Mtodo Kirby-Bauer

En el test de Kirby-Bauer, los filtros blancos que contienenantibitico son colocados en una placa con bacterias. Los halos blancos donde se observa un escaso crecimiento bacteriano indica susceptibilidad al antibitico testado.

El mtodo Kirby-Bauer (mtodo de difusin en agar) es empleado para determinar la sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibitico o quimioterpico. Este mtodo comprende lo que se denomina un antibiogramao prueba de susceptibilidad bacteriana frente a drogas especficas.

Contenido
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1 Forma de aplicacin 2 Comportamiento de inhibicin 3 Errores al realizar un antibiograma 4 Limitaciones de este mtodo 5 Vase tambin 6 Enlaces externos [editar]Forma

de aplicacin

Sobre la superficie de una placa de agar Mller-Hinton (medio de cultivo rico, diseado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad) se inocula una cantidad estandarizada de bacterias, sembrndolas de forma pareja para obtener despus de la inoculacin un "csped" bacteriano. A continuacin se colocan discos de papel de filtro impregnados con concentraciones conocidas de los diferentes antibiticos. La eleccin de los antibiticos a probar dependen del germen y del foco de infeccin. El antibitico difundir desde el papel filtro al agar de forma radial. Se incuba la placa durante 18-24 horas a 37 C (respetar este parmetro, porque temperaturas menores pueden disminuir

la velocidad del crecimiento del germen y la difusin del antibitico, dando halos irregulares difciles de medir), y luego se miden los halos de inhibicin de desarrollo, interpretndose de acuerdo a tablas confeccionadas previamente. Los resultados se expresan como:Sensible (S), Intermedio o Moderadamente sensible (I) y Resistente (R).

[editar]Comportamiento

de inhibicin

El tamao del halo de inhibicin de desarrollo variar en base a los siguientes parmetros o variables: 1. La concentracin de la droga. 2. Sensibilidad bacteriana. 3. Coeficiente de difusin de la droga en el agar. 4. Tiempo y temperatura de incubacin. 5. pH y composicin del medio. Se usan preparados comerciales que den resultados reproducibles, por ejemplo: agar Mller-Hinton. Son cultivos aceptados por el comit de la OMS para la normalizacin de las pruebas de susceptibilidad. 6. Profundidad del medio en las placas. Esto est estandarizado: se emplean placas de 9 cm de dimetro, y se agrega siempre el mismo volumen de medio de cultivo: 15 ml por placa. De esta manera las placas poseen siempre la misma altura de agar. 7. Tamao del inculo. Debe estar estandarizado ya que si ste es muy pequeo dar una sensibilidad mayor a la real, y si el inculo es muy denso pueden aparecer mutantes resistentes. En los mtodos de difusin de mutantes resistentes aparecen como colonias aisladas dentro del halo de inhibicin, por lo tanto esto indica que no se puede usar ese antibitico y se debe informar como resistente. La forma rigurosa de estandarizar un inculo es normalizando la turbidez por un mtodo fotomtrico utilizando una suspensin desulfato de bario como estndar, segn la escala de Mac Farland.

[editar]Errores

al realizar un antibiograma

Dentro de las posibilidades que se cuentan estn: densidad del inculo mal estandarizada, utilizacin de cultivos no puros, humedad o sequedad excesiva del medio de cultivo que puede conducir a un crecimiento demasiado confluente o pobre, y deterioro de los discos de aplicacin.

[editar]Limitaciones

de este mtodo

Es un mtodo solo cualitativo, orientado al tratamiento. No es aplicable a microorganismos de crecimiento lento ni a microorganismos anaerobios. Antibiticos como la polimixina o la vancomicina no tienen buena difusin en agar.

CONCENTRACIN MINIMA INHIBITORIA (CMI)

Los laboratorios de microbiologa clnica pueden escoger diferentes mtodos manuales y/o semiautomatizados para realizar una prueba rutinaria de sensibilidad antibacteriana . Esto incluye el antibiograma de disco de difusin de Kirby Bauer, el cual marc la pauta durante muchos aos de los estudios antimicrobianos; la dilucin agar; la microdilucin en caldo; los gradientes de antibiticos; y por ltimo, los mtodos automatizados de instrumentos los que proveen una incubacin nocturna, o una incubacin ms corta. El Laboratorio de Referencia viene realizando Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) utilizando un mtodo semiautomatizado desde hace ya algunos aos, conscientes de la importancia que tiene ofrecer a los mdicos la posibilidad de usar una amplia batera de antibiticos y sus concentraciones mnimas adecuadas para el tratamiento de las patologas clnicas en los distintos sitios del organismo. La CMI es la concentracin mnima de un antibitico expresada en ?g/mL que inhibir el crecimiento de un microorganismo in vitro. Los agentes antimicrobianos diluidos conjuntamente con una cantidad estandarizada del organismo puro aislado, se incuban de 18 - 24 horas y se dejan en observacin hasta que se desarrolle el crecimiento de las bacterias. La cantidad mnima de antimicrobiano necesaria para inhibir el crecimiento nos da la CMI. Uno de los cambios ms significativos que han ocurrido en las pruebas de sensibilidad antimicrobiana en las ltimas dcadas ha sido el desarrollo de un mtodo automatizado de incubacin corta capaz de proveer resultados de sensibilidad en 3.5 horas. El Laboratorio de Referencia tiene el placer de ofrecer el sistema VITEK? con el cual acortaremos el tiempo de reporte de sensibilidad antimicrobiana. Como regla general de la terapia de antibiticos, la concentracin del medicamento in vivo debe ser 2 - 4 veces la concentracin in vitro. Hay otros factores muy importantes que deben tenerse en cuenta para la eleccin de un antibitico: la edad; el peso; el estado general del paciente, como embarazo, anormalidades genticas o metablicas, la funcin heptica o renal; el lugar de la infeccin; el modo de accin del antibitico; su potencial txico y su interaccin con otros medicamentos. El xito de la terapia descansa en las manos expertas del mdico y del personal capacitado del laboratorio de microbiologa clnica para poder elegir el agente apropiado, determinar la dosis ms efectiva y la ruta de administracin de la droga, todo esto ayudado por los avances de la tecnologa.

La idea de un agente antimicrobiano ya fue lanzada por Ehrlich, con su Teora de la bala mgica, que consista en aplicar sustancias que slo matasen al patgeno y no al hospedador. AGENTES QUIMIOTERAPUTICOS Son aquellos que, por su escasa toxicidad, no afectan al paciente. En funcin a su origen, los clasificamos en:

Naturales: Antibiticos Sintticos: Sintticos Semisintticos: Agentes naturales a los que se les adiciona uno o varios radicales mediante mtodos qumicos. En funcin del tipo de microorganismo al que son sensibles, los clasificamos en:

Antibacterianos Antifngicos Antiprotozoarios Antivricos En funcin de su espectro de accin, los clasificamos en: De amplio espectro: Afecta a muchos microorganismos diferents. De espectro reducido. Afectan a muy pocos microorganismos. En funcin a su efecto antimicrobiano, los clasificamos en: Cidas: Si matan al microorganismo (bactericida) Estticos: Inhiben su crecimiento, pero no los mata. En funcin de su eficacia (xito), que se determina por distintos parmetros: Dosis teraputica: Dosis a la que ese compuesto se emplea clnicamente para curar una infeccin. Dosis txica: Dosis a la que el compuesto es txico para el hospedador. ndice teraputico: Es el cociente de dosis txica y dosis teraputica. Cuanto mayor es, mejor es el compuesto. (dosis txica/dosis teraputica) Concentracin mnima inhibitoria, CMI: Es la mnima concentracin del compuesto que inhibe el crecimiento de un microorganismo patgeno Concentracin mnima letal, CML: Es la concntracin mnima del compuesto que mata a un microorganismo patgeno. Los compuestos cidas tienen una CML de 2 a 4 veces mayor a la CMI. Para un esttico, la CML es de muchos rdenes mayor a la CMI. QUIMIOTERAPIA ANTIBACTERIANA MODO DE ACCIN ANTIBACTERIANO. DIANAS TERAPUTICAS.

Pared celular: La pared celular es la mejor diana para los antibacterianos, ya que nuestras clulas no tienen pared. Compuestos que afectan a la pared celular: Penicilinas Cefalosporinas

 Vancomicina Bacitracina

Membrana plasmtica: No es tan selectiva, ya que los eucariotas tienen membrana plasmtica. Compuestos que afectan a la membrana plasmtica: Polimixinas Los compuestos que atacan a la membrana plasmtica producen poros en ella, y al final acaba muriendo.

Ribosomas: Los antibacterianos que inhiben la sntesis de protenas unindose a la subunidad 30 s. son los aminoglicsidos: Estreptomicina Gentamicina Tetraciclinas Los que se unen a la subunidad 50 s. son: Cloranfenicol Macrlidos, tales como la eritromicina.

Sntesis del DNA: Las quinolonas inhiben la DNA-girasa. Ej. Ciprofloxacino (antrax) Transcripcin: La sntesis del mRNA es inhibida por un grupo de compuestos, entre los que destaca la rifampicina. Antagonistas metablicos: La PABA inhibe la sntesis de cido flico, que se forma a partir del cido para-aminobenzoico. PRINCIPALES QUIMIOTERAPUTICOS ANTIBACTERIANOS 1. ANTIBITICOS PENICILINAS Producidas por diferentes hongos como Penicillium o Aspergillus. A nivel industrial se obtienen a partir de P. Chrysogenum. Su estructura bsica es el cido 6-amino-penicilnico, al que se une una cadena lateral. La parte ms importante de este cido es un anillo -lactnico, formado por tres carbonos y un nitrgeno. Este anillo es destrudo por penicilinasas o -lactanasas. Las bacterias que contienen esta enzima son resistentes, por tanto, a la penicilina. Las penicilinas inhiben la sntesis del peptidoglicano de la pared celular. Inhiben una reaccin de transpeptidacin. Adems, activan las enzimas propias de la bacteria. Lisa la bacteria. Por ello, la penicilina es un bactericida. La penicilina natural (penicilina G o benzil penicilina) est formada por cido 6-aminopenicilnico y un bencilo como cadena lateral. Es muy activa frente a bacterias gram +, pero poco activa frente a las gram -. Debe ser administrada parenteralmente, ya que es sensible al cido del estmago. Las penicilinas biosintticas son aquellas en las que, el grupo que se une al 6-amino penicilnico proviene de una adicin. Aadiendo cido fenoxiactico al cultivo del hongo, generamos penecilina V o cido fenoxiactico. Puede ser administrada oralmente. Su espectro de accin es similar al de la penicilina G.

Las penicilinas ms usadas son las semisintticas: amoxicilina (clamoxil), ampicilina... Al 6amino-penicilnico se le adiciona, por sntesis qumica, una cadena lateral variable. Su ventaja e que su espectro de accin es mayor; son efectivas frente a algunas gram -. CEFALOSPORINAS La composicin bsica de las cefalosporinas es el cido 7-amino-cefalospornico y contiene un anillo -lactnico, y por tanto son antibiticos -lactnicos y pueden ser hidrolizados por microorganismos que contengan -lactanasas. Son originadas por el hongo Acremanium Chrysogenumy son similares a las penicilinas. Presentan un amplio espectro de accin y pueden ser aplicadas a los alrgicos a las penicilinas. Existen 3 grupos:

Primera generacin. Son ms efectivas frente a gram + que frente a gram -. Segunda generacin. Son efectivas frente a ambas gram. Tercera generacin: Son efectivas frente a gram - y capaces de llegar al SNC a grandes concentraciones. Son utilizadas frente a enfermedades graves. AMINOGLUCSIDOS Los aminoglucsidos son aminoazcares unidos por enlaces glucosdicos. Son producidos por bacterias del gneroStreptomyces. Destacan la estreptomicina y la gentamicina. Estos antibiticos son efectivos frente a gram -. Se unen a la subunidad 30 s. e inhiben la sntesis proteica y adems producen errores en la traduccin (confusiones en cadenas). Los aminoglucsidos son antibiticos de segunda eleccin, ya que se han descrito numerosas bacterias resistentes a estos antibiticos, y producen sntomas como sordera, daos renales, hepticos, vmitos, etc. TETRACICLINAS Las tetraciclinas son producidas por bacterias del gnero Streptomyces y poseen una estructura caracterstica formada por un anillo llamado naftaceno?. Son bacteriostticas y tienen un amplio espectro de accin; gram +, gram -, mycoplasmas (bacterias que carecen de pared celular). Inhiben la sntesis proteica por medio de la unin a la subunidad 30 s., impidiendo la unin del aminoacil-t-RNA al locus. Las tetraciclinas se usan en clnica y en tratamientos largos. Producen diarreas, daos hepticos, renales, etc. MACRLIDOS Los macrlidos estn formados por un anillo denominado lactonico?, unido a diversos azcares. El ms empleado es la eritromicina, producido por Streptomyces erythraeus. Es un antibitico bacteriosttico que inhibe la sntesis de protenas por unin a la subunidad 30s. del cromosoma bacteriano. En concreto, inhibe la elongacin de la cadena proteica durante la traduccin, ya que impide la translocacin del peptidil-t-RNA del locus A al . La eritromicina es un antibitico que se emplea en personas alrgicas a la penicilina y est recomendada para la lelgionelosis (Legionella pneumophila) CLORANFENICOL El cloranfenicol es producido por la bacteria Streptomyces venozuelae?. Es un antibitico, pero en la actualidad se sintetiza qumicamente. Es un antibitico bacteriosttico de amplio espectro de accin. Inhibe la sntesis proteica mediante la unin a la subunidad 30s. del

ribosoma. Impide la sntesis de enlaces peptdicos en las protenas, produce anemia y disminucin del nivel de leucocitos en sangre. Es el ltimo antibitico que se utiliza para curar una enfermedad. POLIPEPTDICOS Los polipeptdicos son polipptidos unidos por enlaces peptdicos. Son polipptidos no sintetizados en ribosomas sino por unas enzimas especiales denominadas peptidosintetasas, que forman y unen enlaces y pptidos. Algunos de los aminocidos formados son raros, con configuracin D, o fuera del grupo de los 2 aminocidos esenciales. Ej. D-ornitina. La bacitracina es el ms utilizado, y es produida por Bacillus lichoniformis. Su modo de accin es el siguiente: Afecta a la sntesis del peptidoglicano de la pared celular. Inhibe el transporte del peptidoglicano desde la membrana plasmtica a su lugar habitual en la pared celular. Esto se debe a la unin de la bacitracina al bactoprenol (transportador de la molcula). 2. DE SNTESIS SULFAMIDAS Las sulfamidas presentan una estructura bsica que es la sulfamilamida. Son anlogos estructurales del cido para-aminobenzoico, que es empleado por bacterias para sintetizar cido flico, que interviene en la sntesis de DNA y t-RNA. Las mujeres no sintetizan cido flico. Lo deben tomar como vitamina. Lo que hacen las sulfamidas es inhibir la sntesis del cido flico, compiten con el cido flico. Las sulfamidas se usan poco en clnica, ya que se han descrito numerosas resistencias de bacterias y efectos secundarios (roncha, eccemas, fiebre... patologas alrgicas en general.) QUINOLONAS Son los componentes quimioteraputicos ms caros y ms de moda. Su estructura est basada en el anillo 4-quinolona. La primera que se sintetiz fue el cido nalidxico, en 1962. Ms recientemente se han sintetizado las fluoroquinolonas porque tienen un tomo de flor en el centro del anillo. Ej: Ciprofloxacino (carbunco) Son bactericidas. Inhiben la DNA-girasa bacteriana implicada en giros negativos en la hlice del DNA, necesarios en la transcripcin. Inhiben la sntesis del DNA y RNA. Son, por tanto, letales . Su espectro de accin es amplio y se emplea para el tratamiento de infecciones cutneas, urinarias, de transmisin sexual, gastrointestinales... Sus efectos secundarios son gastrointestinales. Por qu ciprofloxacina para el carbunco? La cepa de carbunco se puede manipular genticamente, y hay que utilizar un antibitico para el que an no se ha descrito resistencia. QUIMIOTERAPIA ANTIFNGICA Las clulas de los hongos son eucariotas, y esto implica efectos secundarios en las clulas humanas, ya que tambin son eucariotas. En la actualidad existen numerosas infecciones fngicas en pacientes inmunodeprimidos. Ej. Transplantes. No hay un tratamiento altamente eficaz para las infecciones fngicas. Existen 3 dianas de ataque: 1. INHIBIDORES DEL ERGOSTEROL El ergosterol est presente en la membrana plasmtica de hongos. En humanos tenemos colesterol. Hay dos tipos de compuestos que afectan al ergosterol: ANTIBITICOS POLINICOS

La anfotericina B, producida por Streptomyces, se une al ergosterol de la membrana, alterando la permeabilidad de sta, provocando la muerte de la clula. Ej. Enfermedades diseminadas o sistmicas producidas por Aspergillus fumigatus. ANTIBITICOS AZOLES Los azoles inhiben la sntesis del ergosterol, alteran la permeabilidad de la membrana y producen la muerte celular. Existen 3 azoles:

Miconazol Ketoconazol Clotrinazol Los tres son de uso tpico en forma de crema, en dermatomicosis. Ej. Candidiasis (bucal o vaginal), pie de atleta... El fluconazol se emplea para infecciones sistemicas, por ejemplo, de la bacteria Candida. 2. INHIBIDORES DE LA SNTESIS DE CIDOS NUCLEICOS La 5-fluorocistosina se emplea para infecciones sistmicas, como por ejemplo, de Candida. Se integra en la clula en forma de 5-fluorouracilo y altera la estructura del RNA, por lo que la clula muere. Los efectos secundarios son similares a los dems efectos antifngicos; daos hepticos y renales. 3. INHIBIDORES DE MITOSIS La grisefulvina? Es un antibitico producido por Penicillium griseofuvlum?. Es un inhibidor de la polimerizacin de mirotbulos del huso mittico, con lo que inhibe la divisin celular. Se emplea tpicamente o por va oral, y su efectividad es baja.