidas de ntrico y sulfrico. La demanda social y utilizacin masiva de polmeros sintticos (tpicamente los plsticos), formados a base de productos del petrleo en combinacin con aditivos de sntesis. Las prcticas de agricultura intensiva, con su requerimiento tanto de abonos nitrogenados y de fuentes de fosfato como de pesticidas y herbicidas para el control de plagas. Un problema asociado es el de los residuos resultantes de la manufactura y consumo de productos vegetales o de origen vegetal. La emisin de productos farmacuticos al medio ambiente como consecuencia de la produccin y el consumo creciente de molculas bioactivas de sntesis o semi-sntesis. Estos problemas son absolutamente universales y en mayor o menor medida aparecen en todos los pases, aunque algunos de ellos estn exacerbados en sociedades como la nuestra que ha experimentado un desarrollo industrial acelerado en las ltimas dcadas. Por otra parte, aunque las nuevas (bio) tecnologas pueden proporcionar un cierto remedio a muchos problemas de contaminacin intensiva y extensiva, el deterioro medioambiental causado por la actividad industrial no es simplemente un problema tcnico o cientfico. La generacin de residuos es algo consustancial a la existencia de las actividades petroqumicas y metalrgicas sin las cuales nuestra sociedad actual no sera viable. Las tecnologas y procesos industriales pueden ser ms limpios, pero no totalmente limpios y una sociedad sin contaminacin requerira un profundo cambio social y de forma de vida que ninguna fuerza poltica significativa sostiene hoy en el mundo occidental. El desarrollo de la Microbiologa y, posteriormente, de la Biologa Molecular en este siglo ha proporcionado herramientas conceptuales y materiales para abordar de forma ms racional el tratamiento biolgico de los residuos urbanos e industriales. La Fisiologa y el metabolismo microbiano es la herramienta fundamental de la Biotecnologa para el medio ambiente. Las rutas de degradacin aerobia y anaerobia de numerosos

contaminantes ambientales son hoy da conocidas en gran detalle. Esto permite tanto la introduccin deliberada de cepas especficas en lugares contaminados como vectores de nuevas actividades, como la creacin de nichos ecolgicos que permitan una colonizacin rpida por un tipo deseado de microorganismos. Una segunda herramienta es la gentica molecular, que ha permitido la diseccin hasta el nivel ms bsico de las actividades biodegradativas y detoxificadoras de los microorganismos. Tambin ha permitido una comprensin de cmo las bacterias desarrollan nuevas capacidades catablicas. Desde un punto de vista biolgico y evolutivo, la aparicin reciente de nuevos compuestos, o la movilizacin a formas bioactivas de los ya existentes, plantea el problema de su integracin en los grandes ciclos naturales de regeneracin de los elementos, mediados por microorganismos de distinto tipo. La etapa limitante de la biodegradacin o detoxificacin de la mayora de los compuestos txicos en el medio ambiente se relaciona con su biodisponibilidad, la eficiencia de las rutas catablicas para su metabolismo y de los procesos microbianos de re-mineralizacin. Aunque en muchos casos existe el potencial gentico y enzimtico para que con una presin selectiva prolongada se generen rutas con nuevas especificidades catablicas, estas pueden no aparecer lo suficientemente rpido o no ser lo suficientemente eficaces. El conocimiento acumulado sobre los mecanismos moleculares de evolucin natural de rutas catablicas, proporciona unas pautas racionales para acelerar el proceso en el laboratorio y conseguir en unos aos lo que la Naturaleza tardara dcadas o siglos. En este sentido, la gentica y la tecnologa del ADN recombinante abren la posibilidad de combinar en un slo microorganismo actividades de inters medioambiental que aparecen en la Naturaleza nicamente por separado, o bien de crear actividades completamente nuevas. Entre los microorganismos ms interesantes como vectores para la introduccin medioambiental de actividades detoxificadoras destaca el gnero Pseudomonas y sus parientes prximos Alcaligenes, Rhizobium, Rhodobacter,Arthrobacter y Acinetobacter. Este tipo de microorganismos, generalmente aerobios, presenta una enorme capacidad de adaptacin al medio, tanto en lo que se refiere a la utilizacin de una variedad de compuestos qumicos como fuente de carbono, como a su supervivencia en condiciones fsicas adversas. Adems, su manipulacin gentica es relativamente sencilla gracias al desarrollo durante los ltimos 15 aos de una coleccin de herramientas genticas de amplio espectro de husped en la que se incluyen replicones, fagos, transposones y vectores de clonaje de distinto tipo. Desafortunadamente, la situacin es muy distinta con los microorganismos implicados en los procesos biodegradativos anaerobios. En este caso, los estudios sobre su fisiologa van muy por delante de los de su gentica, debido a la dificultad de desarrollar sistemas adecuados de transferencia de ADN. CLASIFICACIN Algunos de los xenobiticos ms conocidos son los plaguicidas entre los que se incluyen herbicidas, insecticidas, nematicidas, funguicidas, etc. Los compuestos xenobiticos pueden ser considerados hidrocarburos con diversos grupos sustituidos, por tanto conviene tener en cuenta las rutas de degradacin de los hidrocarburos alifaticos, alicclicos y aromticos.

PESTICIDAS
Dentro de los plaguicidas se encuentran los cidos clorofenoxialquil carboxlicos, ureas sustituidas, nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamato, organoclorados, organofosforados. Algunas

de estas sustancias pueden actuar como donadores de electrones o como fuente de carbono para ciertos microorganismos. Herbicidas Clorofenlicos Las sales y steres de algunos de los cidos clorofenlicos, son irritantes moderados de la piel, ojos y mucosas respiratoria y gastrointestinal. En la produccin de algunos de estos herbicidas pueden formarse otras substancias an ms txicas debido a temperaturas excesivas. Ejemplo: pentaclorofenol (PCP) Herbicidas Nitrofenlicos y Nitrocreslicos Ejemplo: paraquat y diquat Insecticidas de Cloruros Orgnicos Slidos Los organoclorados son txicos, su persistencia en el ambiente sin ser destruidos llega a ser de aos y sebioacumulan, es decir, van aumentando su concentracin al ir ascendiendo en la cadena trfica. Los cloruros orgnicos se absorben en varios grados en el intestino, pulmn y piel. Despus de la exposicin a algunos cloruros orgnicos (en particular el DDT), una parte importante de la dosis absorbida se almacena en el tejido graso, como el compuesto principal inalterado. La mayora de los cloruros orgnicos son, en cierto grado, desclorados, oxidados y, despus, conjugados. La accin txica principal de los pesticidas de cloruros orgnicos se dirige al sistema nervioso, agentes tales como el DDT y el metoxicloro tienden a causar efectos menos severos, mientras que los ciclodienos, el mirex y el lindano estn asociados con ataques ms violentos y muertes. Entre ellos destacan: DDT, Aldrn, Clordano, Heptacloro, Lindano. DDT El DDT es conocido como Dicloro-Difenil-Tricloroetano fue muy beneficioso para el ser humano en su lucha contra la malaria, ya que era altamente efectivo para controlar el mosquito Anofeles. Es una molcula muy lipfila y muy insoluble en agua, pero su estabilidad qumica y su liposolubilidad compuso el problema. El DDT no es metabolizado muy rpidamente por los animales, se deposita y se almacena en los tejidos finos grasos. El perodo biolgico del DDT es cerca de ocho aos; es decir, toma cerca de ocho aos para que un animal metabolice la mitad de la cantidad que asimila. Si la ingestin contina en una tarifa constante, el DDT se acumula dentro del animal en un cierto plazo, efecto bioacumulativo. Aunque no causa daos por toxicidad, su persistencia es muy preocupante. Insecticidas Organofosfatados Los organofosfatos son muy txicos para el hombre, tanto, como los ms conocidos venenos entre los que destacan el arsnico, la estricnina o el cianuro. Desde la remocin de los insecticidas de cloruros orgnicos, los insecticidas organofosfatados se han convertido en los insecticidas de mayor uso en la actualidad. Ejemplos de estos son: Diazinn, Malatin, Paratin, 2,4-D (cido 2,4-diclorofenoxiactico), 2,4,5 T (cido2,4,5,triclorofenoxiactico), Dalapn, Atrazina, Simazina, Propazina. 2. DETERGENTES SINTTICOS Los detergentes aninicos son todava los de mayor uso en lavado de ropa. Los detergentes catinicos son txicos para microorganismos en las concentraciones normalmente utilizadas para limpieza. Se emplean cuando se desea una buena desinfeccin, aparte de la limpieza, como en hospitales, restaurantes, etc. En los ltimos aos se ha descubierto que los

detergentes no inicos del tipo alquilato tienden a persistir en aguas naturales alterando procedimientos de reproduccin de peces y otros organismos acuticos. 3. HIDROCARBUROS AROMTICOS POLICCLICOS (PAH) Se forman por la combustin incompleta de materia orgnica, de forma natural y por actividad humana como procesos comerciales con combustin de carbn incompleta, fabricacin de gas, etc. Son ms solubles en grasas que en agua, afectan a la piel y al hgado, son cancergenos. 4. HIDROCARBUROS ALIFTICOS CLORADOS (CAH) Los CAH con dos tomos de carbono pueden ser saturados (etanos) o insaturados (etenos). Los disolventes clorados se han empleado mucho en la limpieza de ropa, motores, piezas electrnicas y otros artculos contaminados por grasa. 5. HIDROCARBUROS AROMTICOS CLORADOS Difenilos policlorados (PCB) Usados en la dcada de 1950 en condensadores elctricos y transformadores, fluidos hidrulicos y bombas de aceite, adhesivos, colorantes y tintas. Los PCB se caracterizan por una gran resistencia al fuego y riesgos de explosin, adems de propiedades elctricas aislantes, tambin son resistentes a ataques qumicos y biolgicos. Pentaclorofenol (PCP) Es uno de los conservantes de madera de uso ms difundido. El cloro es un grupo que extrae electrones que convierte al grupo hidroxilo de los fenoles clorados en un cido ms fuerte. Son bastante solubles en agua, por lo que se encuentran corrientemente entre los contaminantes de aguas subterrneas, adems de suelos de alto contenido orgnico y sedimentos. Los PCP y otros fenoles clorados son biodegradables de forma aerobia y anaerobia. El PCP es txico para microorganismos a concentraciones tan bajas como 1 mg/l, pero puede conseguirse la tolerancia a concentraciones muchos ms altas mediante aclimatacin. Dioxinas Se forman como coproductos no deseados en la fabricacin de pesticidas, combustin e incineracin, blanqueo y desinfeccin con cloro y control de polvo y sedimentos. Las dioxinas tienen muchos congneres posibles, de los que el ms txico es la 2, 3, 7, 8tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD), que se piensa sea el producto qumico sinttico ms venenoso que jams se haya producido. Sus efectos biolgicos, incluyendo la teratogenidiada y la carcinogenicidad, dependen de las especie, sexo y va de exposicin. Las respuestas humanas comprenden cloroacn, prdida de sueo, insomnio, disfuncin heptica, aborto espontneo y cncer. 6. HIDROCARBUROS AROMTICOS NITRADOS: EXPLOSIVOS La fabricacin, uso y eliminacin de explosivos de operaciones militares han producido una gran contaminacin de suelos y aguas subterrneas. Los explosivos ms utilizados: TNT, RDX y HMX. Aunque la incineracin es una de las opciones habitualmente consideradas en el caso de suelos, es imposible para aguas residuales y, en general, caro. La investigacin sobre el potencial de correccin biolgica es un esfuerzo en curso que est produciendo algunos resultados positivos. PERSISTENCIA EN EL MEDIO AMBIENTE

Muchos compuestos xenobiticos habituales en operaciones industriales, actividades urbanas o en explotaciones agrcolas, son persistentes en el medio ambiente y pueden llegar a causar graves problemas de contaminacin. Las razones de su persistencia son:

Qumicas: sustituyentes extraos (Cl o otros halgenos), enlaces inusuales (carbonos cuaternarios), anillos aromticos muy condensados o excesivos tamaos moleculares (plsticos). Fsicas: insolubilidad. Celulares: carencia de permeasas especficas, toxicidad, etc. El uso de otros xenobiticos como herbicidas, insecticidas y pesticidas de empleo intensivo se ha venido beneficiando en los ltimos aos de la creciente sustitucin de los agentes persistentes por especies qumicas con una vida media ambiental mucho menor. Aun as, ocasionalmente aparecen casos de contaminacin por pesticidas asociados a su utilizacin masiva en explotaciones de agricultura intensiva. Tabla de la persistencia de herbicidas e insecticidas en los suelos Tiempo para la desaparicin del 75 al 100%

Sustancia

Insecticidas clorados DDT Aldrn Clordano Heptacloro Lindano Insecticidas organofosforados Diazinn Malatin Paratin Herbicidas 2,4-D(cido 2,4-diclorofenoxiactico) 2,4,5T(cido2,4,5,triclorofenoxiactico) Dalapn 4 semanas 20 semanas 8 semanas 12 semanas 1 semana 1 semana 4 aos 3 aos 5 aos 2 aos 3 aos

Atrazina Simazina Propazina COMETABOLISMO

40 semanas 48 semanas 1.5 aos

Los microorganismos han sido siempre conocidos por tener la habilidad de transformar molculas orgnicas en productos orgnicos que se acumulan en un medio de cultivo. Estas conversiones han dado lugar a una prominente microbiologa industrial por la importancia de los productos que se han generado, especialmente agentes farmacuticos. La primera evidencia de transformaciones anlogas con elementos qumicos importantes, desde el punto de vista ambiental, surgi de un estudio de cidos alifticos clorurados. La transformacin de un compuesto orgnico por un microorganismo que es incapaz de usar el substrato como fuente de energa o como un elemento nutritivo esencial, se denomina cometabolismo. Esto da lugar a poblaciones activas que obtienen beneficios no nutricionales de los substratos que cometabolizan. Hay que destacar dos tipos de reacciones que se dan en cultivos puros de bacterias:

En uno, el compuesto cometabolizado es transformado slo en presencia de un segundo substrato, que realmente ser el compuesto que da lugar al crecimiento. Para hetertrofos, el substrato que aporta energa es orgnico. Para auttrofos, es inorgnico. En la otra reaccin, el compuesto esta metabolizado incluso en ausencia de un segundo substrato. Significado ambiental El cometabolismo es simplemente un tipo especial de transformacin microbiana. Esas transformaciones tienen una importancia considerable en la naturaleza y por ello han sido la base para la gran atencin otorgada al cometabolismo, y es por estas salidas medioambientales que el cometabolismo es considerado como un tipo especial de transformacin biolgica. Estas consecuencias ambientales son evidentes desde las caractersticas del proceso, especficamente la inhabilidad de los organismos de crecer a expensas del compuesto orgnico y la conversin del substrato en un producto orgnico que se suele acumular. Las reacciones cometablicas tienen impactos en la naturaleza diferentes a los impactos producidos por las biodegradaciones. Cuando las transformaciones tienen lugar no se sabe si el microorganismo tendr o no un segundo substrato disponible para crecer. Los organismos que llevan acabo estas reacciones cometablicas en laboratorio sonPseudomonas, Acinetobacter, Nocardia, Bacillus, Mycococcus, Achromobacter, etc. Existe un gran nmero de conversiones, reacciones y productos asociados con el cometabolismo. El cometabolismo genera productos orgnicos, pero el carbono en el substrato no es transformado en constituyentes tpicos de la clula. Esto es evidente en estudios de cultivos puros y en muestras de medios naturales. Muchos compuestos son cometabolizados en abonos o en aguas de alcantarillado. Dos efectos son inmediatamente evidentes:

El primero, debido al pequeo tamao de la poblacin o a la biomasa de los organismos, que intervienen en la transformacin de la mayora de los productos qumicos sintticos en superficie y por debajo de abonos y de aguas de alcantarillado, el proceso de transformacin de un elemento qumico por cometabolismo es bastante lento y el grado de conversin no

incrementa con el tiempo. Esto contrasta con productos qumicos usados como carbono y fuentes de energa porque el grado de metabolismo de esos substratos incrementa segn los organismos se multiplican.

Segundo, muchos productos orgnicos se acumulan como resultado del cometabolismo y tienden a persistir. Un ejemplo de cometabolismo en contaminantes viene dado por el hongo de races blancas, Phanerochaete chrysosporium, el cual degrada distintos tipos de compuestos organoclorados, incluyendo el DDT, PCBs, y clorodioxinas, bajo condiciones apropiadas. El sistema enzimtico responsable de esta degradacin es el de las peroxidasas, que los hongos emplean para degradar la lignina constituyente de las plantas, bajo condiciones normales. Los compuestos orgnicos, que pueden ser utilizados por organismos para obtener energa para su crecimiento, son los ms susceptibles de ser biodegradados en el medio ambiente. Los microorganismos que obtienen electrones y energa de las transformaciones, llevan acabo la mayora de las degradaciones que se producen en plantas de tratamiento biolgico de aguas residuales. Algunos compuestos, sin embargo, no se utilizan como fuente de energa para microorganismos, principalmente debido a que ningn organismo tiene las enzimas necesarias para su biodegradacin completa. Algunos de esos compuestos pueden transformarse mediante cometabolismo, que es la transformacin fortuita de un compuesto mediante enzimas o cofactores diseados para otros propsitos. Las conversiones cometablicas que parecen implicar un slo enzima, son las reacciones de hidroxilacin, oxidacin, desnitrificacin, hidrlisis, etc, pero muchas de las conversiones son complejas e implican varios enzimas. Incluso un substrato, que en la naturaleza mantendr el crecimiento de microorganismos, ser metabolizado por algunas bacterias en cultivo sin incorporacin de carbono en sus clulas. La mayora de las enzimas son bastante especficas en las transformaciones que catalizan, otras no lo son y transforman otros productos. Ejemplos excelentes de enzimas no especficas son las oxigenasas que inician la oxidacin de hidrocarburos como el metano y el tolueno. El metano es empleado por el metabolismo de varias bacterias ya que permite su crecimiento y constituye una fuente de carbono: CH4 + 2O2 CO2 + 2H2O + biomasa + energa Enzima Monooxigenasa El cometabolismo es muy importante para controlar la degradacin de compuestos qumicos biolgicamente resistentes, como el tricloroetileno (TCE), contaminante extendido en los ambientes subterrneos. La transformacin de TCE por bacterias metanotrficas es un cometabolismo aerobio y tiene lugar en dos fases:

Oxidacin de metano. Epoxidacin del TCE ( eliminacin del cloro mediante cometabolismo). La monooxigenacin del metano (MMO) inicia la oxidacin del metano formando metanol. Esto requiere, adems, oxgeno elemental y aporte de potencia reductora, designada por 2H. La MMO oxida tambin al TCE, convirtindolo en TCE epxido, compuesto inestable que se degrada qumicamente a una diversidad de productos que pueden ser mineralizados por otros microorganismos. Por esto la biodegradacin del TCE se efecta mediante cometabolismo El cometabolismo requiere de NADH para aportar el 2H. Si el organismo no dispone de sustrato donante, o no tiene reservas internas almacenadas para producir el NADH requerido, no se produce el cometabolismo. Oxidacin de metano (metabolismo normal)

Figura 6: Pasos de la transformacin del TCE por bacterias metanotrficas Un organismo cuyo substrato de crecimiento est contenido en una mezcla de muchas materias puede encontrar ventajas en oxidar compuestos que utilizan otros organismos. Al hacer disponibles los substratos a otros organismos, el primero de ellos obtiene mejor acceso a su substrato de crecimiento. En los sistemas ecolgicos complejos intervienen a menudo muchos microorganismos diferentes que trabajan juntos de forma simbitica para que todos puedan beneficiarse. Tanto si las reacciones son especficas como si no, se aprovecha el cometabolismo para biodegradar compuestos que permaneceran de otra manera persistentemente en el medio ambiente. SINTROFA El sintrofismo es la asociacin en la que el crecimiento de un organismo depende de la mejora con los factores de crecimiento, nutrientes o substratos aportados por otro organismo que vive cerca. A veces, ambos se benefician. Este tipo de mutualismo se denomina tambin alimentacin cruzada o fenmeno del satelitismo. Un ejemplo de sintrofa sera el de este esquema: La poblacin 1 puede metabolizar el compuesto A, formando el compuesto B, pero no puede ir ms all de este punto sin la cooperacin de otra poblacin porque le faltan las enzimas necesarias para efectuar la siguiente transformacin de la va. La poblacin 2 no puede usar el compuesto A, pero s el compuesto B a partir del cual forma el compuesto C. Ambas poblaciones, 1 y 2, pueden realizar los pasos posteriores a la formacin del compuesto C, produciendo as la energa necesaria y los productos finales que ninguna de las dos poblaciones podra producir por separado. La sintrofa permite a las poblaciones microbianas realizar actividades como la sntesis de un producto, que no podran llevar a cabo por separado. Un ejemplo clsico de dicha sintrofa es la que muestran Enterococcus faecalis y Escherichia coli. Ninguno de los dos organismos por separado puede convertir la arginina en putrescina. E. faecalis es capaz de transformar la arginina en ornitina, que E. coli utiliza para producir putrescina; E. coli puede usar la arginina y producir agmatina, pero no puede obtener putrescina sin ayuda. Una vez que se ha producido la putrescina, E. coli y E. faecalis pueden usarla. Las relaciones de sintrofa se basan frecuentemente en la capacidad de una poblacin de suministrar factores de crecimiento a otra. En un medio mnimo, Lactobacillus arabinosus y E. faecalis pueden crecer juntos, pero no por separado. De manera parecida, una poblacin mixta de especies de Nocardia y Pseudomonas puede degradar el ciclohexano, pero no puede hacerlo ninguna de las dos poblaciones por separado. La relacin se basa en la capacidad de Nocardia de metabolizar el ciclohexano, formando productos que alimentan a las especies de Pseudomonas. stas producen biotina y factores de crecimiento que las especies de Nocardia requieren para su crecimiento. BIODEGRADACIN Pesticidas El principal problema con respecto a productos qumicos fueron los pesticidas clorados, siendo el de mayor importancia el DDT. Dos caractersticas de los pesticidas clorados que conducen a un gran perjuicio son su resistencia a la biodegradacin y su hidrofobia. Esta ltima significa una fuerte afinidad a materia orgnica del suelo y tejidos grasos. Los pesticidas clorados son captados y concentrados por el plancton. Posteriormente se concentran en el tejido graso de los peces que comen el plancton y se concentran finalmente en pjaros y otros carnvoros, como el ser

humano. Esta tendencia a acumular biolgicamente propulsa sus impactos negativos en organismos superiores. La tendencia de los pesticidas clorados a su gran reparto entre el suelo y tejidos grasos fue anteriormente reconocida como uno de los aspectos de su resistencia a la biodegradacin por microorganismos. La estructura qumica de los pesticidas clorados los convierte adems, en escasamente susceptibles a reacciones de trasformacin biolgica, especialmente en condiciones aerobias. Los sustituyentes clorados y la gran ramificacin bloquean los lugares de ataque de las enzimas. Los pesticidas clorados son muy resitentes a la trasformacin en condiciones aerobias, pero no tanto a las condiciones anaerobias. Realmente, todos los pesticidas de la figura 1, excepto el heptacloro epxido, se transformaban en condiciones de metanognesis anaerobias. Una observacin interesante en el caso del DDT es que era rpidamente deshalogenado por reduccin a DDD y que el DDD desapareca tambin, pero ms lentamente. En la actualidad se reconoce corrientemente que la deshalogenacin reductora se produce en condiciones anaerobias fuertemente reductoras para todos los compuestos aromticos y alifticos clorados. Aunque esta observacin es interesante, y a veces importante, las condiciones de reduccin fuerte no se producen en todas partes en el medio ambiente, por lo que no puede contarse con ellas, en general, para llevar a cabo la eliminacin de toxicidad de compuestos clorados. El otro aspecto es que la halogenacin reductora no produce necesariamente la total destruccin del producto qumico. De ello es un ejemplo la formacin de DDD a partir de DDT. Los pesticidas basados en fsforo son en general muy txicos, pero expuestos al agua se hidrolizan bastante rpido de forma qumica o mediante enzimas. Los pesticidas de carbamato se transforman rpidamente en el medio ambiente mediante hidrlisis. Los pesticidas de s-triacina son biodegradables. La atracina es uno de los miembros de las striacinas que ms corrientemente se encuentran por ser uno de los herbicidas ms utilizado. La biodegradacin de la atracina implica la eliminacin en etapas de cadenas laterales alqulicas, seguida de desaminacin, deshalogenacin y escisin del anillo. Figura 1: Pesticidas clorados tpicos utilizados en el pasado. Figura 2: Otras formas de pesticidas de uso corriente. Detergentes sintticos Existen tres tipos bsicos de detergentes sintticos: aninicos, catinicos y no inicos. Los detergentes no inicos no estn ionizados y su solubilidad depende de polmeros de xido de etileno unidos a un extremo hidrfobo que disuelve las grasas. Un motivo de preocupacin en los ltimos aos ha sido el descubrimiento de que los detergentes no inicos del tipo alquilato tienden a persistir en aguas naturales. La relativa persistencia de alquilfenoles polietoxilados est relacionada con el grupo hidrfobo alquilo ramificado unido al anillo aromtico (ver figura 3). Generalmente, contienen 8 o 9 carbonos. El alto grado de ramificacin de estos grupos alquilcos imparte resistencia a la biodegradacin. La trayectoria de biodegradacin general en condiciones aerobias y anaerobias comienza con la degradacin de la cadena lateral del xido de etileno. La escisin de la cadena lateral del anillo aromtico deja un residuo de alquilfenol. Resulta tambin interesante el descubrimiento de que al clorar agua para suministro y aguas residuales, los grupos alquilo pueden llegar a clorarse o bromarse, lo que conduce a compuestos orgnicos halogenados de estructura

parecida a los pesticidas, pudiendo tener propiedades txicas. Incluso sin halogenacin, los residuos de alquilfenol polietoxilado muestran toxicidad a peces. Figura 3: Distintas clases de detergentes sintticos Hidrocarburos Los compuestos orgnicos constituidos exclusivamente de carbono e hidrgeno se denominan hidrocarburos. Una caracterstica comn de los hidrocarburos es que son biodegradables de forma aerobia. Sin embargo, la tasa de biodegradacin aerobia depende de la complejidad de la molcula. Los hidrocarburos grandes muy ramificados, o que contienen muchos anillos aromticos son difciles de degradar. Uno de los aspectos de su escasa biodegradabilidad es su baja solubilidad en agua. El otro es que la compleja estructura hace difcil que los organismos encuentren el lugar para realizar el ataque enzimtico inicial. El paso inicial en la degradacin de hidrocarburos por bacterias es, generalmente, la introduccin de oxgeno en la molcula con una oxigenasa, que requiere una inversin de energa en forma de NAD(P)H y oxgeno elemental. El hidrocarburo se oxida mediante dos electrones como NADH. La ventaja para los microorganismos es que los productos de las reacciones de oxigenacin estn ms disponibles. Especficamente los productos son fcilmente atacados en posteriores reacciones de deshidrogenacin e hidroxilacin, que producen NADH y son ms solubles en agua. En la actualidad son muchos los hidrocarburos aromticos que se sabe son biodegradables en ausencia de oxgeno, se han aislado organismos que efectan la biodegradacin de muchos hidrocarburos aromticos y se han descubierto trayectorias bioqumicas por medio de las que el oxgeno procedente del agua o de hidrocarburos carboxlicos se introduce en el anillo aromtico. En general, las reacciones anaerobias son bastante lentas comparadas con sus contrapartidas aerobias, pero se producen y tienen importancia en el caso de los hidrocarburos aromticos. Est surgiendo la evidencia de que los hidrocarburos alifticos tambin pueden degradarse en ausencia de oxgeno.

BTEX y MTBE: Los compuestos BTEX tienen un significado especial debido a que son txicos y ms solubles en agua que el resto de los hidrocarburos de la gasolina. Estos compuestos se biodegradan en condiciones aerobias. El paso inicial de oxidacin es difcil y requiere una oxidasa junto a oxgeno elemental y energa en forma de NADH. La biodegradacin de los BTEX la pueden iniciar muchas oxidasas distintas. La dioxigenasa aade dos tomos de oxgeno al anillo a la vez, mientras que la monooxigenasa aade uno. En todas las trayectorias de los hidrocarburos aromticos intervienen reacciones de oxidacin, hasta el extremo de que dos grupos hidroxilo quedan situados uno junto al otro en el anillo. El anillo se disocia entonces por la adicin de ms oxgeno, bien entre los dos carbonos unidos a los grupos hidroxilo (fisin orto) o a uno de los dobles enlaces adyacentes (fisin meta). Esto produce un compuesto aliftico carboxilado que puede ser posteriormente oxidado por las reacciones de deshidrogenacin e hidroxilacin habituales. Figura 4: Principales hidrocarburos aromticos constituyentes de la gasolina, conocidos generalmente como compuestos BTEX

Hidrocarburos aromticos policclicos ( PAH)

Los PAH se forman por la combustin incompleta de materia orgnica, de forma natural, y por actividad humana. Los PAH son biodegradables en condiciones aerobias. Los compuestos de dos a cuatro anillos son bastante fcilmente biodegradados por muchos organismos. Como en el caso de los compuestos BTEX, la oxidacin se inicia por oxigenasas que requieren oxgeno elemental. Los PAH de mayor nmero de anillos, sin embargo, son bastante resistentes a la biodegradacin, debido, de nuevo, a su complejidad y baja solubilidad.

Disolventes clorados y otros hidrocarburos alifticos halogenados. Los disolventes clorados son los contaminantes orgnicos ms frecuentes en aguas subterrneas. Los hidrocarburos alifticos clorados (CAH), y compuestos clorados relacionados, contienen, generalmente, uno o dos tomos de carbono y de uno a seis tomos de cloro. Los CAH ms corrientemente usados no son compuestos naturales, y quiz por esta razn no han evolucionado suficientemente los sistemas de enzimas capaces de degradarlos para hacer que sean ampliamente biodegradables. Esta naturaleza resistente se relaciona tambin con el hecho de que son muy resistentes a la descomposicin qumica, lo que es una de las razones principales por las que su uso comercial ha alcanzado tal xito. El orden de su resistencia a la degradacin biolgica est estrechamente relacionado a la fuerza del enlace halgeno-carbono. La relativa resistencia a la biodegradacin de productos orgnicos halogenados aumenta del bromo al flor, pasando por el cloro. Aunque los CAH son resistentes, pueden ser transformados biolgicamente en condiciones adecuadas. En primer lugar algunos pueden usarse como donantes de electrones para generar energa y crecimiento, tanto en condiciones aerobias como anaerobias. En segundo lugar, otros se transforman estrictamente mediante cometabolismo. En tercer lugar, algunos pueden usarse como aceptores de electrones, tanto para generar energa o por cometabolismo. Figura 5: Principales hidrocarburos alifticos clorados (CAH), que se han encontrado contaminando aguas subterrneas y las trayectorias de transformacin biolgica, cuya existencia es conocida (indicadas con una x)

Hidrocarburos aromticos clorados Los compuestos aromticos clorados comprenden bencenos clorados de anillo nico, fenoles, clorados y benzoatos clorados y compuestos de dos anillos, como los difenilos policlorados. Los compuestos de anillo nico son fcilmente biodegradables y sirven como sustratos primarios para energa de organismos y crecimiento en condiciones aerobias. La biodegradacin anaerobia de estos compuestos no se consigue tan fcilmente.

Difenilos policlorados ( PCB)

Pese a su naturaleza altamente resistente, los PCB pueden biodegradarse cuando se producen los adecuados microorganismos y condiciones ambientales. La degradacin de los PCB puede producirse tanto en condiciones aerobias como anaerobias. En general, los PCB menos clorados son ms fcilmente transformados de forma aerobia, mientras que los ms clorados se transforman ms fcilmente en condiciones anaerobias. En condiciones aerobias, la molcula de difenilo (armazn de la molcula de PCB) se degrada de forma parecida a otros hidrocarburos aromticos: aadiendo oxigenasa de oxgeno elemental a uno de los anillos aromticos produciendo grupos hidroxilo. Si la oxidacin contina, se produce la escisin de uno de los anillos, pudiendo conducir, eventualmente a

cido benzoico. Este cido sigue la trayectoria habitual de los hidrocarburos aromticos, su anillo se oxida, se escinde y contina la oxidacin. Los PCB con pocos tomos de cloro en la molcula pueden entrar fcilmente en la trayectoria de la oxidacin aerobia del difenilo, pero mayores cloraciones hacen difcil el ataque mediante enzimas del anillo. Los PCB ms sujetos a degradacin aerobia son los que contienen de uno a tres tomos de cloro en la molcula. Lo mismo que en otras deshalogenaciones los PCB actan como aceptores de electrones, lo que requiere la presencia de donantes de electrones. Una de las principales barreras para una deshalogenacin ms rpida es la insolubilidad de los PCB ms clorados y su enorme reparto entre las partculas del sedimento, hacindolas menos disponibles a la biodegradacin.

Pentaclorofenol:
El efecto combinado del gran reparto entre materia orgnica en el suelo y toxicidad hace algo difcil la biodegradacin aerobia de este compuesto. En el caso de la oxidacin aerobia, un primer paso es la deshalogenacin oxigenoltica. Este primer paso se produce mediante hidrlisis o por la accin de una enzima oxigenasa, oxgeno elemental y dos NAD(P)H. Tambin se produce la degradacin anaerobia, esto es de gran importancia, ya que las aguas subterrneas contaminadas suelen ser anaerobias. Esta degradacin anaerobia se produce fcilmente en cultivos mezcla. El PCP sirve como un aceptor de electrones en deshalogenacin reductora de la misma manera que en el caso de otros compuestos orgnicos halogenados alifticos o aromticos. Por ello a fin de conseguir la deshalogenacin anaerobia necesita estar presente un donante de electrones, como el acetato o el hidrgeno elemental. Es posible la completa deshalogenacin del fenol, por lo que el fenol se biodegrada de forma anaerobia. La mineralizacin del PCP en condiciones anaerobias puede suministrar los electrones necesarios para conducir la eliminacin reductora del cloro

Dioxinas:
La biodegradacin es una alternativa deseable, pero las dioxinas y los compuestos relacionados son muy resistentes a la biodegradacin. En muchos estudios sobre biodegradacin aerobia slo se observa una limitada transformacin de dioxinas, que generalmente supone la adicin de oxgeno con enzimas oxigenasas, dando como resultado la formacin improductiva de anlogos mono y dihidroxilados, que tienden a acumularse sin posterior degradacin. Sin embargo las bacterias que contienen dioxigenasas selectivas que sustituyen simultneamente un grupo OH en un carbono portador de un enlace ter y en un carbono adyacente sin sustituir conducen a la escisin de enlaces ter y a la mineralizacin del compuesto. Por otra parte, como en el caso de los PCB, la deshalogenacin es un proceso muy lento. Figura 7: Estructura de la dioxina clorada y otros compuestos relacionados. Explosivos Los principales explosivos son: TNT, RDX y HMX. Una caracterstica de ellos es la presencia de grupos nitroso (- NO2) en la molcula.

La transformacin del TNT produce generalmente la reduccin de un grupo nitroso para formar un grupo amino. Los productos de transformacin amnica estn sometidos a interacciones posteriores entre s y con compuestos del suelo, formando complejos estables mediante enlaces covalentes. Los productos que se forman son grandes e insolubles. Por ello la desaparicin del TNT se observa a menudo en entornos biolgicamente activos, pero no se produce corrientemente la mineralizacin. El RDX es ms fcilmente mineralizable que el TNT y no est sometido a procesos de transformacin parcial; sin embargo la tasa a la que el RDX desaparece habitualmente es ms lenta que la del TNT. La transformacin biolgica del HMX se produce principalmente en condiciones anaerobias, conduciendo a la formacin de intermedios mono y di nitrosos. Figura 8: Explosivos corrientes problemticos para el medio ambiente. Elementos inorgnicos: Los procesos microbianos pueden afectar a la evolucin de los contaminantes del medio ambiente inorgnicos. Aunque no se pude destruir a los elementos inorgnicos, los microorganismos pueden cambiar su especificidad de tal forma que sean sealadamente alteradas su movilidad y toxicidad. La precipitacin, volatilizacin, adsorcin y solubilizacin son las reacciones que alteran la movilidad de los elementos inorgnicos. Uno de los mtodos por los que los microorganismos pueden reducir concentraciones de elementos inorgnicos en el agua es mediante inmovilizacin en la biomasa de microbios, o exopolmeros microbianos. La adsorcin hidrfoba, la formacin de complejos o la incorporacin como cofactores esenciales son los mecanismos por los que los elementos inorgnicos pueden concentrarse en la biomasa. Existe el potencial de llevar a cabo la inmovilizacin y la peligrosidad de muchos compuestos inorgnicos peligrosos mediante procesos biolgicos. Sin embargo, las transformaciones biolgicas tambin pueden ocasionar el efecto inverso, ocasionado que sean ms mviles, ms dispersos y ms txicos.