Manual de Medios de Cultivo
Manual de Medios de Cultivo
Manual de Medios de Cultivo
Tiene en sus manos la 4ª Edición del Manual Básico de Microbiología CULTIMED publicado por
Panreac Química S.A. Esta nueva edición revisada y aumentada incluye todos los nuevos productos
que hemos incorporado desde que se realizó la primera edición en 1996. Se han modificado algunas
formulaciones para adaptarlas a las especificadas en distintas Normas Internacionales.
El programa actual incluye los medios de cultivo más empleados en microbiología de alimentos y de
aguas, así como algunos para microbiología clínica. La mayoria de ellos están disponibles en distintos
formatos, para facilitar el más adecuado a las necesidades específicas del consumidor. Estos incluyen
ingredientes para la preparación de medios, lo que permite preparar medios con composiciones
individualizadas, medios deshidratados para la preparación de placas por parte del usuario,
placas preparadas listas para usar, así como tubos y frascos de medio formulado.
Las placas preparadas para análisis de aguas incluyen todos los parámetros definidos en la directiva
CE/98/83 para el análisis microbiológico de aguas destinadas a consumo público. Las formulaciones
de estos medios son las definidas en las correspondientes normas ISO y destacan especialmente las
placas preparadas de agar m-CP para la enumeración de Clostridium perfringens, tal y como se indica
en dicha directiva.
En lo relativo al control de higiene, para el control de puntos críticos dentro de sistemas ARCPC, el
programa de placas preparadas CULTIMED ofrece los medios más usados para este fin. Cada producto
viene caracterizado por su correspondiente Ficha Técnica. En cada ficha se describen las aplicaciones,
historia y fundamento del medio, así como las instrucciones para la preparación y el modo de empleo
aconsejado. Cuando se describe una metodología está basada en publicaciones científicas reconocidas.
Sin embargo pueden introducirse las modificaciones que el usuario considere oportunas.
La composición de los medios está descrita para cada uno de ellos en cantidades aproximadas por litro
de medio a preparar.
También se incluyen informaciones prácticas sobre productos auxiliares, tinciones y otros productos
relacionados. Además en el catálogo de reactivos Panreac se pueden encontrar muchos otros productos
de aplicación en microbiología como sales de alta pureza par la preparación de medios especificos.
La gama de productos para microbiología bajo la marca Cultimed de Panreac Química, S. A. ha ido
creciendo y adaptandose a sus necesidades a lo largo de estos años, gracias a la confianza y
comunicación con nuestros clientes, porque durante todo este tiempo hemos mantenido un excelente
nivel de calidad, unos precios competitivos y un fácil acceso a los productos a través de la extensa red
de distribuidores de Panreac Química S.A.Vamos a seguir creciendo en este campo y para ello
contamos con nuestra experiencia y su colaboración. Queremos que CULTIMED satisfaga sus
necesidades en el campo del control microbiológico de alimentos y aguas. Háganos saber que necesita
y mientras tanto esperamos que utilize este manual en su trabajo diario. Gracias por su confianza.
Noviembre de 2002
SUMARIO
V Comparación de Denominaciones
VI Aplicaciones
(Determinaciones más Habituales en
la Industria Alimentaria y Cosmética)
vi
Conservación de los medios preparados Conservación de los medios preparados,
Lo más recomendable es preparar el medio cuando listos para su uso
se va a emplear, aunque en muchos casos por razo- Los medios preparados listos para usar tienen un
nes obvias una parte del medio preparado se consu- tiempo limitado de conservación, que es de varios
me y el resto se guarda como medio preparado. El meses si las condiciones de almacenamiento y trans-
tiempo de vida del medio preparado dependerá de la porte son las adecuadas.
propia naturaleza del medio, de la hermeticidad de Se recomienda su almacenamiento por regla general
los recipientes que lo contienen, de la temperatura por debajo de los 20ºC y protegidos de la luz.
de conservación y de las condiciones medioambien- Algunos medios deben conservarse entre 2-8ºC,
tales. Si la hermeticidad es buena y la temperatura siendo este requisito especificado en la etiqueta del
baja, 2-8ºC, la vida del medio puede llegar a ser de 4 producto. Los medios de cultivo con Agar no deben
a 6 semanas. De todas formas la refrigeración favore- guardarse por debajo de 0ºC, ya que se alteraría la
ce la deshidratación y en algunos casos, como por estructura del gel.
ejemplo, los medios para anaerobios, la conservación La pérdida de agua puede provocar precipitados o
es mejor a temperatura ambiente que en frigorífico. hacer que cristalicen ciertas sustancias del medio
Se deben evitar las condensaciones ya que el depó- de cultivo, así como originar grietas en las placas
sito de gotas de agua podrá ser causa de una altera- preparadas.
ción casi inmediata del medio. Tampoco deben em- En los medios de cultivo que deben refundirse y que
plearse medios preparados en los que se observe un deben contener aditivos lábiles, se suministra el
efecto de deshidratación. medio basal preparado y según la necesidad se
deben añadir los aditivos de forma estéril.
Conservación de los medios
deshidratados Refundido de medios sólidos
Cuando se precisa refundir los medios sólidos, pre-
Como regla general y si no se establecen condiciones
parados y estériles en frascos y tubos, para verterlos
particulares los medios deshidratados deben almace-
en placa, es aconsejable hacerlo en baño maría, en
narse en lugar fresco, seco y al abrigo de luz directa
microondas o en autoclave a vapor fluente. En ningún
del sol.
caso debe aplicarse calor directo.
Existen unos medios en concreto, que requieren un
Una vez fundidos, deberán dejarse enfriar hasta unos
almacenamiento entre 2-8°C, que son:
50ºC para añadir los aditivos, si fuera necesario y para
414703 Selenito Verde Brillante, Caldo distribuirlos o sembrarlos. Hay que tener en cuenta
414680 Marino, Agar que los medios refundidos tienen una cierta tenden-
413824 Selenito, Base de Caldo cia al oscurecimiento y precipitación, que aumenta
414698 Marino, Caldo cuando se mantienen fundidos durante periodos de
413809 Selenito y Cistina, Caldo tiempo prolongados y a temperaturas entre 45-65ºC
414722 Emulsión Yema de Huevo y que ello puede suponer una pérdida de las carac-
414723 Emulsión Yema de Huevo-Telurito terísticas nutritivas o selectivas del medio, por lo que
414724 Potasio Telurito solución 3,5% es aconsejable, no fundirlos más de una vez y no
En la manipulación de los frascos se debe procurar mantenerlos en el calor largos periodos de tiempo.
que las aperturas y cierres sean los menos posibles y En este sentido son recomendables los métodos rápi-
que el tiempo durante el cual el frasco permanece dos como el que se obtiene con el fundido de medios
abierto sea el mínimo. De lo contrario el medio se irá en el microondas, donde se debe dosificar la intensi-
rehidratando, con lo que comenzará a apelmazarse y dad de la radiación y durante tiempos lo más cortos
endurecerse, ya que son generalmente higroscópicos. posibles. Las fuertes intensidades de radiación, pue-
Incluso podría llegar a tener lugar un crecimiento bac- den provocar refundidos parciales, ebulliciones súbi-
teriano en superficie. En estas condiciones debe dese- tas con eventuales derrames del medio pudiendo
charse el producto. alterar las cualidades del mismo.
vii
Destrucción y desinfección Medios para técnica de filtro de membrana,
Una vez realizados los cultivos, el medio debe ser recomendaciones:
autoclavado a 121ºC durante 30 minutos antes de su La utilización de las técnicas de filtración se han
desecho definitivo. De igual manera se debe proceder impuesto en diversas disciplinas por una serie de
con el material de laboratorio empleado en los culti- ventajas que aporta a distintas problemáticas. La fil-
vos antes de su lavado y nuevo uso. tración permite la concentración de grandes volú-
menes de líquidos con pequeñas poblaciones de
Control de Calidad
microorganismos, permite separar a los microorga-
Los ingredientes que forman parte de los medios de nismos del medio en que se encuentran, incluso
cultivo presentan ciertas oscilaciones debido a su ori- transferirlo a otros, sin interrumpir su ciclo de creci-
gen biológico. Las formulaciones descritas para cada miento.
medio son por tanto aproximadas, ya que estas osci- Esencialmente la técnica consiste en filtrar el pro-
laciones en las propiedades de los ingredientes ducto a través de un filtro de 0,22 micras o 0,45
deben ser compensadas para obtener medios de cul- micras, según determinación, ayudado por un sis-
tivo constantes. Nuestros laboratorios disponen de tema de vacío. Si el fluido filtrado contenía inhibido-
una cepoteca formada por cepas patrón procedentes res, se lava la membrana varias veces para asegu-
de ATCC o de CECT para realizar el control micro- rar su eliminación. La membrana se recupera de
biológico de los medios de cultivo y garantizar la forma aséptica y se coloca en el medio de cultivo
constancia de las características de éstos. adecuado según la determinación que se desea
En la ficha de cada medio de cultivo se detalla el con- realizar.
trol de calidad correspondiente. Básicamente consta Para la enumeración de colonias, se utiliza un
de dos apartados; uno físico-químico en el que se medio sólido o una almohadilla absorbente impreg-
verifica el aspecto, la solubilidad y el pH del medio y nada de medio líquido. La membrana debe entrar
otro microbiológico. En éste se realiza un control de en contacto con el medio sin que queden burbujas
crecimiento de las cepas patrón y en algunos casos, de aire entre ellos que limitaría el crecimiento de los
la tasa de recuperación. microorganismos. Por regla general los medios
usuales pueden utilizarse en estas técnicas, sin
Caducidad embargo en la microbiología de aguas se han desa-
Nuestros medios deshidratados tienen una caduci- rrollado unos medios y un tamaño de placa, para
dad general de 4 años*, a excepción de los enume- utilizar en estas técnicas.
rados a continuación, cuya caducidad les indica-
mos:
413824 Selenito, Base de Caldo 3 años
413809 Selenito y Cistina, Caldo 3 años
414722 Emulsión Yema de Huevo 6 meses
414723 Emulsión Yema de Huevo-Telurito 6 meses
414724 Potasio Telurito sol. 3,5% 1 año
414703 Selenito Verde Brillante, Caldo 3 años
Nuestros medios preparados tienen un periodo de
vida de meses, más o menos largo dependiendo de
su presentación. Las placas para microbiología de
aguas y las placas de contacto tienen por regla
general 7 meses, a excepción de:
425463.0922 m-CP, Agar 45 días
424955.0922 y
444955.0922 Tergitol 7, Agar 6 meses
434855.0922 Rosa de Bengala y
Cloranfenicol, Agar 4 meses
Los medios utilizados en los análisis de rutina tienen
3-4 meses de vida cuando están distribuidos en
placas de 90 mm, cuando se presentan en tubos o
frascos suelen tener 12 meses de vida.
viii
Medios de Cultivo
Deshidratados
Agua de Peptona
Peptone Water
Cód.: 413794 Envase: 500 g
Se emplea como diluyente en muestras alimentarias, aguas y materiales diversos. Para la realización de la
prueba del Indol en aquellos microorganismos capaces de producirlo.
Fundamento Preparación
La peptona tiene una elevada concentración de Triptófano, Suspender 15 g en 1 l de agua destilada; agitar hasta disolu-
el cual es degradado a Indol por un cierto número de micro- ción total. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
organismos entre ellos E. coli. La detección de este produc-
to se hace añadiendo el reactivo de KOVACS después de la Modo de empleo
incubación (ver pág. IV - 8). Este medio es adecuado para Tratar según los fines a conseguir.
determinar los organismos Indol-positivos y puede utilizarse
en lugar de los Caldos Triptófano. En usos generales se
puede emplear para el cultivo de una gran variedad de Reactivos auxiliares
microorganismos, siempre y cuando no presenten exigen- Ref. Descripción Envase
cias particulares.
252908 Reactivo de Kovacs DC * 100 ml
Fórmula (por litro) * Producto Opcional
Peptona ......................................................... 10 g
Sodio Cloruro ................................................ 5 g
pH final: 7,2 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco-crema. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Se emplea como diluyente de muestras originales de productos alimenticios como leche y sus derivados,
concentrados y productos de origen animal. También se emplea como caldo de enriquecimiento no selecti-
vo, especialmente de Enterobacteriáceas patógenas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco crema a tostado claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 19430 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Bibliografía
Meat and Meat Products-Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Preparación
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco crema a tostado claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 19430 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Satisfactorio
Bibliografía
Ph. Eur. IV (2002)
BP (2000)
Antibióticos nº 1, Medio
Antibiotic Medium nº 1
Cód.: 413735 Envase: 500 g
Antibióticos nº 2, Medio
Antibiotic Medium nº 2
Cód.: 413736 Envase: 500 g
Antibióticos nº 3, Medio
Antibiotic Medium nº 3
Cód.: 413737 Envase: 500 g
Antibióticos nº 5, Medio
Antibiotic Medium nº 5
Cód.: 413738 Envase: 500 g
Antibióticos nº 8, Medio
Antibiotic Medium nº 8
Cód.: 413739 Envase: 500 g
Antibióticos, Medio nº 1 nº 2 nº 3 nº 5 nº 8 nº 11
Extracto de Carne 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g
Extracto de Levadura 3,0 g 3,0 g 1,5 g 3,0 g 3,0 g 3,0 g
D(+)-Glucosa 1,0 g — 1,0 g — — 1,0 g
Peptona de Caseína 4,0 g — — — — 4,0 g
Peptona de Gelatina 6,0 g 6,0 g 5,0 g 6,0 g 6,0 g 6,0 g
Potasio di-Hidrógeno Fostato — — 1,32 g — — —
di-Potasio Hidrógeno Fosfato — — 3,68 g — — —
Sodio Cloruro — — 3,5 g — — —
Agar Bacteriológico 15,0 g 15,0 g — 15,0 g 15,0 g 15,0 g
Total 30,5 25,5 17,5 25,5 25,5 30,5
pH: (±0,2) 6,6 6,6 7,0 7,9 5,7 7,9
Medios
Antibiótico nº 1 nº 2 nº 3 nº 5 nº 8 nº 11
Ampicilina l
Bacitracina l
Canamicina l
Carbomicina l
Cefalotina l l
Cloranfenicol l
Clorotetraciclina l
Eritromicina l
Estreptomicina l l
Gentamicina l
Neomicina l
Oleandomicina l
Oxitetraciclina l
Paramomicina l
Penicilina l l
Tetraciclina l
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Antibióticos nº 1, Medio
Antibióticos nº 2, Medio
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P Satisfactorio
Micrococcus luteus ATCC 10240 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio
Antibióticos nº 3, Medio
Antibióticos nº 5, Medio
Antibióticos nº 8, Medio
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado claro. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-48 horas, y añadidos 50 ml de Emulsión de Yema de Huevo-Telurito.
Halos de
Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia
Lecitinasas
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido — —
Proteus mirabilis ATCC 25933 Satisfactorio Marrón —
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio Negro +
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Moderado Negro —
Bibliografía
J. App. Bact., 27: 78-82 (1964)
J. App. Bact., 25: 12-19 (1962)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea como medio diferencial para Enterococos y se recomienda para su aislamiento e identificación
presuntiva.
Historia Preparación
Rochaix fue el primero que demostró que la hidrólisis de la Disolver 64 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
esculina por los enterococos era una prueba apta para su hasta ebullición. No sobrecalentar. Esterilizar a 121ºC
identificación. Más tarde Meyer y Schonfeld demostraron durante 15 minutos.
que esta hidrólisis en medio biliar era la mejor prueba dife-
rencial para enterococos. La formulación del medio corres- Modo de empleo
ponde a la dada por Swan. El medio se puede emplear en placas o en tubos, en este
caso solidificándolo en plano inclinado.
Fundamento Puede añadirse suero de caballo una vez esterilizada, a
La presencia de la bilis de buey no inhibe el crecimiento de razón de un 5% en la concentración final. Para algunos
los enterococos, pero sí el del resto de las bacterias Gram- autores esta adición mejora el crecimiento de los
positivas. Esta característica junto con la capacidad de Enterococos, para otros no es apreciable. Incubar entre 35º
hidrolizar la esculina son propiedades constantes de los y 37ºC de 18 a 24 horas.
Enterococos. El producto resultante de la hidrólisis de la Se acepta que el material sembrado no contiene
esculina es la esculetina que forma un complejo con el Enterococos, si no hay oscurecimiento del medio después
Hierro(III) Citrato de un color pardo oscuro. de 3 días de incubación.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado. pH: 6,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Bact. Proceedings M33. (1969)
J. Clin. Path., 7: 160 (1954)
Clin. Lab. Forum. (1970)
Fundamento Preparación
Por la presencia simultánea de violeta cristal y sales bilia- Suspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
res se asegura en gran parte la inhibición de la flora tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Dejar enfriar a
acompañante. La degradación de la glucosa a ácido se 45ºC y emplear de inmediato. Se puede esterilizar con cui-
pone de manifiesto por el cambio de color del indicador. dado (30 minutos vapor fluente, por ejemplo).
La presencia de halo en estas colonias corresponde a un NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
precipitado biliar.
La mayoría de organismos que presentan estas característi- Modo de empleo
cas son Enterobacterias, sin embargo no es completamen- Transferir 1 ml de la muestra a analizar y 1 ml de sus suce-
te específico, por ejemplo, las Aeromonas se comportan de sivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con el
forma similar. medio enfriado a una temperatura entre 45º y 48ºC, añadir
a cada placa 15 ml del medio líquido. Homogeneizar giran-
Fórmula (por litro) do lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriar
Mezcla de Sales Biliares ........................ 1,5 g hasta solidificación. Añadir a cada placa 10 ml más del
Violeta Cristal.......................................... 0,002 g medio líquido y volver a dejar solidificar. Al haber asegurado
Rojo Neutro ............................................ 0,03 g la anaerobiosis no tendrá lugar el crecimiento de bacterias
D(+)-Glucosa .......................................... 10,0 g Gram-negativas no fermentadoras. Incubar a 37ºC durante
Extracto de Levadura ............................ 3,0 g 24 horas. La formación de colonias de color púrpura viole-
Peptona de Gelatina ............................... 7,0 g ta, rodeadas de un halo del mismo color, indica presencia
Sodio Cloruro ........................................ 5,0 g de Enterobacterias.
Agar ...................................................... 15,0 g
pH final: 7,4 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rojizo. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 84: 381 (1962)
J. Appl. Bact., 26: 444-452 (1963)
Historia Preparación
El primer trabajo original fue de M. H. Mac Crady en 1932 Suspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
para el análisis de leches. Más tarde Bartram y Black lo hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Se puede esterili-
emplearon para el recuento de Coliformes en leche cruda, zar con cuidado (30 minutos vapor fluente, por ejemplo).
pasteurizada y certificada. Así mismo Miller y Prickett lo NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
emplearon en un caso práctico de recontaminación de la
leche. La formulación de este medio corresponde a las Modo de empleo
recomendaciones de la APHA. Transferir 1 ml de la muestra a analizar y 1 ml de sus suce-
sivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con el
Fundamento medio enfriado a una temperatura entre 45º y 48ºC, añadir
La presencia simultánea de violeta cristal y sales biliares a cada placa 15 ml del medio líquido. Homogeneizar giran-
asegura la inhibición del crecimiento de las bacterias Gram- do lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriar
positivas. A su vez la fermentación de la lactosa da lugar hasta solidificación. Añadir a cada placa 10 ml más del
por un lado a la formación de ácido, que hace virar a rojo el medio líquido y volver a dejar solidificar. Incubar a 37ºC
indicador, y por otro a la precipitación de las sales biliares durante 24 horas para el recuento de Coliformes.
alrededor de las colonias. Las colonias, presentan un color
rojo púrpura y aparecen rodeadas por una franja rojiza.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rojizo. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA. (1976)
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA. (1978)
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de Salmonella en leches y productos lácteos, carnes y alimen-
tos en general.
Fundamento Preparación
La Bilis y el Verde Brillante inhiben el crecimiento de la flora Disolver 63 g en 1 l de agua destilada. Calentar (máximo
Gram-positiva. Las bacterias reductoras del tetrationato 50°C) y agitar hasta disolución total. Distribuir en tubos
como Proteus y Salmonella crecen de forma óptima, estériles repartiendo el precipitado de calcio carbonato. NO
mientras que Coliformes y flora habitual del intestino ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Los mejores enriqueci-
queda inhibida. mientos se consiguen después de dejar el Caldo preparado
Puede añadirse Novobiocina a una concentración de en reposo 2 ó 3 días a temperatura ambiente.
0,04 g/l de Caldo para inhibir el crecimiento de Proteus.
El carbonato cálcico neutraliza el ácido formado en la Modo de empleo
reducción del tetrationato. Sembrar la muestra e incubar a 37ºC durante 24 horas.
Pasado el tiempo de incubación sembrar en medio selectivo.
Fórmula (por litro)
Bilis de Buey desecada ............................ 8,0 g
Potasio Tetrationato .................................. 20,0 g Reactivos auxiliares
Verde Brillante........................................... 0,07 g
Ref. Descripción Envase
Calcio Carbonato...................................... 20,0 g
Novobiocina *
Peptona de Carne .................................... 8,6 g
Sodio Cloruro ........................................... 6,4 g * Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: presenta un precipitado de Calcio Carbonato.
Color: crema a lo sumo con tinte verdoso. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Crecimiento
Microorganismos Concentración del inóculo 6 horas 24 horas
Escherichia coli ATCC 11775 aprox. 99% < 30% < 5%
Salmonella typhimurium ATCC 14028 aprox. 1% > 70% > 95%
Bibliografía
J. Clin. Path., 12: 568-571 (1959)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea como medio selectivo y diferencial para determinar la densidad relativa de bacterias Coliformes
en agua, aguas residuales y alimentos.
Historia Preparación
Se trata de una réplica del medio propuesto por Noble y Suspender 20,6 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Tonney para la determinación de bacterias Coliformes en tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
aguas. Está concebido como indicador del grado de conta- esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
minación de la muestra.
Modo de empleo
Fundamento El medio preparado es fotosensible por lo que se reco-
La presencia conjunta del verde brillante y de la bilis hacen mienda almacenarlo al abrigo de la luz, y prepararlo poco
que el medio sea selectivo para bacilos Gram-negativos, los antes de su utilización.
cuales al fermentar la lactosa dan lugar a colonias intensa- Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
mente rojas rodeadas de un halo rosa, que contrastan con
el fondo verde azulado del medio.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: púrpura claro. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Noble y Tonney, Journal of American Water Works Association, 27: 108 (1935)
Se emplea para la investigación y recuento de bacterias Coliformes en aguas, leches, productos alimenticios
y cualquier material de interés sanitario. Recomendado para el enriquecimiento selectivo y enumeración de
E. coli, y para la técnica del NMP.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige verdoso. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Meat and Meat products-Detection and Enumeration of Presumptive coliform Bacteria and Presumptive Escherichia coli. ISO 3811. (1975)
Historia Preparación
Este medio se basa en la formulación original dada por Suspender 36 g en 1 l de agua destilada, añadir 10 ml de
Bordet y Gengou a la que se han introducido algunas modi- glicerina y mezclar bien. Calentar y agitar hasta ebullición y
ficaciones hasta tener la fórmula actual. Su principal aplica- disolución total. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
ción ha sido el diagnóstico de la tos ferina. Como se trata Dejar enfriar hasta 45ºC y añadir asépticamente 150-200 ml
de una base se debe añadir sangre desfibrinada. de sangre de caballo desfibrinada y estéril. Mezclar bien sin
hacer burbujas y distribuir en placas de Petri estériles. Antes
Fundamento de distribuir puede añadirse el antibiótico.
El medio con glicerina y sangre está indicado para el cre- Las placas deben estar más bien llenas de medio y no deben
cimiento de Bordetella pertussis y Bordetella parapertus- secarse puesto que tendrán incubaciones prolongadas.
sis. Se puede conseguir que el medio sea selectivo si se
añaden 0,25 unidades de Penicilina por cada ml. En las Modo de empleo
muestras de secreciones nasofaríngeas hay mucha flora Incubar a 37ºC de 3 a 4 días.
acompañante de Bordetella resistente a la Penicilina, por Las colonias de Bordetella pertussis son prácticamente
lo que se recomienda la adición de 40 mg de cefalexina transparentes, poco definidas, brillantes y de diámetro
por litro de medio. inferior a 1 mm con un estrecho halo de hemólisis tipo:
beta. Bordetella parapertussis tiene un crecimiento más
Fórmula (por litro) rápido. Las colonias son similares y dan una coloración
Infusión de Patata....................................... 4,5 g verde oscura al medio.
Proteosa Peptona....................................... 10,0 g Las colonias de cocos Gram-positivos son opacas y más
Sodio Cloruro ............................................. 5,5 g oscuras.
Agar............................................................ 16,0 g Pasados 6 días de incubación sin crecimientos característi-
pH final: 6,7 ± 0,2 cos puede considerarse que las muestras son negativas.
Reactivos auxiliares
Ref. Descripción Envase
131339 Glicerina PA-ACS-ISO 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
Sangre de Caballo
Penicilina *
Cefalexina *
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: puede tener un ligero precipitado.
Color: beige. pH: 6,7 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 Satisfactorio
Bordetella pertussis ATCC 8467 Satisfactorio
Bordetella parapertussis Satisfactorio
Bibliografía
J. Path. Bact., 35: 831-842 (1932)
Amm. Inst. Pasteur, 20: 731-741 (1906)
Se emplea para el cultivo y aislamiento de Brucella en productos lácteos y muestras biológicas. Añadiendo
sangre permite el cultivo de gérmenes aerobios y anaerobios con exigencias particulares.
Fundamento Preparación
Se trata de un medio muy nutritivo dado el elevado conte- Suspender 43 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
nido de peptonas. El extracto de levadura es una fuente de hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
complejo vitamínico B. La glucosa aporta la energía nece- 121ºC durante 15 minutos. Suplementar el medio según los
saria para el desarrollo de los microorganismos. Como base objetivos deseados.
permite añadir sangre y otras vitaminas según se desee.
Para hacerlo más selectivo se pueden añadir antibióticos Modo de empleo
como la Polimixina B, la Bacitracina y la Cicloheximida, Para la determinación de Brucella, los cultivos primarios se
sobre todo si se trata de investigar Brucella, también puede incubarán 4-5 días en atmósfera al 10% CO 2. Si no hay cre-
añadirse Violeta de Metilo. Las concentraciones de estos cimiento, la incubación se prolongará hasta 21 días. Para la
aditivos con los que se suplementa este medio son: determinación de Campylobacter la inoculación se realizará
Bacitracina..................................... 25000 UI/l en una atmósfera rica en CO 2. A 37°C crecen las especies
Polimixina-B ................................... 6000 UI/l de Campylobacter más habituales, para seleccionar
Cicloheximida ................................ 100 mg/l Campylobacter jejuni, hacer la incubación a 42°C.
Violeta de Metilo ............................ 1,25 mg/l
Esta base también puede ser usada como: Advertencia: Las especies de Brucella son muy infecciosas
Medio basal para Campylobacter jejuni. Mediante la adición (vehículo de transporte el aire), por lo que deben ser mani-
de los siguientes antibióticos; por litro de medio. puladas en cabina de seguridad.
Vancomicina .................................... 10 mg/l
Polimixina-B..................................... 2500 UI/l
Reactivos auxiliares
Trimetoprim...................................... 5 mg/l
además de estos tres productos si la muestra a analizar Ref. Descripción Envase
puede estar contaminada con Candida albicans añadir: Bacitracina *
Cefalotina ............................................. 15 mg/l 374952 Polimixina B Sulfato PB * 1g
Amfotericina B ..................................... 2 mg/l 375266 Cicloheximida PB * 1 g; 5 g; 25 g
Vancomicina *
Fórmula (por litro)
Trimetoprim *
Extracto de Levadura ................................. 2,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 1,0 g Cefalotina *
Peptona de Carne ...................................... 10,0 g Anfotericina B *
Peptona de Caseína ................................... 10,0 g 252079 Violeta de Metilo DC * 25 g; 100 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g * Producto Opcional
Sodio Hidrógeno Sulfito .............................. 0,1 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
en atmósfera de CO2 y observados a las 24-72 horas.
Microorganismos Desarrollo
Brucella abortus ATCC 4315 Satisfactorio
Brucella melitensis ATCC 4309 Satisfactorio
Brucella suis ATCC 4314 Satisfactorio
Bibliografía
J. Bact., 66: 502-504 (1953)
Amer. J. Clin. Path., 27: 482-485 (1957)
Se emplea como medio selectivo para el recuento de microorganismos proteolíticos (degradadores de pro-
teínas) en alimentos.
Historia Preparación
Este medio está basado en las formulaciones originales Suspender 29 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
de Frazier y Rupp y modificado hasta obtener resultados hasta ebullición. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
óptimos. Distribuir en placas de Petri estériles mezclando bien el pre-
cipitado que se forma. El medio debe ser opalescente.
Fundamento
El medio preparado ha de ser opalescente debido a la pre- Modo de empleo
sencia de caseína. El procedimiento se fundamenta en que Se puede inocular por extensión en superficie o por vertido
los microorganismos proteolíticos degradan la proteína en placas y la incubación puede durar de 2 a 3 días. Para
produciéndose un halo de transparencia alrededor de las facilitar el recuento de las colonias, con halo de transparen-
colonias. Si no se produce este halo el resultado de la cia, se puede cubrir la superficie de la placa con ácido acé-
determinación es negativo. Si se desea intensificar la turbi- tico entre el 5 y el 10%.
dez del medio se pueden añadir de 5 a 10 g de leche des-
cremada en 1 l de medio.
Reactivos auxiliares
Fórmula (por litro)
Ref. Descripción Envase
Calcio Cloruro ........................................... 0,05 g
Calcio Hidróxido ....................................... 0,05 g 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO * 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l;
60 l; 200 l
Caseína (Hammarsten).............................. 2,5 g
Extracto de Carne .................................... 3,0 g Leche desnatada *
Peptona de Carne .................................... 5,0 g * Producto Opcional
Sodio Cloruro ........................................... 5,0 g
Agar.......................................................... 13,5 g
pH final: 7,2 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente.
Color: beige claro. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
FRAZIER & RUPP., J. Bact., 16: 57-63 (1928)
Se emplea para la detección, aislamiento y confirmación de Enterococos en alimentos, aguas y otras mues-
tras biológicas.
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
CeNAN Técnicas para el Examen Microbiológico de Alimentos y Bebidas. Madrid. (1982)
Peligrosidad
Se emplea para el cultivo de bacterias exigentes como Estreptococos, Neumococos, Meningococos y otros.
Por la adición de Estreptomicina, Gentamicina o Cloranfenicol resulta un medio selectivo para hongos.
Historia Preparación
Este medio se basa en el caldo de Rosenow. Los primeros Suspender 52 g (Agar) ó 37 g (Infusión) en 1 l de agua
estudios demostraron que el medio era más eficaz que otros destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir duran-
como base glucosada en el aislamiento de determinadas te 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minu-
bacterias. Si además se le añadía antibiótico el medio se tos. Agitar el medio antes de usar. Para preparar un medio
hacía selectivo para el cultivo de levaduras y hongos, sobre selectivo para hongos, el medio esterilizado y fundido se
todo en muestras altamente contaminadas por bacterias. debe enfriar hasta 50ºC y añadir asépticamente 20.000 UI
de penicilina y 40 mg de estreptomicina por litro de medio.
Fundamento Se obtiene un medio más estable añadiendo 0,05 mg de
Por la presencia de peptona, infusión de cerebro de ternera cicloheximida y 0,5 mg de cloranfenicol por litro, antes de
e infusión de corazón de res, se tienen los componentes esterilizar.
necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La gluco-
sa se emplea para la fermentación y el fosfato como Modo de empleo
tampón. Por la adición de antibiótico es un medio adecuado Incubar a 37ºC de 24 a 72 horas.
para el estudio de hongos patógenos. Debido a su conteni-
do de glucosa es menos indicado para la caracterización de
hemólisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre. Reactivos auxiliares
Fórmula (por litro) de Cerebro Corazón (BHI), Ref. Descripción Envase
Infusión Sangre *
Infusión de Cerebro de Estreptomicina *
Ternera (a partir de 200 g) ............................. 12,5 g Gentamicina *
Infusión de Corazón de 143481 Cloranfenicol (RFE, BP, Ph. Eur.) 25 g; 100 g; 500 g
Res (a partir de 250 g)................................... 5,0 g PRS-CODEX *
D(+)-Glucosa .............................................. 2,0 g 375266 Cicloheximida PB* 1 g; 5 g; 25 g
Peptona de Gelatina ................................... 10,0 g
* Producto Opcional
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
di-Sodio Hidrógeno Fosfato........................ 2,5 g
pH final: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Bibliografía
J. Bact., 62: 613 (1951)
Historia Agar.......................................................... 14 g
Mossel concibió este medio para la detección y enumera- pH final: 7,2 ± 0,2
ción de Bacillus cereus en todo tipo de alimentos. Además
del recuento, este medio permite definir determinadas Preparación
características de este microorganismo: la resistencia a la Suspender 40 g en 950 ml de agua destilada. Calentar y
Polimixina B, la producción de lecitinasa y la no fermenta- agitar hasta disolución total. Distribuir y esterilizar a 121ºC
ción del Manitol. durante 15 minutos. Enfriar a 50ºC; añadir asépticamente
100.000 UI de Polimixina B y 50 ml de emulsión de yema
Fundamento de huevo estéril por litro de medio. Mezclar bien y distribuir.
La adición de Polimixina-B Sulfato a esta base de agar
inhibe el crecimiento de la flora secundaria. B. cereus es Modo de empleo
manitol-negativo, lo que permite su distinción de la flora Las placas sembradas se incuban a 30ºC de 18 a 24 horas.
acompañante manitol-positiva, que hace virar el Azul de Pueden existir confusiones con colonias de otros bacilos
Bromotimol a amarillo. Al tratarse de un microorganismo Gram-positivos.
con actividad lecitinasa se forma un halo de precipitados Las pruebas confirmativas a realizar son: fermentación de
blancos alrededor de la colonia, como resultado de la glucosa, la utilización de la gelatina y reducción de nitratos,
degradación de la lecitina del huevo. pruebas positivas para Bacillus cereus.
B. cereus en condiciones normales y cuando su número es
limitado no se considera patógeno, sin embargo es capaz
de producir intoxicación alimentaria al hombre cuando un Reactivos auxiliares
alimento esta muy contaminado o cuando las condiciones
Ref. Descripción Envase
de conservación no son adecuadas. Se utiliza, también,
como indicador del mantenimiento de la cadena del frío en 374952 Polimixina B Sulfato PB 1g
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-40 horas después de añadir Emulsión de Yema de Huevo y Polimixina B Sulfato.
Bibliografía
Appl. Microbiol., 15: 650-653 (1967)
J. Bact., 75: 499-509 (1958)
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Chapman, Food Res., 13: 100 (1948)
Chapman, J. Bact., 63: 147 (1952)
Medio recomendado para la determinación del número de Coliformes totales, fecales y presunción de E. coli
en aguas potables y envasadas por el método de filtro membrana.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige azulado. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-48 horas.
Bibliografía
J. Bact., 53: 504 (1947)
J. Appl. Bact., 25: 20-29 (1962)
Orden nº 21936. BOE nº 193. (1983)
ISO 9308: 1 (1990)
Fundamento Preparación
Koser descubrió que aportando como única fuente de car- Suspender 5,7 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta diso-
bono el ácido cítrico o su sal sódica, Enterobacter aeroge- lución total. Distribuir en tubos a razón de 6 ml por tubo y
nes se desarrolla bien mientras que Escherichia coli queda- esterilizar a 118ºC durante 15 minutos.
ba inhibida. De esta manera los tubos que después de la
incubación quedan opalescentes indicarán presencia de Modo de empleo
microorganismos citrato-positivos. El suministro de nitróge- Sembrar el medio e incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
no se aporta a través del ion amonio.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco. pH: 6,7 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Enterobacter cloacae ATCC 23355 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Nulo
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Reactivos auxiliares
Ref. Descripción Envase
A14459 Inosita * 5 g; 25 g; 100 g
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: verde. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
SIMMONS, J. S. J. Infect. Dis., 39: 209-241 (1926)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Historia Preparación
Sandys fue el primero en trabajar sobre un medio que per- Suspender 36,1 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
mitiera la observación de colonias al mismo tiempo que se tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
evitara la aglomeración por Proteus. Más tarde, conjunta- 121ºC durante 15 minutos. Homogeneizar y distribuir en
mente con Mackey, fueron modificando las formulaciones de placas de Petri estériles.
los primeros ensayos hasta llegar a la composición actual.
Modo de empleo
Fundamento Sembrar por estría en la superficie del medio.
El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentación Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
ácida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las
Enterobacteriáceas y el bajo contenido en electrolitos redu-
ce la difusión de Proteus. Las peptonas, el extracto de carne
y la Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige verdoso. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
App. Microb., 19: 409
Se emplea para la detección y recuento de organismos Coliformes fecales en aguas. Muy utilizado en la
técnica de filtración por membrana.
Fundamento Preparación
La formulación del medio corresponde a Geldreich y cola- Suspender 37,1 g en 1 l de agua destilada. Añadir 10 ml de
boradores. Por la presencia de las sales biliares nº 3 se le Acido Rosólico al 1% en una solución de Sodio Hidróxido
confiere un carácter selectivo para las Enterobacteriáceas, 0,2N, calentar y agitar hasta ebullición. Si deseamos prepa-
que a su vez se hace selectivo para los Coliformes fecales rar un medio sólido suspender: 15 g de Agar Bacteriológico
al incubar a 44,5ºC. Este medio suplementado con Acido en 500 ml de agua y esterilizar a 121°C durante 15 minu-
Rosólico hace que las colonias de coliformes fecales apa- tos, dejar enfriar hasta 45-50°C. Preparar 500 ml de medio
rezcan de color azul y las demás de color gris. doble concentrado; una vez disuelto mezclar con los 500 ml
Al adicionar 15 g de Agar-Agar al Caldo se obtiene el Agar de Agar. Dejar enfriar y distribuir.
para coliformes fecales (mFC) utilizado, habitualmente, en la En lugar de Agar el medio líquido puede depositarse sobre
técnica de filtración por membrana. El filtro a través del cual Almohadillas absorbentes estériles, que harán de soporte
se ha filtrado la muestra, se coloca sobre la superficie del para el filtro.
Agar. Pasadas 24 horas de incubación a 44,5°C se cuentan
las colonias de Coliformes. Modo de empleo
Sembrar el inóculo deseado en el tubo o en la superficie del
Fórmula (por litro) medio si es un agar.
Azul de Anilina ............................................ 0,1 g Incubar a 37ºC durante 24 horas. Si se desea una total
Extracto de Levadura ................................. 3,0 g selectividad de Escherichia coli incubar a 44,5ºC.
Lactosa ...................................................... 12,5 g
Proteosa Peptona nº 3 ............................... 5,0 g
Sales Biliares nº 3 ....................................... 1,5 g Reactivos auxiliares
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Ref. Descripción Envase
Triptosa....................................................... 10,0 g
121051 Acido Rosólico PA 10 g; 25 g; 50 g
pH final: 7,4 ± 0,2 131687 Sodio Hidróxido lentejas 500 g; 1 kg; 5 kg;
PA-ACS-ISO 25 kg; 50 kg
402302 Agar Bacteriológico Tipo 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Europeo CULTIMED *
Almohadillas absorbentes *
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas, después de haber añadido 10 ml/l de ácido rosólico al 1%.
Bibliografía
J. Amer. Water Works Association, 57: 208 (1965)
ISO 9308 - 1:1990
Se emplea para el cultivo y aislamiento de microorganismos en general y en particular de aquellos que son
especialmente exigentes a partir de una amplia variedad de muestras. Permite la adición de sangre, de com-
ponentes selectivos o factores de crecimiento.
Historia Preparación
Tanto la formulación del medio como sus distintas variacio- Suspender 42,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
nes especializadas fueron descritas por Ellner y colabora- tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
dores. Este medio permite obtener diferentes medios de esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Se enriquece con
cultivo, óptimos para microorganismos exigentes. diversos materiales, según la determinación que se vaya a
realizar:
Fundamento
Las peptonas aportan la base nutritiva del medio, el almidón - Agar Sangre Columbia
se constituye como fuente de energía, el Sodio Cloruro A 950 ml de Base de Agar Columbia añadir 50 ml de
mantiene el nivel salino necesario para el buen desarrollo de sangre de carnero desfibrinada y estéril.
los gérmenes y la sangre desfibrinada, que se suele añadir, - Medio selectivo Gardnerella vaginalis
permite la observación de las reacciones hemolíticas. A par-
A 940 ml de Base de Agar Columbia, añadir 50 ml de
tir de esta base se prepara el agar sangre y el agar choco-
suero de caballo o de conejo y 35 mg de Acido Nalidíxico;
late; también puede utilizarse para ensayos de toxicidad de
4 mg de Gentamicina y 2 mg de Amfotericina B disuelto
Corynebacterium (Herman y col. 1958), como base para la
en 4 ml de Etanol.
preparación de Agar vaginalis (Greenwood y col. 1977),
para el aislamiento de Campylobacter (Karmaly y col. 1986), - Medio COBA
además de otras muchas variantes. A 930 ml de Base de Agar Columbia añadir 50 ml de
sangre de caballo desfibrinada y estéril. Añadir 10 ml de
Fórmula (por litro)
Solución acuosa (0,1%) de Sulfato de Colistina y 10 ml
Almidón de Maíz ......................................... 1,0 g de Solución acuosa (0,05-0,1%) de Acido Oxolínico.
Peptona...................................................... 10,0 g
Peptona Biotriptasa .................................... 10,0 g Modo de empleo
Peptona Músculo Cardíaco ........................ 3,0 g Utilizar según los fines a conseguir.
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 13,5 g
pH final: 7,3 ± 0,2 Reactivos auxiliares
Ref. Descripción Envase
Sangre *
Gentamicina *
Acido Nalidíxico *
Sulfato de Colistina *
Acido Oxolínico *
Amfotericina B
* Producto Opcional
Bibliografía
Am. J. Clin. Path., 29: 181-183 (1958)
Handbook of Microbiological Media. (1993)
Health Lab. Sci., 14: 102-106 (1977)
J. Clin. Microbiol., 23: 456-459 (1986)
Se emplea en la conservación de cepas de microorganismos exigentes, para los estudios de movilidad y fer-
mentación con la adición de hidratos de carbono.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-48 horas.
Bibliografía
J. Lab. Clin. Med., 16: 294 (1930)
Se emplea para el cultivo de hongos y bacterias del suelo, además de otros microorganismos capaces de
desarrollarse con sodio nitrato como única fuente de nitrógeno. También se usa para la producción de cla-
midosporas por Candida albicans.
Historia Preparación
Este medio se prepara de acuerdo con la fórmula original de Suspender 45,4 g en 1 l de agua destilada y agitar hasta
Thom y Church. Indicado para el cultivo e identificación de disolución total. Distribuir y esterilizar a 115ºC durante
hongos, desarrollo de bacterias del suelo no exigentes y 20 minutos.
ensayos de resistencia de mohos.
Modo de empleo
Fundamento Las temperaturas y tiempos de incubación están en función
La modificación respecto a la fórmula original consiste en la de la clase de hongo. En principio incubar a 25ºC de una a
sustitución del Magnesio Sulfato y el di-Potasio Hidrógeno dos semanas y de 24 a 48 horas para Candida albicans.
Fosfato por Magnesio Glicerofosfato, evitando de esta
manera la precipitación del tri-Magnesio di-Fosfato.
Para el aislamiento de Hongos puede aumentarse la selec- Reactivos auxiliares
tividad con la adición de Estreptomicina a 30 mg/l o de
Ref. Descripción Envase
Aureomicina a 2 mg/l.
Estreptomicina *
Fórmula (por litro) Aureomicina *
Hierro(II) Sulfato ........................................ 0,01 g * Producto Opcional
Magnesio Glicerofosfato ........................... 0,5 g
Potasio Cloruro ......................................... 0,5 g
Potasio Sulfato ......................................... 0,35 g
Sacarosa .................................................. 30,0 g
Sodio Nitrato ............................................ 2,0 g
Agar.......................................................... 12,0 g
pH final: 6,8 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado, floculento uniforme.
Color: beige muy claro. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 30ºC
y observados a las 24-72 horas.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Nulo/Ligero
Bacillus subtilis ATCC 6633 Moderado
Candida albicans ATCC 10231 Moderado
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografía
Thom y Church. The Aspergilli, 39: (1926)
Thom y Raper. Manual of the Aspergilli, 39: (1945)
Reactivos auxiliares
Ref. Descripción Envase
413777 Cerebro Corazón (BHI), Infusión 500 g; 5 kg
CULTIMED *
* Producto Opcional
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 30ºC
y observados a los 7 días.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Inhibido
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Candida tropicalis Inhibido
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Inhibido
Trichophyton equinum ATCC 22443 Satisfactorio
Bibliografía
J. Bact., 60: 104 (1950)
Mycopath. Mycol Appl., 13: 113 (1960)
Peligrosidad
Historia Preparación
La formulación del medio es, en esencia, la descrita por Disolver 46 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
Leifson para la diferenciación de bacilos entéricos, funda- hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar.
mentada en la fermentación de la lactosa como caracterís- NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Dejar enfriar hasta
tica diferencial de los Coliformes. 45ºC y distribuir en placas de Petri estériles.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de patógenos entéricos, especialmente de
Salmonella y de Shigella.
Reactivos auxiliares
Ref. Descripción Envase
131621 Sacarosa PA-ACS * 500 g; 1 kg; 5 kg;
25 kg; 50 kg
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,5 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
Se emplea como medio diferencial ligeramente selectivo para el aislamiento de bacilos entéricos Gram-nega-
tivos. También se usa para el recuento de bacterias Coliformes en aguas, leches, productos lácteos y otros
productos alimenticios.
Historia Preparación
Este medio fue desarrollado en su origen por Leifson. Este Suspender 42,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
medio corresponde a las recomendaciones de la APHA tar hasta ebullición y disolución total. No sobrecalentar. NO
para análisis de alimentos. ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,1 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Se emplea como medio selectivo para el aislamiento de bacilos entéricos Gram-negativos procedentes de
heces, orina y otros especímenes.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
J. Infectious Diseases, 18: 596 (1916)
Historia Preparación
Weckman y Catlin pusieron de manifiesto que el aumento Suspender 42 g en 1 l de agua destilada. Si se desea se
de la actividad productora de DNasa guarda una estrecha puede añadir 10 g de manitol y 0,025 g de azul de bromo-
relación con la producción de coagulasa. También se timol por cada litro del medio. Calentar y agitar hasta ebulli-
demostró que la producción de DNasa es una indicación ción y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 118ºC durante
fiable en la determinación de Estafilococos patógenos. 15 minutos. Dejar enfriar a 45ºC y distribuir en placas de
Petri estériles.
Fundamento
Los microorganismos productores de DNasa depolimerizan Modo de empleo
el ácido desoxirribonucléico que contiene el medio, dando Inocular en superficie por estría. Incubar a 37ºC de 18 a 24
lugar a unas zonas de transparencia alrededor de las zonas horas. Inundar la placa con Acido Clorhídrico 1N y observar
sembradas, después de inundar la placa con ácido clorhí- la transparencia alrededor de la estría. Si se ha suplemen-
drico 1N. La acidificación del medio con ácido clorhídrico tado el medio con Manitol y Azul de Bromotimol, el medio
provoca la precipitación del ADN quedando el medio turbio, es azul, pero las colonias Manitol-positivas son de color
excepto, alrededor de las colonias DNasa-positivas. amarillo con halo amarillo alrededor.
Para aumentar la información sobre la caracterización de
Estafilococos patógenos, puede demostrarse el consumo
de Manitol suplementado el medio con este producto y un Reactivos auxiliares
indicador de pH como el azul de Bromotimol.
Ref. Descripción Envase
Fórmula (por litro) 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 1 l; 2,5 l; 10 l
Acido desoxirribonucléico ........................... 2,0 g 132067 D(-)-Manita PA-ACS * 500 g; 1 kg; 5 kg
Peptona de Caseína ................................... 15,0 g 251167 Azul de Bromotimol DC * 5 g; 25 g
Peptona de Soja......................................... 5,0 g
* Producto Opcional
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,3 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige claro. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 73: 747 (1957)
J. Bact., 78: 520 (1959)
Se emplea para la diferenciación y enumeración de Coliformes y E. coli en agua, aguas residuales, alimen-
tos, otros materiales y fauna marina.
Historia Preparación
Perry y Hajna desarrollaron este medio con el objeto de Suspender 37,4 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
poder tener una buena detección de los microorganismos tar hasta disolución total. Distribuir en tubos de ensayo con
fecales y de la Escherichia coli. Este medio es de los reco- campana Durham y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
mendados por los métodos oficiales para aguas potables. Evitar las burbujas de aire en la campana de fermentación
antes de inocular los tubos.
Fundamento
La presencia de las sales biliares nº 3 determina que se inhi- Modo de empleo
ba el crecimiento de los formadores de esporas y de Inocular el medio e incubar a la temperatura adecuada:
Estreptococos fecales. La mezcla de fosfatos regula el pH 37°C para determinar Coliformes totales y 44°C para
del medio. La Triptosa es el elemento nutritivo y el Sodio Coliformes fecales. Este medio se utiliza en la prueba con-
Cloruro aporta la salinidad necesaria para el buen creci- firmativa de presencia de E. coli en el análisis de aguas;
miento de los gérmenes. La Lactosa favorece a los para ello se inocula el tubo de medio EC y se incuba a
Coliformes y el consumo, se pone de manifiesto por la pro- 44,5 ± 0,5°C durante 24 ± 2 horas.
ducción de gas. La presencia de gas en la campana de Durham y la prueba
complementaria de producción de Indol (pág. IV - 8, IV - 24)
Fórmula (por litro) son confirmativos de E. coli.
Lactosa ...................................................... 5,0 g
Potasio di-Hidrógeno Fosfato ..................... 1,5 g
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ..................... 4,0 g Reactivos auxiliares
Sales Biliares nº 3 ....................................... 1,9 g
Ref. Descripción Envase
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Triptosa....................................................... 20,0 g 960002 BioFix® Indol * 50 tiras
252908 Reactivo de Kovacs DC * 100 ml
pH final: 6,9 ± 0,2
413794 Agua de Peptona * 500 g; 5 kg
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de
44,5 ±0,5ºC y observados a las 24 horas ±2 horas.
Bibliografía
Am. J. Pub. Health., 34: 735-738 (1944)
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 14th ed. APHA. (1975)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: verde claro. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografía
J. Bact., 84: 381 (1962)
J. Appl. Bact., 24: 444-452 (1963)
Se emplea para la investigación y recuento de Coliformes en aguas, productos lácteos y alimentos en general.
Historia Preparación
El inicio fue el trabajo de Endo para encontrar un medio que Suspender 36 g en 1 l de agua destilada, añadir 4 ml de
no tuviera sales biliares y que permitiera diferenciar las Pararrosanilina base al 10% p/v en etanol 96% v/v y hervir
Enterobacteriáceas que fermentan la lactosa de las que no. hasta disolución total. Esterilizar a 121ºC durante 15 minu-
En su origen fue desarrollado para el aislamiento e identifi- tos y mezclar bien.
cación de los bacilos del tifus, aunque posteriormente apa- Advertencia: para la Pararrosanilina se deben tomar las
recieron otros medios más eficaces, al tiempo que se medidas adecuadas para no ser inhalada y que no entre en
encontró ser de los medios más indicados para el análisis contacto con la piel.
bacteriológico del agua.
Modo de empleo
Fundamento Incubar entre 35º y 37ºC de 24 a 48 horas. Las placas pre-
La presencia de Sodio Sulfito y Pararrosanilina inhibe el paradas son de color rosa y deben conservarse entre 2-8°C
crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Además las y protegidas de la luz para evitar la oxidación de la
proporciones de ambos son tales que la Pararrosanilina se Pararrosanilina.
mantiene decolorada, de tal manera que sólo con el ace- El medio preparado debe utilizarse durante los días siguien-
taldehído generado en la fermentación de la lactosa se tes a su preparación, ya que la oxidación del medio lo hace
consigue restablecer su color original. Así, las bacterias volver cada vez más rojo e inservible.
lactosa-negativas permanecerán incoloras, mientras que
las lactosa-positivas toman un color rojo intenso que llega
a colorear el medio que las rodea. La colonia de E. coli, Reactivos auxiliares
además del color rojo intenso, puede presentar un brillo
Ref. Descripción Envase
metálico.
254615 Pararrosanilina base DC 10 g
Fórmula (por litro) 121085 Etanol 96% v/v PA 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l;
Lactosa ...................................................... 10,0 g 60 l; 200 l
Peptona...................................................... 10,0 g
tri-Potasio Fosfato ...................................... 3,5 g
Sodio Sulfito ............................................... 2,5 g
Agar............................................................ 10,0 g
pH final: 7,5 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,5 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciación de bacterias entéricas Gram-negativas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: púrpura rosado. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Examination of Dairy Products. 10th ed. APHA. (1953)
Se emplea para la investigación y diferenciación de bacilos entéricos y microorganismos Coliformes. Con este
medio se puede identificar Escherichia coli y Enterobacter. También permite la identificación de Candida albicans.
Historia Preparación
Los primeros en desarrollar este tipo de medio fueron Holt- Suspender 37,4 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Harris y Teague que empleaban lactosa y sacarosa como tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
componentes capaces de ser fermentados. Más tarde esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta
Levine modificó el medio suprimiendo la sacarosa y aumen- 45ºC y agitar suavemente antes de usarlo.
tando la proporción de lactosa, lo que permitía fácilmente
diferenciar Escherichia coli y Enterobacter aerogenes. Modo de empleo
Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas.
Fundamento Para el cultivo de Candida albicans, las placas suplemen-
La eosina y el azul de metileno son productos que inhiben tadas con Clortetraciclina que serán de color azul se incu-
parcialmente el crecimiento de microorganismos gram- ban en jarra de anaerobiosis en una atmósfera con 10% de
positivos, entre ellos los Estreptococos fecales. Además, la dióxido de carbono.
combinación del azul de metileno y la eosina permite dife- Para el cultivo confirmativo de E. coli, las placas se incu-
renciar los gérmenes lactosa-positivos de los lactosa-nega- barán a 44,5° ± 1°C con lecturas a las 24 y 48 h.
tivos. Los Coliformes dan colonias violeta oscuro, con una Las colonias de E. coli en este agar miden 2-3 mm de diá-
zona central más oscura, mientras, que los lactosa-negati- metro, son planas o ligeramente cóncavas, con centros
vos dan colonias incoloras. Este medio es utilizable para la oscuros, casi negros. Con luz reflejada, casi siempre se
identificación de Candida albicans cuando se suplementa observa un brillo metálico verdoso. Enterobacter forma
con Clortetraciclina clorhidrato a razón de 100 mg/l inhi- colonias más grandes (4-6 mm) con centro pardo, mientras
biendo el crecimiento de la flora acompañante. que Salmonella y Shigella forma colonias translúcidas,
desde incoloras a ámbar. Klebsiella da colonias mucosas
Fórmula (por litro) parduzcas. Candida albicans da colonias en forma de tela-
Eosina Amarillenta .................................. 0,4 g raña o de pluma.
Azul de Metileno ..................................... 0,065 g
Lactosa .................................................. 10,0 g
Peptona de Gelatina ............................... 10,0 g Reactivos auxiliares
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ................. 2,0 g
Ref. Descripción Envase
Agar........................................................ 15,0 g
Clorotetraciclina Clorhidrato *
pH final: 7,1 ± 0,2
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente con precipitado.
Color: rosa-rojizo. pH: 7,1 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA. (1978)
Journal of Infectious Diseases, 23: 43-47 (1918)
USP IV (2002)
Historia Preparación
Stone fue el primero en describir un medio en que los Suspender 149 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
Estafilococos patógenos daban positivo a la prueba de la hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
gelatinasa. Después de diversas modificaciones Chapman 121ºC durante 15 minutos. Resuspender el precipitado agi-
llegó a la formulación definitiva del medio. tando suavemente para evitar la formación de burbujas y
distribuir en placas de Petri estériles aún caliente. Se puede
Fundamento emplear sin esterilizar hirviéndolo durante 5 minutos y uti-
El carácter selectivo del medio se debe a la alta concentra- lizándolo seguidamente.
ción de Sodio Cloruro que tiene y que hace que la mayoría
de los microorganismos diferentes de los Estafilococos que- Modo de empleo
den inhibidos. Es un medio con un alto grado de diferencia- Sembrar la muestra en la superficie de la placa e incubar
ción, basado en: crecimiento restringido a microorganismos entre 35º y 37ºC durante 48 horas.
con elevada tolerancia a la sal común, capaces de degradar Las colonias sospechosas de ser Estafilococos patógenos
el manitol, lisar la gelatina y formar pigmento. El resto de los aparecen de color amarillo (producción de pigmento). La
componentes asumen las funciones nutricionales. fermentación del manitol produce un descenso del pH del
Para mejorar la inhibición de microorganismos del género medio alrededor de las colonias, ello se pone de manifiesto
Bacillus el medio se puede suplementar con Azida Sódica a porque al gotear una solución al 0,04% de Azul de
razón de 65 mg/l de medio. Bromotimol vira a amarillo. La modificación de la gelatina se
pone de manifiesto por una zona clara alrededor de la colo-
Fórmula (por litro) nia 10 minutos después de haber goteado una solución
Extracto de Levadura ................................. 2,5 g saturada de Sulfato Amónico.
Gelatina ...................................................... 30,0 g
Lactosa ...................................................... 2,0 g
D(-)-Manita.................................................. 10,0 g Reactivos auxiliares
Peptona de Caseína ................................... 10,0 g
Ref. Descripción Envase
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ..................... 5,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 75,0 g 131167 Azul de Bromotimol 5 g; 25 g
PA-ACS
Agar............................................................ 15,0 g
131140 Amonio Sulfato 500 g; 1 kg; 5 kg;
pH final: 7,0 ± 0,2 PA-ACS-ISO 25 kg; 50 kg
162712 Sodio Azida PS * 100 g; 250 g; 5 kg
281168 Azul de Bromotimol 100 ml; 250 ml
solución 0,04% RV
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 51: 409-410 (1946)
J. Bact., 63: 147 (1952)
Se emplea para el aislamiento de Enterococos en agua, ya sea por siembra directa o previa filtración por
membrana y aplicando el procedimiento correspondiente.
Historia Preparación
Este medio se prepara de acuerdo con la fórmula original de Suspender 76,4 g en 1 l de agua destilada; calentar y
Kenner, Clark y Kabler. Está recomendado por la American agitar hasta ebullición y disolución total y hervir durante
Public Health Association para el recuento en placas de 1 minuto. Esterilizar cuidadosamente en autoclave a
Enterococos en agua, siendo uno de los mejores para este fin. 121°C durante 10 minutos. Dejar enfriar hasta 50ºC y
añadir 1 ml de 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio cloruro al 1%
Fundamento por cada 100 ml de medio.
La maltosa y la lactosa son los hidratos de carbono fer-
mentables, que con la peptona y el extracto de levadura Modo de empleo
constituyen el conjunto nutriente del medio. El Sodio Azida Se recomienda la técnica de filtración por membrana o el de
es el agente selectivo. La adición del 2,3,5-Trifenil-2H- numeración en placa.
Tetrazolio Cloruro da lugar a que los Enterococos, capaces Incubar entre 34º y 37ºC durante 48 horas.
de reducirlo, presenten colonias de un color rojo oscuro. Proceder al recuento de las colonias de color rojo oscuro.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas. Placas preparadas añadiendo 1 ml de TTC 1% por cada 100 ml de medio.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Peligrosidad
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de Enterococos en aguas potables, aguas residuales y pro-
ductos alimenticios.
Reactivos auxiliares
Ref. Descripción Envase
122329 Glicerina 87% PA 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Inhibido
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Satisfactorio
Enterococcus faecalis ATCC 19433 Satisfactorio
Bibliografía
Am. J. Pub. Health, 33: 550-556 (1943)
Peligrosidad
Se emplea para el recuento de aerobios en placa en aguas potables y de drenaje. También se emplea en el
recuento de bacterias en leches y derivados.
Historia Preparación
Se trata de una variante del agar con leche desnatada, glu- Suspender 24 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien,
cosa y triptona de Bowers y Hucker. Después de múltiples calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto.
investigaciones se ha demostrado que es uno de los mejo- Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Dejar
res medios para el recuento de aerobios totales en placa en enfriar a 45ºC y verter en cápsulas de Petri estériles.
aguas potables, siendo recomendado por la APHA. Los
Standard Methods for the Examination of Dairy Products Modo de empleo
recomiendan este medio para bacterias termofílicas. Habitualmente se utiliza la técnica de incorporación en
gelosa.
Fundamento Incubar entre 31º y 33ºC de 24 a 48 horas.
Este medio presenta una combinación de nutrientes que se
acomoda óptimamente a los fines apetecidos.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Enterococcus faecalis ATCC 11700 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Bueno (formación de pigmento)
Bacillus cereus ATCC 11778 Bueno
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 15 th ed. APHA. (1985)
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 14th ed. APHA. (1975)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Sinónimos Preparación
Levadura Glucosa, Agar Suspender 35 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
hasta ebullición y hervir hasta disolución total. No sobreca-
Historia lentar. Esterilizar a 118ºC durante 15 minutos.
Este medio fue descrito por Windle Taylor para el recuento
de microorganismos en placa. En el Reino Unido es el más Modo de empleo
empleado para el recuento de bacterias heterotróficas en Sembrar la placa según los fines a conseguir.
el agua. Habitualmente se hacen siembras en incorporación en
gelosa y se incuba a 37ºC durante 24 horas o 20-22ºC
Fundamento durante 3 días.
Los nutrientes de este medio permiten el crecimiento de
una gran variedad de microorganismos (bacterias, hongos y
levaduras). Para hacer recuentos de hongos y levaduras Reactivos auxiliares
debe suplementarse con antibióticos por ejemplo
Ref. Descripción Envase
Cloranfenicol a razón de 0,05 g por litro de medio.
143481 Cloranfenicol (RFE, BP, Ph.Eur.) 25 g; 100 g; 500 g
Fórmula (por litro) PRS-CODEX
Extracto de Levadura ................................. 5,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 10,0 g
Agar............................................................ 20,0 g
pH final: 6,5 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 6,5 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Penicillium spp Satisfactorio
Bibliografía
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 1002 (1993)
Windle Taylor E. The examination of waters and waters Supplies. 7th Ed. Churchill Ltd. London 394-398 (1958)
Se emplea para el aislamiento y recuento de mohos y levaduras. También se puede emplear para pruebas
de esterilidad en relación a la presencia de estos microorganismos.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco a beige claro. pH (Agar): 4,6 ± 0,2 pH (Caldo): 4,7 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de
25-30ºC y observados a las 40-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
Saccharomyces uvarum ATCC 9080 Satisfactorio
Bibliografía
Thom and Church. The Aspergilli. (1926)
Se emplea para el cultivo de Gonococos y aislamiento de Neisserias patógenas. Como tal base debe ir
acompañada de uno o varios suplementos según el fin que se persiga.
Historia Preparación
Johnston desarrolló un Agar Chocolate que debidamente Suspender 7,2 g de Base de Agar GC en 100 ml de agua
suplementado producía un crecimiento acelerado en 24 destilada para obtener una base de doble concentración.
horas de la Neisseria gonorrhoeae. Más tarde Carpenter y Calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto.
Morton introdujeron modificaciones a la formulación original Preparar 100 ml de disolución de hemoglobina al 2%, agi-
de Johnston encontrando resultados óptimos para el culti- tar hasta obtener una suspensión uniforme. Esterilizar las
vo de este microorganismo. El medio permite una amplia dos suspensiones separadamente a 121ºC durante 15
variedad de aplicaciones en función de los suplementos minutos. Dejar enfriar la base hasta 50ºC y añadir aséptica-
que se le añadan. mente los 100 ml de solución de hemoglobina. Distribuir en
placas de Petri estériles.
Fundamento
La mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo del Modo de empleo
medio. Los dos fosfatos tamponan el pH y el Sodio Cloruro Sembrar un inóculo abundante en la superficie del medio.
mantiene el nivel salino adecuado para el buen crecimiento Incubar entre 35º y 37ºC de 24 a 48 horas.
de los gérmenes. El Almidón de Maíz ejerce una acción
neutralizante ante la posible presencia de tóxicos produci-
dos en el metabolismo bacteriano. La adición de los suple- Reactivos auxiliares
mentos como la sangre de caballo lisada o hemoglobina
Ref. Descripción Envase
soluble completa la funcionalidad del medio.
402876 Hemoglobina CULTIMED 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Pueden adicionarse antibióticos para evitar el desarrollo de
flora acompañante.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente.
Color: blanquecino. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 40-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Haemophilus influenzae ATCC 19418 Satisfactorio
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Bibliografía
J. Venereal Disease Inform., 26: 239. (1945)
Fundamento Preparación
Antes de emplear el agar como agente gelificante en la ela- Suspender 128 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien y
boración de los medios de cultivo se empleaba la gelatina. calentar ligeramente (50ºC) hasta disolución total. Distribuir
No obstante, presentaba inconvenientes tales como la pre- en tubos de ensayo y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
sencia de determinados microorganismos que eran capaces
de utilizar la gelatina, el medio se licuaba debido a la pro- Modo de empleo
ducción de gelatinasa. Actualmente, la capacidad de degra- Sembrar la muestra por picadura. Incubar el medio con el
dar la gelatina por parte de algunos microorganismos se uti- microorganismo a estudio a 20-22°C, o bien a la tempera-
liza como carácter en la determinación e identificación oficial. tura óptima para el microorganismo. Si la incubación se rea-
liza a temperatura superior a los 20-22°C (la gelatina será
Fórmula (por litro) líquida) antes de proceder a la lectura los cultivos deben
Gelatina ......................................................120,0 g enfriarse en la nevera para no dar falsos positivos.
Peptona de Gelatina ................................... 5,0 g Por regla general se aconsejan incubaciones máximas de
Extracto de Carne de Res .......................... 3,0 g 14 días con lecturas cada 3, pero debe tenerse en cuenta
pH final: 6,8 ± 0,2 que ciertos organismos pueden tardar hasta varios meses
en licuar la gelatina.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados de 1-7 días. Para la lectura de la prueba de la gelatinasa se enfrían hasta 20ºC.
Historia Preparación
Giolitti y Cantoni desarrollaron y pusieron a punto el medio Suspender 54,2 g en 1 l de agua destilada; calentar suave-
con el fin de enriquecer pequeñas cantidades de mente y agitar hasta disolución total. Distribuir en tubos de
Staphylococcus aureus en muestras de alimentos: Incluso ensayo con 19 ml de caldo y esterilizar a 121ºC durante
está recomendado para leches en polvo y alimentos infan- 15 minutos. Añadir a cada tubo 0,3 ml de Potasio Telurito al
tiles en los que está establecido que 1 g de producto debe 3,5% (0,03 ml cuando se analice carne o productos cárni-
dar ausencia de este microorganismo después del cultivo. cos) antes de usarlo. El medio no se puede conservar com-
pletado; si no se utiliza de inmediato conservar en nevera
Fundamento sin el Potasio Telurito no más de 10-15 días.
El Staphylococcus aureus ve favorecido su crecimiento por
la presencia de la Manita, el Sodio Piruvato y la Glicina. A su Modo de empleo
vez por la presencia del Litio Cloruro se inhibe el creci- Sembrar el material en estudio (habitualmente 1 g para lác-
miento de los gérmenes Gram-negativos y por la del teos y 0,1 g en cárnicos) y sellar los tubos con aceite de
Potasio Telurito y Glicina la de los Gram-positivos a excep- vaselina estéril.
ción de S. aureus y alguna especie de Micrococcus. Los Incubar anaeróbicamente a 37ºC durante 48 horas. Si
dos extractos y la triptona aportan los elementos nutritivos no se produce ennegrecimiento del medio, el ensayo se
y el Sodio Cloruro la salinidad adecuada. considera negativo; en caso contrario, será necesaria la
confirmación. Mediante resiembra en Baird-Parker,
Fórmula (por litro) Vogel-Johnson o cualquier otro medio selectivo de
Extracto de Carne ...................................... 5,0 g Estafilococos. El ennegrecimiento o precipitado negro
Extracto de Levadura ................................. 5,0 g se deben a la reducción del telurito a teluro metálico.
Glicina ........................................................ 1,2 g
Litio Cloruro ................................................ 5,0 g
D(-)-Manita.................................................. 20,0 g Reactivos auxiliares
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Ref. Descripción Envase
Sodio Piruvato ............................................ 3,0 g
Triptona ...................................................... 10,0 g 414724 Potasio Telurito sol. 3,5% CULTIMED 50 ml; 100 ml
141003 Aceite de Vaselina (RFE, USP, 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
pH final: 6,9 ± 0,2 BP, Ph. Eur) PRS-CODEX
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 40-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Micrococcus luteus ATCC 10240 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Satisfactorio (ennegrecimiento)
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio (ennegrecimiento)
Bibliografía
J. Appl. Bact., 29: 395-398 (1966)
Meat and Meat Products-Detection and Enumeration of Staphylococcus aureus. ISO 5551. (1977)
Se emplea para recuento de una amplia variedad de microorganismos. Por la adición de sangre se puede
usar como agar sangre con glucosa.
Historia Preparación
Este medio se basa en los estudios de Norton que empleó Suspender 43 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien,
con éxito un agar con sangre desfibrinada y glucosa para el calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto.
aislamiento de microorganismos procedentes del pus, así Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Si se desea acidu-
como también en el cultivo de Haemophilus, Bordetella y lar el medio, dejar enfriar hasta 45-50°C y añadir 7,1 ml de
Neisseria. Acido Tartárico al 10% estéril. Homogeneizar y distribuir en
Placas de Petri estériles. Para fabricar placas de Agar san-
Fundamento gre con glucosa añadir 5% de sangre al medio esterilizado
La glucosa constituye una fuente de energía muy importan- y a una temperatura entre 45-50°C.
te para una gran variedad de bacterias, consiguiéndose
unos crecimientos rápidos y abundantes. En el caso de Modo de empleo
análisis de alimentos congelados es necesario acidular el Incubar a 37ºC de 18 a 48 horas.
medio con ácido tartárico. Es importante tener en cuenta
que un medio acidulado y solidificado ya no se puede vol-
ver a refundir, porque su acidez hidrolizaría al propio agar. Reactivos auxiliares
Para realizar un estudio de fermentación de la glucosa,
Ref. Descripción Envase
complementar el medio con 0,02 g/l de Púrpura de
141066 Acido L(+)-Tartárico (RFE, USP-NF, 500 g; 1 kg; 5 kg;
Bromocresol; el indicador cambiará de color si existe fer-
BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX * 25 kg; 50 kg
mentación de glucosa. Este estudio también se puede rea-
lizar con el Agar Glucosa y Triptona. Sangre *
121546 Púrpura de Bromocresol PA * 5 g; 25 g
Fórmula (por litro) 413841 Glucosa y Triptona, Agar CULTIMED * 500 g; 5 kg
D(+)-Glucosa .............................................. 10,0 g * Producto Opcional
Extracto de Carne ...................................... 3,0 g
Peptona...................................................... 10,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 6,9 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas. Sin adicionar sangre.
Microorganismos Desarrollo
Bordetella pertussis ATCC 9797 Satisfactorio
Clostridium perfringens ATCC 12919 Aceptable
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Bibliografía
J. Lab. Clin. Med., 17: 585 (1932)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Am. J. Clin. Path., 21: 884 (1951)
Medio para el recuento en placa (Agar) o por la técnica del NMP (caldo) y aislamiento de Hongos en diver-
sos tipos de muestras, especialmente en leches y productos lácteos.
Modo de empleo
El medio sólido suele sembrarse por incorporación en
gelosa o por profundidad. Ambos medios sólido y líquido
suelen incubarse entre 22-25ºC durante 3-5 días.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: completa.
Color: beige. pH: 6,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 32ºC
y observados a los 3-7 días.
Microorganismos Desarrollo
Candida albicans ATCC 2091 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Aspergillus sp Satisfactorio
Lactobacillus casei ATCC 9595 Inhibido
Bibliografía
Milk and Milk Products - Enumeration of Yeast and Moulds - Colony Count Technique at 25°C - ISO 6611 - (1981)
Se emplea para la identificación, cultivo y recuento de levaduras y hongos, principalmente en productos lác-
teos y otros productos alimenticios.
Historia Preparación
Shadwick demostró que este medio, en un estudio compa- Suspender 39 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
rativo con otros, daba muy buenos resultados en el recuen- hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esteri-
to de levaduras y hongos en las mantequillas saladas y sin lizar a 121ºC durante 15 minutos. Para obtener un pH de 3,5
salar. La APHA lo recomienda para análisis de productos añadir aproximadamente 12 ml/l de Acido Tartárico al 10%
lácteos y otros alimentos. La propia Farmacopea de los estéril. No refundir el medio.
Estados Unidos lo ha recomendado para el control de pro-
ductos farmacéuticos. Modo de empleo
Sembrar por incorporación en gelosa o en superficie
Fundamento por estría.
Por una parte la infusión de patata propicia un desarrollo sin Incubar entre 20º y 25ºC de 3 a 5 días.
restricciones de los hongos, complementado a su vez por el
contenido de glucosa del medio. Por otra parte su pH lige-
ramente ácido (5,6), selecciona el crecimiento de los hongos Reactivos auxiliares
en relación al de las bacterias. Incluso se puede bajar más el
Ref. Descripción Envase
pH con ácido láctico o ácido tartárico para hacerlo aún más
141034 Acido L(+)-Láctico (RFE, BP, Ph. Eur.) 1 l; 5 l; 25 l; 60 l
selectivo. Se puede llegar hasta un pH de 3,5.
PRS-CODEX *
Fórmula (por litro) 141066 Acido L(+)-Tartárico (RFE, USP-NF, 500 g; 1 kg; 5 kg;
D(+)-Glucosa .............................................. 20,0 g BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX * 25 kg; 50 kg
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige claro. pH: 5,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de
21-25ºC y observados a los 5 días.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA. (1978)
Compendium of Methods for the microbiological examination of foods. 3rd ed. APHA. (1992)
Se emplea como medio semisólido en aplicaciones de carácter general en microbiología. También como
medio diferencial de aerobios y anaerobios, en estudios sobre la fermentación de la glucosa y de movilidad.
Historia Preparación
Este medio se desarrolló principalmente en la industria con- Suspender 28,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
servera para determinar las causas de los efectos acidifican- tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir en
tes que tenían lugar como consecuencia del deterioro de los tubos llenándolos hasta la mitad y esterilizar a 118ºC
productos alimenticios cuando fermentaba la glucosa. durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta temperatura
ambiente. El medio puede ser usado varias semanas des-
Fundamento pués de su preparación.
Por la presencia del Azul de Bromotimol, cuando se produ-
ce la fermentación de la glucosa y el pH del medio baja, el Modo de empleo
indicador cambia de color. Como además se trata de un El medio, que se distribuye en tubos, se inocula por pun-
medio semisólido la formación de gas se traduce en la apa- ción hasta una profundidad de la mitad de su altura.
rición de burbujas e incluso de una espuma en la superficie Incubar entre 30º y 37ºC de 72 horas para mesófilos y
del medio. También se puede determinar la movilidad del 55-60°C durante 48 horas para termófilos.
microorganismo. Si el gérmen es móvil se difunde por todo
el medio y lo enturbia. En cambio si no es móvil sólo se
desarrolla donde se sembró. Puede añadirse Agar-Agar a Reactivos auxiliares
razón de 12 g/l para que sea medio sólido, de esta forma
Ref. Descripción Envase
podrá sembrarse la muestra utilizando la técnica de incor-
402302 Agar Bacteriológico Tipo Europeo 500 g; 5 kg;
poración en gelosa. El medio sólido es útil cuando se desea
CULTIMED * 25 kg; 50 kg
observar la colonia.
* Producto Opcional
Fórmula (por litro)
D(+)-Glucosa ............................................ 5,0 g
Peptona de Caseína ................................. 20,0 g
Azul de Bromotimol .................................. 0,01 g
Agar.......................................................... 3,5 g
pH final: 7,3 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige verdoso claro. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 9th ed. APHA. (1948)
Se emplea para el cultivo selectivo de Enterobacteriáceas, especialmente Shigella, en todo tipo de muestras.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Enterococcus faecalis ATCC 11700 Ligero
Bacillus cereus ATCC 11778 Nulo
Bibliografía
Amer. J. Clin. Path., 26: 411-417 (1956)
Publ. Health. Lab., 13: 59-62 (1955)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,5 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. AOAC, 57: 992-996 (1974)
Appl. Mic., 21: 32-37 (1971)
Appl. Microbiol., 16: 557-578 (1968)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente (puede tener un ligero precipitado).
Color: beige rosado. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Superficie
Microorganismos Desarrollo Base Gas H2S
Inclinada
Citrobacter freundii ATCC 8090 Bueno Amarilla Amarillo + +
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Amarilla Amarillo + —
Proteus vulgaris ATCC 6380 Bueno Roja Amarillo — +
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno Roja Amarillo — —
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Bueno Roja Amarillo + +
Bibliografía
KLIGLER. Am. J. Publ. Health., 7: 1042-1044 (1917)
Se emplea como medio diferencial para Salmonella y Arizona, basado en la descarboxilación de la Lisina.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 6,7 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Superficie
Microorganismos Desarrollo Base H2S
Inclinada
Citrobacter freundii ATCC 8090 Bueno Rojo-púrpura Amarillo +
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Rojo-púrpura Amarillo —
Proteus mirabilis ATCC 25933 Bueno Rojo-profundo Amarillo —
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno Rojo-púrpura Rojo-púrpura +
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno Rojo-púrpura Amarillo —
Salmonella arizonae Bueno Rojo-púrpura Rojo-púrpura +
Bibliografía
App. Microb., 9: 478-480. (1961)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Superficie
Microorganismos Desarrollo Base Gas H2S
Inclinada
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Amarilla Amarillo + —
Proteus vulgaris ATCC 13315 Bueno Amarilla Amarillo + +
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Bueno Roja Amarillo + +
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno Roja Amarillo — —
Bibliografía
J. Bact., 49: 516 (1945)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Lab. Clin. Med., 44: 301-307 (1954)
USP 24 (2000)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA (1981)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea para el recuento y detección de microorganismos Coliformes en aguas, leches y productos ali-
menticios. También se emplea en estudios del proceso de fermentación de la lactosa.
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalina.
Color: tostado claro. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA (1981)
Se emplea para la identificación y diferenciación de bacilos entéricos con capacidad de descarboxilar ami-
noácidos, en este caso la L-Lisina.
Historia Preparación
El interés de este medio y en general de todos aquellos que Disolver 14 g en 1 l de agua destilada. Distribuir en porcio-
contienen aminoácidos reside en poder diferenciar aquellos nes de 5 ml en tubos con tapón roscado y esterilizar a
microorganismos que son capaces de descarboxilar deter- 121ºC durante 15 minutos.
minados aminoácidos y los que no. Moeller fue el primero
que puso en práctica un ensayo de diferenciación basada Modo de empleo
en este principio. Más tarde se fueron desarrollando medios Sembrar el medio a partir de un cultivo puro de bacteria
diferenciales de uso corriente conteniendo Lisina, Ornitina o entérica extraído de un medio selectivo o de purificación.
Arginina según el caso. Incubar a 37ºC durante 4 días, observando cada día los
posibles cambios de color.
Fundamento La reacción de la Lisina-descarboxilasa forma parte de un
Cuando se procede al cultivo, todas las Enterobacteriáceas conjunto de pruebas bioquímicas para identificar las
fermentarán la Glucosa y el pH del medio bajará. A partir Enterobacteriáceas. El resultado obtenido en este medio se
de aquí, si son capaces de descarboxilar la L-Lisina, vol- puede considerar indicativo de género o especie, pero es
verá a subir el pH del medio, por lo que el Púrpura de preciso hacer más pruebas bioquímicas para la identifica-
Bromocresol recupera el color púrpura. Los tubos positivos ción final.
tomarán un color púrpura o violeta mientras que los tubos
negativos serán amarillos.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Lisina
Salmonella typhi ATCC 6539 +
Salmonella paratyphi A CECT 698 —
Proteus vulgaris ATCC 13315 —
Salmonella gallinarum NCTC 9240 +
Serratia liquifaciens (+) lenta
Bibliografía
J. Bact., 71: 339 (1956)
Fundamento Preparación
Por el contenido de hidrolizado enzimático de caseína y de Suspender 25 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
extracto de levadura se aportan los elementos nutritivos del hasta disolución total. Distribuir y esterilizar a 121ºC duran-
medio. El sodio cloruro aporta la concentración salina nece- te 15 minutos.
saria para mantener un nivel osmótico apropiado para el
buen desarrollo de los microorganismos. Como tal base de Modo de empleo
medio permite la adición de suplementos para aplicaciones Tratar según los fines previstos. Como caldo de enriqueci-
de carácter singular a criterio de cada usuario. miento se incuba entre 35º y 37ºC de 18 a 24 horas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Modo de empleo
Sembrar por estría en la superficie de la placa.
Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,1 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea para la investigación de Coliformes en aguas, leches, productos alimenticios y otras muestras de
interés sanitario.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Hyg., 8: 322-334 (1908)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparación
Se trata de una modificación del Agar MacConkey espe- Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
cialmente formulada para la aplicación enunciada. hasta ebullición y hervir hasta disolución total. Distribuir y
esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
Fundamento
Por la presencia de los colorantes los Estreptococos Modo de empleo
fecales fermentadores de la lactosa dan colonias fuerte- Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
mente rojas, pequeñas y rodeadas de un halo pálido. A
su vez los gérmenes no fermentadores de la lactosa dan
colonias incoloras.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
MacConkey, J. Hyg., 5: 33 (1905)
J. Clin. Path., 16: 32 (1963)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
World Health Organisation. International Standards for Drinking Water, 2nd. Ed. WHO (1963)
Dept. of Health Social Security. The bacteriological examination of water supplies. 4th Ed. HMSO. London (1969)
Windle Taylor E. The examination of waters and water supplies. 7th Ed. Churchill Ltd., London (1958)
Fundamento Preparación
Al tratarse de un medio semisólido las bacterias con capa- Suspender 22 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
cidad de movimiento se difundirán a partir de la línea de inó- hasta ebullición. Distribuir en tubos de ensayo hasta tener un
culo dando lugar a un enturbiamiento homogéneo debido a fondo de 6 a 7 cm y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
la distribución aleatoria de los microorganismos. Al contra-
rio las bacterias inmóviles permanecerán en la misma línea Modo de empleo
de aplicación. Si además los gérmenes son capaces de fer- Sembrar a partir de un cultivo puro con el asa de picadura.
mentar el manitol acidularán el medio y se producirá un Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
cambio de color al amarillo. Cuando esto no sea así se con-
servará el color rojo inicial. Si a su vez son capaces de redu-
cir el nitrato a nitrito, la presencia de este último se puede Reactivos auxiliares
poner de manifiesto al aparecer un cambio de color en el Ref. Descripción
medio al añadir los reactivos de Griess-Ilosvay.
171569 Reactivo de Griess-llosvay A RE 100 ml
Fórmula (por litro) 171570 Reactivo de Griess-llosvay B RE 100 ml
D(-)-Manita................................................ 7,5 g
Peptona de Caseína ................................. 10,0 g
Potasio Nitrato.......................................... 1,0 g
Rojo de Fenol ........................................... 0,04 g
Agar.......................................................... 3,5 g
pH final: 7,6 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosado. pH: 7,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 27ºC.
Microorganismos Desarrollo
Vibrio fischeri Satisfactorio
Vibrio harveyi Satisfactorio
Bibliografía
J. Marine Research, 4: 42 (1941)
Limnology and Oceanography, 5: 78 (1960)
Se emplea para el recuento microbiano en leches, carnes, productos alimenticios en general, productos far-
macéuticos, productos cosméticos y cualquier tipo de muestra.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 13762 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio
Bibliografía
J. Appl. Bact., 33: 363-370 (1970)
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 15 th ed. APHA. (1985)
Se emplea para el cultivo y recuento de Lactobacilos, tanto en productos lácteos como en productos ali-
menticios en general. Si se acidifica a pH=5,5 ±0,1 permite el recuento de los Lactobacilos propios del yogur.
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC,
en anaerobiosis y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Lactobacillus acidophilus ATCC 9224 Bueno
Lactobacillus casei ATCC 393 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Moderado-bueno
Bibliografía
J. Appl. Bact., 23: 130-135 (1960)
J. Appl. Bact., 22: 329-340 (1959)
Se emplea como medio diferencial para bacterias, principalmente Enterobacteriáceas, según la reacción del
Rojo de Metilo y la de Voges-Proskauer.
Fundamento Preparación
Clark y Lubs observaron que en un medio apropiado los Suspender 17 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
microorganismos Coliformes eran capaces de dar una hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir en
reacción ácida importante (bajar el pH del medio al menos tubos de ensayo y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
a 4,4) al fermentar la glucosa, mientras que los aerógenos
sólo producían una ligera acidificación del medio. Para Modo de empleo
reconocer este fenómeno emplearon Rojo de Metilo como Sembrar 2 tubos para cada muestra.
indicador. El Rojo de Metilo presenta color amarillo por Incubar entre 30º y 37ºC de 24 horas a 4 días. Añadir a uno
encima de un pH de 5,1 y sólo presenta color rojo cuando de los tubos 0,3 ml del Reactivo A y 0,1 ml del Reactivo B
el pH desciende hasta 4,4. de Voges Proskauer por cada ml de cultivo. Si aparece
Voges y Proskauer observaron que también en un medio coloración, la prueba es positiva. Coger el otro tubo de cul-
apropiado determinados gérmenes eran capaces de dar tivo y añadir 0,1-0,2 ml del Reactivo Rojo de Metilo. Si se
una reacción colorimétrica en base a la producción de observa la aparición de coloración roja la prueba es posi-
2,3-Butanodiol obtenido a partir de la fermentación de la tiva. Si los resultados son dudosos repetir el ensayo incu-
glucosa. La mezcla de peptonas constituye el componente bando 5 días a 30°C.
nutritivo del medio y el tri-Potasio Fosfato actúa como ele-
mento regulador del pH.
Para más información consultar página IV - 8 y página IV - 9 Reactivos auxiliares
de este manual. Ref. Descripción Envase
Fórmula (por litro) 254833 Reactivo A de Voges Proskauer DC 100 ml
D(+)-Glucosa .............................................. 5,0 g 254832 Reactivo B de Voges Proskauer DC 100 ml
Peptona...................................................... 7,0 g 251618 Rojo de Metilo solución 0,1% DC 100 ml
tri-Potasio Fosfato ...................................... 5,0 g
pH final: 6,9 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-48 horas.
Microorganismos Desarrollo MR VP
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Bueno — (amarillo) + (rojo)
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno + (rojo) — (sin cambio)
Klebsiella pneumoniae ATCC 23357 Bueno + (rojo) — (sin cambio)
Bibliografía
J. Bact., 20: 121 (1930)
J. Path. Bact., 34: 401 (1931)
Meat and Meat Products Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Se emplea para ensayos de sensibilidad de los microorganismos frente a antibióticos y sulfamidas. También
en aislamiento primario de Gonococos y Meningococos.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Enterococcus faecalis ATCC 33186 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Satisfactorio
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Listeria monocytogenes ATCC 19113 Satisfactorio
Bibliografía
Amer. J. Clin. Pathol., 45: 493-496 (1966)
J. Clin. Microbiol., 22: 369-374 (1985)
Standardization of Methods for Conducting Microbic Sensitivity Test. WHO. (1961)
Historia Preparación
Se trata de una modificación del medio original de Suspender 49 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Nickerson para el estudio de varias cepas de Candida. tar hasta ebullición y disolución total. No sobrecalentar.
NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Al distribuir girar sua-
Fundamento vemente para homogeneizar el precipitado.
El Extracto de Levadura, la Glicina y la Glucosa constituyen
los elementos nutritivos y energéticos necesarios para el Modo de empleo
crecimiento de las variedades de Candida. El Sulfito Sembrar la muestra en superficie e incubar 2-3 días a 22°C
Bismuto, que inhibe el crecimiento de la flora secundaria, es aproximadamente.
reducido a sulfuro por la acción del gérmen, dando lugar a Las colonias lisas de color pardo hasta negro son general-
colonias pardas, que en algunos casos determinan que, mente levaduras.
alrededor de la colonia, el medio también presente el mismo Para confirmar la presencia de C. albicans deben realizarse
color. Puede mejorarse la selectividad del medio añadiendo otros ensayos.
Neomicina a razón de 2 mg/l.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige claro. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Infect. Dis., 93: 43-56 (1953)
Medio recomendado para el cultivo de gran variedad de bacterias y para el recuento de organismos en aguas,
heces y otros materiales.
Microorganismos Desarrollo
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 12344 Satisfactorio
Microorganismos Desarrollo
Brucella abortus ATCC 4315 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Salmonella typhi ATCC 19430 Bueno
Proteus vulgaris ATCC 13315 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 12344 Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 6301 Bueno
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. APHA. (1980)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 667 (1993)
Medio para la diferenciación de bacilos Gram-negativos, basado en la determinación del metabolismo oxi-
dativo y/o fermentativo de los carbohidratos.
Sinónimo Preparación
Hugh Leifson, Medio Suspender 9,8 g en 1 l de agua destilada y dejar humectar
durante 5 minutos. Calentar y agitar hasta disolución total.
Historia Esterilizar a 118ºC durante 10 minutos. Asépticamente
Este medio se basa en la fórmula de Hugh y Leifson para añadir el hidrato de carbono a una concentración final del
diferenciar y clasificar microorganismos Gram-negativos 1%, esterilizado por filtración. Distribuir en tubos estériles y
capaces de metabolizar o no Glucosa, Lactosa, Sacarosa u añadir el Aceite de Vaselina a la mitad de ellos.
otro azúcar, con o sin oxidación, ya sea en ambiente de
aerobiosis o anaerobiosis. Se trata de una base de medio a Modo de empleo
la que habrá que añadir el azúcar que se desea estudiar. Sembrar un tubo (O) y otro (F) por picadura a partir de un
cultivo puro de la cepa que se desea estudiar.
Fundamento Incubar entre 35º y 37ºC de 18 a 48 horas. Los microor-
La peptona de caseína y el azúcar añadido constituyen la ganismos fermentadores dan reacción en los dos tubos.
base nutritiva y energética del medio. El Azul de Bromotimol Los oxidativos sólo en el tubo sin vaselina. La degradación
permite identificar las variaciones del pH. El di-Potasio oxidativa (color amarillo) sólo se observa en la parte más
Hidrógeno Fosfato actúa como regulador del pH y el Sodio cercana a la superficie del tubo mientras que en la fermen-
Cloruro aporta la salinidad necesaria para el buen creci- tativa, se observa el color amarillo, en toda la columna del
miento de los gérmenes. Los ensayos se hacen por dupli- medio. Los inactivos no provocan cambio en ningún tubo.
cado en dos tubos, uno cubierto con aceite de vaselina (F) También puede observarse si la cepa en estudio es inmó-
y otro sin (O). Además del cambio de color del indicador (de vil (crecimiento sólo en el canal de picadura) o móvil, (tur-
verde a amarillo) es necesario observar la producción de bidez en toda la columna con medio).
gas y el tipo de crecimiento obtenido.
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Metabolismo de Carbohidratos
CON CON CON
Microorganismos
GLUCOSA LACTOSA SACAROSA
O F O F O F
Especie ni oxidativa
Alcaligenes faecalis ATCC 8750 K K K K K K
ni fermentativa
Especie fermentativa
Escherichia coli ATCC 25922 AG AG AG AG K K
aerógena
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 A K K K K K Oxidativa
Salmonella enteritidis ATCC 13076 AG AG K K K K Especie fermentativa
Especie fermentativa
Shigella flexneri ATCC 12022 A A K K K K anaerógena
Bibliografía
J. Bact., 66: 24-26 (1953)
J. Clin. Microbiol., 25: 1730-1734 (1987)
Historia Preparación
La formulación de este medio corresponde a la formulación Disolver 30 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta diso-
dada por Mossel y colaboradores en 1970 para el recuen- lución y esterilizar a 118ºC durante 15 minutos. NO
to de hongos y levaduras. SOBRECALENTAR. Dejar enfriar el agar hasta 45-60ºC y
añadir 1 ml de Oxitetraciclina al 10% ó 0,5 ml de
Fundamento Gentamicina al 10 %, ambas en solución acuosa y esteri-
La Glucosa y el Extracto de Levadura son la base nutritiva lizadas por filtración. Mezclar bien y repartir en placas de
del medio. La adición de la Oxitetraciclina o de la Petri estériles. No recalentar.
Gentamicina confieren el carácter selectivo al medio. Se
presentan ciertas variaciones en la formulación de este Modo de empleo
medio, según las publicaciones consultadas; principalmen- La muestra se diluye y se siembra en superficie. Se incu-
te a nivel de la concentración de glucosa. ba entre 22-25ºC durante 5 días. Pueden precisarse
mayores tiempos de incubación para microorganismos
Fórmula (por litro) de crecimiento lento.
Extracto de levadura................................... 5,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 10,0 g
Agar............................................................ 15,0 g Reactivos auxiliares
pH final: 6,5 ± 0,2 Ref. Descripción Envase
374948 Oxitetraciclina Clorhidrato PB 5 g; 25 g
Gentamicina (Sulfato)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 6,5 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Inhibido
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Aspergillus niger Satisfactorio
Bibliografía
J. Appl. Bact., 33: 454-457 (1970)
Lab. Pact., 11: 109-112 (1962)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-48 horas, después de haber añadido 10 ml de glicerina.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografía
J. Clin. Path., 18: 752-756 (1965)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparación
La formulación del medio es una modificación de la com- Suspender 37 g en 1 l de agua destilada, añadir 10 ml de
posición del Medio King B y se basa en las recomendacio- glicerina y mezclar bien. Dejar humectando de 10 a 15
nes de la USP. minutos. Calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante
1 minuto. No sobrecalentar. Esterilizar a 121ºC durante 15
Fundamento minutos. Si se distribuye en tubos de ensayo dejar solidifi-
Hay Pseudomonas que elaboran fluoresceína sin piociani- car en plano inclinado.
na, otras elaboran sólo piocianina y otras que elaboran las
dos. Se trata de un medio que potencia la producción de Modo de empleo
fluoresceína e inhibe la de piocianina. Ambos colorantes se Sembrar en superficie para obtener colonias lo más aisla-
difunden en el medio dando una coloración amarilla fluores- das posibles.
cente el primero y azul el segundo. Si se obtienen colores Incubar a 37ºC durante una semana e inspeccionar
intermedios más o menos verdosos indica que se han pro- cada día.
ducido ambos pigmentos y que por lo tanto la piocianina no
ha quedado completamente inhibida.
Reactivos auxiliares
Fórmula (por litro)
Ref. Descripción Envase
Magnesio Sulfato ........................................ 1,5 g
Peptona...................................................... 20,0 g 131339 Glicerina PA-ACS-ISO 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ..................... 1,5 g
Agar............................................................ 14,0 g
pH final: 7,0 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Lab. Clin. Med., 44: 301-307 (1954)
J. Bact., 23: 135 (1932)
Se emplea como medio selectivo para el aislamiento de bacterias ácido-lácticas en la cerveza y en el con-
trol del proceso de fermentación.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 5,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas, después de haber añadido 10 ml por litro de Tween 80 y 3 g de Feniletanol.
Microorganismos Desarrollo
Lactobacillus fermentum ATCC 9338 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Bibliografía
Procedings of the American Society of Brewing Chemists 9th compress. (1974)
J. Inst. Brewing., 87: 303-321 (1981)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: azul-verdoso. pH: 5,5 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 (conc. 99%) < 5%
Salmonella typhimurium ATCC 14028 (conc. 1%) > 95%
Bibliografía
J. Clin. Path., 17: 261-266 (1956)
Appl. Microbiol., 7: 63-66 (1959)
Caldo de enriquecimiento para Salmonella, con excepción S. typhi en alimentos y otros materiales.
Historia Preparación
La formulación de este medio corresponde a una modifica- Disolver 26,75 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta
ción del caldo propuesto por Vassiliadis y colaboradores en disolución y esterilizar en autoclave 115 ºC durante
1976 basada en una optimización de la concentración de 15 minutos.
Cloruro de Magnesio. Es un buen caldo de enriquecimiento
para Salmonella a excepción de las muestras en que se Modo de empleo
sospeche la existencia de S. typhi. La siembra se hace con material procedente directamente
de la muestra o de un pre-enriquecimiento en Agua de
Fundamento Peptona Tamponada (código 413795). Habitualmente se
El Verde de Malaquita y el Cloruro de Magnesio inhiben el siembra 0,1 ml de muestra en 10 ml de Caldo. Se incuba
crecimiento de la flora intestinal normal. En este medio res- 24 horas a 42ºC ±1°C y se resiembra en medios selectivos.
pecto al Caldo Rappaport (CULTIMED 413798) se han
reducido las concentraciones de los mencionados inhibido-
res, consiguiendo un mejor crecimiento de Salmonella a Reactivos auxiliares
una temperatura de 42ºC. La peptona de Soja es el aporte
Ref. Descripción Envase
nutritivo y los fosfatos mantienen el pH del medio.
413795 Agua de Peptona Tamponada 500 g; 5 kg
Fórmula (por litro) CULTIMED *
Peptona de soja ..................................... 4,5 g * Producto Opcional
Potasio di-Hidrógeno Fosfato ................. 1,26 g
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ................. 0,18 g
Magnesio Cloruro (anhidro) ..................... 13,58 g
Sodio Cloruro ......................................... 7,20 g
Verde de Malaquita ................................. 0,036 g
pH final: 5,2 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: azul verdoso. pH: 5,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli (conc. 99%) ATCC 25922 < 5%
Salmonella typhimurium (conc. 1%) ATCC 14028 > 95%
Bibliografía
J. Appl. Bact., 54: 69-76 (1983)
J. Appl. Bact., 59: 143-145 (1985)
Appl. Environm. Microbiol., 4: 615-618 (1981)
Se emplea para el recuento bacteriano en leches, leches desnatadas, helados y derivados de la leche
en general.
Fundamento Preparación
La leche desnatada en polvo, la peptona de caseína y el Suspender 24,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
extracto de levadura constituyen los nutrientes del medio, tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
mientras que la glucosa aporta la fuente energética para el esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
buen desarrollo de la mayor parte de las bacterias. Este
medio presenta un alto valor nutritivo por lo que cubre un Modo de empleo
espectro más amplio de gérmenes, pudiéndose obtener Incubar entre 30º y 37ºC durante 72 horas. Otras condicio-
mayor número de colonias. nes de incubación pueden ser aplicables según los gérme-
nes en estudio.
Fórmula (por litro)
Leche Desnatada en polvo ......................... 1,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 1,0 g
Extracto de Levadura ................................. 2,5 g
Peptona de Caseína ................................... 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,0 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 13762 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio
Bibliografía
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA. (1976)
Historia Preparación
Este medio fue formulado por Barnes y Ingram para el cre- Disolver 50 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
cimiento de Clostridios a partir de inóculos muy pequeños. hasta disolución total. Esterilizar a 121ºC durante 15 minu-
El medio no contiene inhibidores y emplea cisteína como tos. Dejar enfriar hasta 45-50°C y añadir 0,02 g/l de
agente reductor. Polimixina B en disolución estéril.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Clostridium bifermentans ATCC 19299 Bueno
Clostridium difficile Bueno
Clostridium perfringens ATCC 13124 Bueno
Clostridium perfringens ATCC 10543 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Bacillus cereus ATCC 11778 Bueno
Bibliografía
J. Appl. Bact., 19: 177-178 (1956)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 765 (1993)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparación
El medio se basa en la fórmula original de Rogosa, Mitchell Suspender 75 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
y Wiseman, quienes elaboraron un medio más selectivo, hasta ebullición y disolución total. Añadir 1,32 ml de Acido
para el recuento de Lactobacilos, que los hasta entonces Acético al 96% y mezclar bien. Calentar hasta 90º-100ºC
empleados a base de tomate. En este medio se inhibía el durante 2 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
crecimiento de Estreptococos, Proteus y Mohos. Distribuir asépticamente.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 5,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Lactobacillus casei ATCC 9595 Satisfactorio
Lactobacillus fermentun ATCC 9338 Satisfactorio
Lactobacillus plantarum ATCC 8014 Satisfactorio
Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografía
J. Bact., 62: 132-133 (1951)
Lab. Practice, 9: 223-227 (1960)
Medio de cultivo selectivo utilizado en el recuento y aislamiento de hongos y levaduras. Recomendado prin-
cipalmente en muestras procedentes de alimentos y medio ambiente.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 778 (1993)
Historia Preparación
La formulación de este medio se debe a Rothe y ha sido Disolver 34,7 g en 1 l de agua destilada para un caldo nor-
recomendado por otros investigadores para el recuento de mal; para uno de doble concentración disolver 69,4 g.
Enterococos en muestras de interés sanitario siguiendo el Distribuir y esterilizar a 118ºC durante 15 minutos.
método del número más probable (NMP). Este medio
corresponde a las recomendaciones de APHA para análisis Modo de empleo
de aguas. Para muestras de volumen superior a 1 ml se utiliza Caldo
doble concentrado.
Fundamento Incubar a 37ºC durante 24-48 horas.
Por la presencia de Polipeptona y Glucosa se aportan los El crecimiento de microorganismos en el medio se aprecia
elementos nutritivos y energéticos del medio. El Sodio por la turbidez que aparece. Para confirmar el indicio de
Azida inhibe el crecimiento de los microorganismos Gram- Enterococos resembrar en Caldo EVA (Cultimed 413743) si
negativos y no afecta el crecimiento de los Enterococos. no hay crecimiento desechar la presencia de Enterococos.
El Sodio Cloruro mantiene el nivel salino necesario para el
buen crecimiento de estos gérmenes. Los Enterococos
(E. faecalis, S. durans, S. bovis y S. equinus) son indica- Reactivos auxiliares
dores de contaminación fecal aun cuando no hay
Ref. Descripción Envase
Coliformes en la muestra (los coliformes menos resisten-
413743 EVA (Azida y Violeta de Etilo), 500 g; 5 kg
tes pueden haber desaparecido).
Caldo CULTIMED *
Fórmula (por litro) * Producto Opcional
Sodio Azida ................................................ 0,2 g
D(+)-Glucosa .............................................. 7,5 g
Extracto de Carne ...................................... 4,5 g
Peptona...................................................... 15,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 7,5 g
pH final: 7,2 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido/Leve
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido/Leve
Enterococcus faecalis ATCC 19433 Bueno
Bibliografía
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 14th ed. APHA. (1975)
Peligrosidad
Se utilizan para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeración de estos microorganismos en ali-
mentos, muestras clínicas y otros materiales. Los medios líquidos o caldos están indicados para pruebas de
esterilidad; los agares Sabouraud con glucosa están especialmente indicados para dermatofitos, mientras
que los que contienen maltosa se favorece el crecimiento de hongos filamentosos.
Se aconseja utilizar un medio suplementado con antibiótico cuando las muestras están altamente contaminadas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige claro. pH: 5,6 ± 0,2
Desarrollo en Sabouraud,
Microorganismos
Medio Líquido
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 26790 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Parcialmente Inhibido
Lactobacillus casei ATCC 9595 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
Bibliografía
J. Bact., 62: 613 (1951)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. III (2000)
Se emplea para el aislamiento selectivo y recuento de Estafilococos patógenos en productos lácteos, cárni-
cos, marinos y otros productos alimenticios. También se emplea con el mismo fin en productos farmacéuti-
cos y cosméticos.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosáceo. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 50: 201-203 (1945)
USP 25 (2002)
Historia
Hormaeche, Surraco, Hardy y otros han encontrado que la
formulación de este medio es la mejor para el aislamiento Fórmula (por litro)
de Salmonella y Shigella. Una de las principales aplicacio- Extracto de Carne ............................... 5,0 g
nes es el diagnóstico de las enfermedades diarreicas debi- Hierro(III) Citrato................................... 1,0 g
das a estos gérmenes. La composición del medio permite Lactosa ............................................... 10,0 g
detectar también la producción de Hidrógeno Sulfuro. Peptona............................................... 5,0 g
Su formulación corresponde a las recomendaciones de la Sales Biliares ....................................... 8,5 g
APHA para análisis de alimentos. Rojo Neutro ......................................... 0,025 g
tri-Sodio Citrato ................................... 8,5 g
Fundamento Sodio Tiosulfato................................... 8,5 g
Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citra- Verde Brillante ..................................... 0,330 mg
to se consigue la inhibición de las bacterias Gram-positivas. Agar .................................................... 13,5 g
Por el mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato se pH final: 7,0 ± 0,2
frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus
que podrían acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias Preparación
que no fermentan la lactosa dan colonias incoloras, mien- Suspender 60 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
tras que las que la fermentan hacen virar el rojo neutro por hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. NO ESTERILIZAR
la producción de ácido y quedan claramente diferenciadas. EN AUTOCLAVE. Dejar enfriar hasta 45-50ºC y distribuir en
También se diferencian los microorganismos productores placas de Petri estériles, empleando 20 ml por placa. Dejar
de Hidrógeno Sulfuro que da un precipitado negro de solidificar el medio.
Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de la colonia.
La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos Modo de empleo
suficientes para estas especies patógenas, aunque algunas Sembrar abundantemente por estría en la superficie del
Shigellas muy exigentes se desarrollen lentamente. medio. Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: amarillo muy claro a rosa. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 788 (1993)
Se emplea, añadiendo sangre o sangre cocida, para el cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes,
sobre todo patógenos y para su determinación. Si no se añade sangre, es adecuado como base para la pre-
paración de otros medios especiales.
Historia Preparación
Se trata básicamente del medio de Huntoon modificado. Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
Más tarde Norton observó que el pH ligeramente bajo era hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
muy útil para el cultivo de Estreptococos y Neumococos. 121ºC durante 30 minutos (para cantidades de más de
1 litro). Homogeneizar y distribuir en tubos de ensayo y
Fundamento esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de Para preparar placas de Agar Sangre incorporar 5 a 8% de
prácticamente todos los microorganismos que pudieran Sangre desfibrinada antes de distribuir en placas.
estar presentes. Si se añade sangre se pueden determinar Para una mejor conservación de la placa de Agar Sangre
las distintas formas de hemólisis que pudieran tener lugar. y para obtener halos hemolíticos más claros ajustar el pH
Si se calienta se obtiene el Agar Chocolate, también muy a 6,8 ± 0,2.
empleado. Por la adición de distintos antibióticos se obtie- Si se utiliza como medio basal se obtendrán mejores creci-
nen medios con caracteres selectivos. mientos a pH 7,3 ± 0,2.
Fórmula (por litro) Modo de empleo
Infusión del Músculo Sembrar las placas en la superficie del medio.
Cardíaco (a partir de 375 g) ........................... 10,0 g Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas.
Peptona de Carne ...................................... 10,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g Reactivos auxiliares
pH final: 7,3 ± 0,2 Ref. Descripción Envase
Sangre desfibrinada
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Placas preparadas con un 5% de sangre de carnero.
Bibliografía
J. Clin. Microbiol., 25: 2040-2043 (1987)
J. Lab. Clin. Med., 17: 558-565 (1932)
Historia Preparación
Edwards y otros pusieron de manifiesto que el empleo de Suspender 33,2 g en 1 l de agua destilada; calentar y
Sodio Azida permitía el crecimiento de la flora Gram-positi- agitar hasta ebullición y disolución total y hervir durante
va, mientras inhibía a los Gram-negativos. Los microorga- 1 minuto. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Si se
nismos del género Proteus crecen, pero no se dispersan. desea añadir sangre, dejar enfriar hasta 45ºC y añadir
asépticamente un 5% de sangre de carnero desfibrinada
Fundamento y estéril. Mezclar bien y distribuir.
Es un medio con una buena base nutritiva. Si se añade un
5% de sangre es adecuado para determinar reacciones Modo de empleo
hemolíticas típicas y para favorecer el crecimiento de micro- Sembrar en la superficie del medio.
organismos exigentes. Incubar a 37ºC de 36 a 48 horas.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24-48 horas y después de añadir un 5% de sangre desfibrinada de carnero.
Bibliografía
J. Bact., 42: 653-664 (1941)
J. Infect. Dis., 67: 113-115 (1940)
Peligrosidad
Se emplea para el cultivo de especies bacterianas anaeróbicas presentes en el tracto intestinal. Se puede
usar como base de agar añadiendo sangre, ácido nalidíxico, colistina, canamicina, vancomicina, neomicina
u otros aditivos adaptándolo a una aplicación concreta.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro. pH: 7,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Bacteroides fragilis ATCC 25285 Satisfactorio
Clostridium butyricum ATCC 9690 Satisfactorio
Clostridium perfringens ATCC 12924 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Bibliografía
J. Exp. Med., 122: 59 (1965)
J. Appl. Micro., 22: 655 (1971)
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Parcialmente inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Citrobacter sp Satisfactorio
Proteus vulgaris ATCC 13315 Satisfactorio
Salmonella gallinarum NCTC 9240 Satisfactorio
Arizona sp. Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Bibliografía
Am. J. Hyg., 24: 423-432 (1936)
Compendium of Methods for the microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Peligrosidad
R: 20/22-33-51 Nocivo por inhalación y por ingestión. Peligro de efectos acumulativos.Tóxico para los
organismos acuáticos.
S: 23c-45-61 No respirar los vapores. En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico
(si es posible, muéstrele la etiqueta). Evítese su liberación al medio ambiente. Recábense
instrucciones específicas de la ficha de datos de seguridad.
Historia Preparación
Guth fue el primero que empleó un caldo en base de Suspender 23 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien
Selenito para el enriquecimiento selectivo de Salmonella y calentar ligeramente hasta disolución total. Distribuir
después de haber comprobado el efecto tóxico del Selenito en tubos de ensayo y esterilizar al baño maría durante
frente a la Escherichia coli. Más tarde Leifson retomó los 15 minutos o por filtración si se prevé un largo almace-
trabajos de Guth y modificó el medio para optimizar los namiento. No sobrecalentar. NO ESTERILIZAR EN
resultados. La composición actual corresponde a la des- AUTOCLAVE.
crita en la USP y APHA. Tras un largo almacenamiento del medio deshidratado el
caldo preparado puede ser rojo/rojizo. Ello altera la eficacia
Fundamento del medio.
Por la presencia del Sodio Hidrógeno Selenito se inhibe el
crecimiento de Coliformes y Enterococos, por el contrario Modo de empleo
Salmonella, Proteus y Pseudomonas no son inhibidos. La Los tubos se incuban a 37ºC de 18 a 24 horas. La apari-
Cistina tiene un efecto positivo en el crecimiento de ción de un precipitado rojo antes de la inoculación indica un
Salmonella. El efecto inhibidor del Selenito desaparece a sobrecalentamiento y hace que disminuyan las propiedades
partir de las 18-24 horas de incubación y el crecimiento de selectivas del medio.
la flora acompañante puede dificultar el de Salmonella. La En caso de que la muestra sea líquida se recomienda utili-
mayoría de métodos de análisis descritos recomiendan la zar el caldo doble concentrado y mezclar éste con la mues-
utilización simultánea de otro caldo de enriquecimiento. tra a proporción de 1:1. Cuando la muestra es sólida y
puede suponer la presencia de abundantes residuos se
Fórmula (por litro) recomienda inocular el medio a partir de una dilución de
Sodio Hidrógeno Selenito ......................... 4,0 g 1:10, puesto que la presencia de residuos puede inactivar
L(-)-Cistina ................................................ 0,01 g el efecto selectivo del medio.
Lactosa..................................................... 4,0 g Después del enriquecimiento sembrar en un medio selectivo.
Mezcla de Peptonas ................................. 5,0 g
tri-Sodio Fosfato ....................................... 10,0 g
pH final: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Ninguno
Salmonella choleraesuis ATCC 12011 Satisfactorio
Salmonella pullorum ATCC 9120 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Bibliografía
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Peligrosidad
R: 20/22-33-51 Nocivo por inhalación y por ingestión. Peligro de efectos acumulativos. Tóxico para los
organismos acuáticos.
S: 23c-45-61 No respirar los vapores. En caso de accidente o malestar, acúdase inmediatamente al médico
(si es posible, muéstrele la etiqueta). Evítese su liberación al medio ambiente. Recábense
instrucciones específicas de la ficha de datos de seguridad.
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de especies de Salmonella a partir de diversos materiales, prin-
cipalmente alimentos.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema ligeramente verde. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Crecimiento
Microorganismos Concentración del inóculo
6 horas 24 horas
Escherichia coli ATCC 11775 aprox. 99% < 30% < 5%
Salmonella typhimurium ATCC 14028 aprox. 1% > 70% > 95%
Bibliografía
Meat and Meat Products-Detection of Salmonella (Reference Method). ISO 3565. (1975)
Appl. Microbiol., 3: 217 (1955)
Peligrosidad
R: 20/22-33-51 Nocivo por inhalación y por ingestión. Peligro de efectos acumulativos. Tóxico para los
organismos acuáticos.
S: 23c-45-61 No respirar los vapores. En caso de accidente o malestar, acúdase inmediatamente al médico
(si es posible, muéstrele la etiqueta). Evítese su liberación al medio ambiente. Recábense
instrucciones específicas de la ficha de datos de seguridad.
Historia Preparación
La experiencia adquirida en la diferenciación de Salmonella Suspender 30 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
y Shigella de organismos Coliformes basada en la produc- hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir en
ción de hidrógeno sulfuro y la movilidad o no de estas bac- tubos y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Dejar solidi-
terias dio lugar a la preparación de este medio. Actualmente ficar en posición vertical.
corresponde a las recomendaciones en la APHA.
Modo de empleo
Fundamento Sembrar a partir de un cultivo puro por picadura.
La mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo del Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
medio. La movilidad se manifiesta mediante una turbidez Si el microorganismo es móvil se observa turbidez en todo
que se forma alrededor de la línea de siembra. El Sodio el medio, mientras que si es inmóvil sólo hay crecimiento en
Tiosulfato y el Amonio Hierro(III) Sulfato permiten poner de la línea de siembra. La presencia de Indol da lugar a una
manifiesto la formación de Hidrógeno de Sulfuro por el pre- coloración rojo-púrpura al añadir el reactivo de Kovacs (ver
cipitado negro que se forma. La producción del Indol es página IV - 8).
fácilmente detectable al añadir unas gotas de reactivo de
Kovacs al cultivo.
Reactivos auxiliares
Fórmula (por litro)
Ref. Descripción Envase
Amonio Hierro(III) Sulfato............................. 0,2 g
Peptona de Carne ...................................... 6,1 g 252908 Reactivo de Kovacs DC 100 ml
Peptona de Caseína ................................... 20,0 g
Sodio Tiosulfato.......................................... 0,2 g
Agar............................................................ 3,5 g
pH final: 7,3 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Lab. Clin. Med., 25: 649 (1940)
J. Bact., 31: 575 (1936)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Se emplea para la identificación y recuento de Enterococos en aguas y otras muestras biológicas, tanto por
la técnica de recuento clásica como por la de filtración por membrana.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 74: 591-595 (1957)
DOCE nº C131. (1995)
ISO 7899 - 2 (1984)
UNE 77 - 076-2 (1991)
Peligrosidad
Se emplea como medio de uso general para el cultivo de todo tipo de microorganismos.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,3 ± 0,2
Microorganismos Desarrollo
Brucella abortus ATCC 4315 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Desarrollo con
Microorganismos Desarrollo Hemólisis
5% sangre de carnero
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Bueno Bueno —
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno Bueno beta
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Bueno Bueno —
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Bueno Bueno alfa
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno Bueno beta
Bibliografía
USP 25 (2002)
J. Clin. Microbiol., 23: 600-603 (1986)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparación
Se trata de una modificación del medio de Wilson y Blair y Suspender 40 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
del de Mossel. Es muy cómodo de emplear al haber inhibi- hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y este-
do el crecimiento de la flora secundaria y dado su carácter rilizar a 118ºC durante 15 minutos.
moderadamente selectivo.
Modo de empleo
Fundamento Generalmente se siembra por incorporación en gelosa,
La mayor parte de los Clostridios reducen el sulfito a sulfu- cuando se utilizan tubos éstos se sellan con aceite de
ro, que se puede poner de manifiesto por el color negro vaselina estéril.
producido con los iones de hierro. El Sulfato de Polimixina Incubar entre 35º y 37ºC durante 24 horas. El Clostridium
y la Sulfadiazina inhiben el crecimiento de la flora acom- perfringens forma colonias negras al igual que otras espe-
pañante y la peptona de caseína y el extracto de levadura cies como C. botulinum y C. sporogenes. Cuando se incu-
representan el aporte de nutrientes. ba a 46°C, se favorece el crecimiento de C. perfringens. Sin
embargo, deben realizarse pruebas complementarias para
Fórmula (por litro) la identificación.
Sodio Sulfito ............................................. 0,5 g
Sulfato de Polimixina B ............................. 0,01 g
Sulfadiazina .............................................. 0,12 g Reactivos auxiliares
Peptona de Caseína ................................. 15,0 g
Ref. Descripción Envase
Extracto de Levadura................................ 10,0 g
Hierro(III) Citrato ........................................ 0,5 g 141003 Aceite de vaselina (RFE, USP, 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX *
Agar.......................................................... 13,0 g
* Producto Opcional
pH final: 7,0 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Clostridium perfringens ATCC 12919 Satisfactorio
Clostridium sporogenes ATCC 11437 Aceptable
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido-moderado
Bibliografía
Appl. Microbiol., 10: 193-199 (1962)
Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella typhi y de otras Salmonellas
en heces, aguas y productos alimenticios muy contaminados.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: con precipitado.
Color: verde claro. pH: 7,7 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Hyg., 26: 374-391 (1927)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
USP 25 (2002)
J. Appl. Bact., 25: 213-224 (1962)
Se emplea para el cultivo y aislamiento de Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus en productos marinos,
muestras clínicas o de diversos orígenes.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro con matiz verde. pH: 8,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Hyg. Camp., 68: 189-196 (1970)
Jap. J. Bact., 18: 387-391 (1963)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Cholera Information. WHO. (1965)
Se emplea como medio de enriquecimiento selectivo para aislar Salmonella en heces, orina, productos far-
macéuticos y productos alimenticios.
Historia Preparación
El origen de este medio hay que buscarlo en los trabajos de Suspender 46 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Mueller para encontrar un caldo que permitiera el creci- tar hasta ebullición. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante
miento de microorganismos tifoides y paratifoides y que al 15 minutos. Si se va a utilizar el mismo día, añadir asépti-
mismo tiempo inhibiera los Coliformes. Más tarde Kauffman camente 20 ml de solución yodo-yodurada por litro de
modificó el medio obteniendo un mayor número de creci- medio, o proporcionalmente a la cantidad usada.
mientos positivos que con el medio original. La formulación Eventualmente puede añadirse 10 ml/l de una solución al
actual es el resultado de sucesivas mejoras y está recono- 0,1% de Verde Brillante, así como Novobiocina a razón
cida por USP. de 0,04 g/l, ambos esterilizados por filtración.
Al distribuir el Caldo repartir homogéneamente el precipita-
Fundamento do existente. No recalentar el medio.
Por la presencia de las sales biliares se inhibe el crecimiento Preparación de la solución Yodo-yodurada:
de los microorganismos Gram-positivos. El tetrationato se Yodo ........................................................... 6 g
produce a partir del Tiosulfato, cuando después de esterili- Potasio yoduro ........................................... 5 g
zar el medio se añade asépticamente la solución yodo-yodu- H2O destilada.............................................. 20 ml
rada; el tetrationato tiene un efecto inhibidor sobre los
Coliformes y la mayor parte de las bacterias intestinales. Los Mezclar bien y esterilizar por filtración.
Proteus y las Salmonellas pueden desarrollarse correcta-
Modo de empleo
mente. A su vez el Calcio Carbonato mantiene el pH del
medio al neutralizar el Acido Sulfúrico producido por la Sembrar el medio con el inóculo e incubar entre 35º y 37ºC
reducción del tetrationato, de lo contrario el medio se iría aci- de 18 a 24 horas. Pasado este tiempo sembrar en medios
dificando y se detendría el crecimiento de todos los gérme- selectivos.
nes. La mezcla de peptonas constituye el soporte nutritivo.
La USP aconseja la adición de Verde Brillante que inhibe
principalmente la flora Gram-positiva, sin embargo a veces Reactivos auxiliares
se desaconseja la adición del Verde porque el medio es muy Ref. Descripción Envase
inhibidor. Podemos inhibir el desarrollo de Proteus añadien- 131771 Yodo resublimado perlas 100 g; 250 g; 1 kg;
do 0,04 g/l de Novobiocina. PA-ACS 5 kg; 25 kg
131542 Potasio Yoduro PA-ACS-ISO 250 g; 500 g; 1 kg
Fórmula (por litro)
5 kg; 25 kg; 50 kg
Calcio Carbonato........................................ 10,0 g
Novobiocina *
Peptona...................................................... 5,0 g
251758 Verde Brillante DC * 25 g; 100 g
Sales Biliares .............................................. 1,0 g
Sodio Tiosulfato.......................................... 30,0 g * Producto Opcional
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Escaso-nulo
Salmonella choleraesuis ATCC 12011 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Bibliografía
J. Clin. Path., 12: 568-571 (1959)
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
FDA. Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC (1995)
Para el enriquecimiento selectivo de Salmonella en diversas muestras, especialmente para carnes y sus
derivados.
Historia Preparación
La formulación de este medio fue elaborada por Kauffmann, Disolver 82 g en 1 l de agua destilada. Si es necesario,
basándose en el Caldo Tetrationato descrito por Muller y el calentar suavemente y enfriar. NO ESTERILIZAR EN AUTO-
Caldo Tetrationato Bilis Verde Brillante. Esta formulación CLAVE. Queda un sedimento de Calcio Carbonato.
coincide con las recomendaciones dadas por distintos Distribuir en tubos, repartiendo de forma homogénea el pre-
organismos oficiales. cipitado que haya quedado. Antes de usar añadir 20 ml/l de
solución de yodo y yoduro potásico y 10 ml/l de solución al
Fundamento 0,1 % de Verde brillante. No recalentar el medio.
El Tetrationato del medio sólo se formará a partir del Preparación de la solución: 6 g de Yodo, 5 g de Yoduro
Tiosulfato al añadirle la solución de Yodo. El Tetrationato es Potásico en 20 ml de Agua destilada. Mezclar bien y esteri-
inhibidor del crecimiento de Coliformes y otros organismos lizar por filtración.
de la flora intestinal habitual. El Calcio Carbonato compen- La base de caldo sin los aditivos se conserva durante bas-
sa la bajada de pH que produciría Salmonella y otros orga- tante tiempo a 4ºC, después de añadir la solución de yodo
nismos al reducir el Tetrationato. debe ser utilizado.
A esta base además de adicionarle la solución de Yodo es
aconsejable añadirle Verde Brillante que es un buen inhibi- Modo de empleo
dor la flora Gram-positiva. Inocular 1 ml de muestra a 9 ml de caldo (ó 10 g de mues-
tra en 100 de caldo).
Fórmula (por litro) Se incuba a 37ºC ó 42ºC de 24-48 horas, pasado este
Bilis de Buey............................................... 4,7 g tiempo se resiembra en medios selectivos.
Calcio Carbonato........................................ 25,0 g
Extracto de carne ....................................... 0,9 g
Extracto de levadura................................... 1,8 g Reactivos auxiliares
Peptona de Carne ...................................... 4,5 g
Ref. Descripción Envase
Sodio Cloruro ............................................. 4,5 g
Sodio Tiosulfato.......................................... 40,7 g 131771 Yodo resublimado perlas 100 g; 250 g; 1 kg;
PA-ACS 5 kg; 25 kg
pH final: 7,6 ± 0,2 131542 Potasio Yoduro PA-ACS-ISO 250 g; 500 g; 1 kg;
5 kg; 25 kg; 50 kg
251758 Verde Brillante DC 25 g; 100 g
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total, salvo precipitado de Calcio Carbonato.
Color: beige. pH: 7,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Meat and Meat Products. Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Comp. Rend. Soc. Biol., 89: 434-437 (1923)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media
Historia Fundamento
Los gérmenes anaeróbicos se desarrollan aeróbicamente Las Peptonas y/o Extracto de Levadura son los aportes
en presencia de sulfuros. A partir de estas observaciones se nutritivos del medio, mientras que la Glucosa es el aporte
constató que en presencia de compuestos con grupos fun- energético. El Sodio Tioglicolato y la L-Cistina permiten el
cionales tioalcohólicos se producía un efecto similar. De desarrollo de gérmenes anaerobios en condiciones aero-
esta manera se fueron desarrollando una serie de medios bias. La Resazurina indica el estado de oxidación y el Sodio
de cultivo en base a Sodio Tioglicolato, diferentes entre sí y Cloruro aporta la salinidad en el medio.
orientados cada uno de ellos a aplicaciones específicas.
* Producto Opcional
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH (413815 y 413912): 7,1 ± 0,2 pH (413816): 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea para el cultivo de Estreptococos ß-hemolíticos con fines de tipificación serológica. También como
medio general para enriquecimiento de microorganismos patógenos y cultivos con sangre.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Streptococcus mitis ATCC 9895 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Bibliografía
App. Microb., 2: 177 (1954)
J. Exp. Med., 81: 573 (1945)
Se emplean para favorecer y conservar la viabilidad de los microorganismos mientras son transportados al
laboratorio.
Historia Fundamento
Stuart y colaboradores fueron los primeros en formular Se trata de un medio no nutritivo, semisólido y reductor que
medios que permitieran el transporte rutinario de especíme- previene la destrucción de los gérmenes y los mantiene en
nes biológicos. Cada uno de los medios empleados está estado estacionario. Su composición salina permite conser-
pensado para un determinado abanico de aplicaciones y var la muestra hasta su entrega al laboratorio.
permiten introducir modificaciones en función de las carac- En la formulación del medio de Transporte Stuart, hay Azul
terísticas de la muestra a transportar. Amies, Cary y Blair de Metileno que actúa como indicador de la oxidación del
establecieron la formulación del medio que lleva su nombre. medio, cuando la mitad del medio contenido en un tubo
presenta color azulado, el medio no está en las condiciones
adecuadas de transporte. Para restablecer la anaerobiosis
debe licuarse, de nuevo el medio.
El medio de transporte Stuart se puede suplementar con
Acido rosólico a razón de 10 ml de Acido rosólico al 10%
por litro de medio.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: (413734) 7,3 ± 0,2
(413778) 8,4 ± 0,2
(413813) 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Desarrollo
Desarrollo Desarrollo en 413813
Microorganismos
en 413734 en 413778 (Después de añadir 10 ml/l
de ácido rosólico al 1%)
Bibliografía
Glasgow Med. J., 27: 131-142 (1946)
Publ. Helth. Rep., 74: 431-438 (1959)
Medio de cultivo para la detección y recuento de Clostridium perfringens y otros anaerobios en agua,
alimentos y otros materiales.
Sinónimos Preparación
Agar Triptosa-Sulfito-Cicloserina, FDA M169. Suspender 42 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
Historia 118ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45-50ºC.
Por su formulación este medio corresponde a las reco- Añadir asépticamente 0,4 g de cicloserina en solución
mendaciones de la International Organization for acuosa esterilizada por filtración, por litro de medio.
Standardization (ISO), para análisis de agua y a la FDA
para análisis de alimentos, entre otras normas. Este Modo de empleo
medio deshidratado es una base que se transfoma en En los análisis de alimentos, habitualmente, se siembra la
TSC cuando se suplementa con cicloserina o en SFP muestra por la técnica de doble capa o por inclusión en
cuando se le adiciona Polimixina y Canamicina. gelosa y se incuba a 35ºC durante 20-24 horas.
En el análisis de muestras de agua propuesto en la ISO 6461-
Fundamento 2, se filtra la muestra a través de un filtro de membrana y se
El agar TSC es considerado superior a otros medios de coloca, sobre la superficie del medio boca arriba o boca
cultivo selectivos para el cultivo de Clostridium perfringens abajo sobre una placa de Petri. En el segundo caso, poste-
y otros microorganismos del género, que hayan sido riormente, se vierten 18 ml de medio de cultivo licuado,
dañados por diferentes factores ambientales. Es un el cual se ha dejado enfriar hasta unos 50ºC. El cultivo
medio con elevado valor nutritivo, el sulfito y el hierro se incuba en condiciones anaeróbicas a 37ºC durante
hacen que los microrganismos sulfito-reductores presen- 20-24 horas y 4 horas a 44 º C.
ten las colonias negras por el precipitado de Hierro
Sulfuro. La cicloserina es un inhibidor de la flora acom-
pañante, que da al medio una selectividad superior que el Reactivos auxiliares
que aportan otros antibióticos.
Ref. Descripción Envase
Fórmula (por litro) 375503 D-Cicloserina PB 1 g; 5 g; 25 g
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: satisfactorio. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón en un medio suplementado con cicloserina, des-
pués de incubación a temperatura de 37ºC en anaerobiosis y observados a las 24-48 horas.
Bibliografía
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media (1993)
ISO 6461-2 (1986)
EN26461-2 (1995)
FDA Bacteriological Analytical Manual 8th ed. AOAC (1995)
Historia Preparación
Este medio a base de Triptona, Sulfito y Neomicina fue ide- Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
ado por Mossel y desarrollado por Marschall y sus colabo- hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar.
radores con el fin de conseguir un aislamiento altamente Distribuir y esterilizar a 118ºC durante 10 minutos.
selectivo de Clostridium perfringens. Se puede añadir un 4% de Sodio Tioglicolato preparado en
una Solución Tamponada y esterilizada por filtración. La adi-
Fundamento ción de Tioglicolato mejora las condiciones de anaerobiosis.
El Clostridium perfringens presenta una buena tolerancia a
la Neomicina y a la Polimixina, que inhiben el crecimiento de Modo de empleo
la flora secundaria; la Neomicina inhibe particularmente el Se recomienda incubar en jarra de anaerobiosis a 46ºC
Clostridium bifermentans. El crecimiento óptimo de C. per- durante 18-24 horas.
fringens a 46ºC, aumenta aún más el carácter selectivo, ya La siembra suele ser en incorporación en gelosa. Si se hace
no por el medio en sí sino por las condiciones de incuba- en superficie añadir el Sodio Tioglicolato en las condiciones
ción. Como también es capaz de producir Hidrógeno anteriormente mencionadas. A pesar de ser un medio muy
Sulfuro tiene lugar la precipitación del Hierro(II) Sulfuro negro selectivo, deben realizarse pruebas complementarias para
alrededor de las colonias. la identificación.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación en anaerobiosis a
temperatura de 37ºC y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Appl. Microbiol., 10: 662-669 (1959)
Se emplea para la diferenciación de bacilos entéricos. Está indicado para detectar aquellas bacterias capa-
ces de producir ureasa.
Historia Preparación
Christensen fue quien orientó los primeros trabajos en Disolver 29 g en 100 ml de agua destilada. Esterilizar por fil-
busca de un medio que permitiera la detección de bacterias tración. Disolver 15 g de Agar Bacteriológico en 900 ml de
capaces de descomponer la Urea. En esencia los trabajos agua destilada. Esterilizar la solución del agar a 121ºC
consistieron en ajustar correctamente las proporciones de durante 15 minutos, dejar enfriar hasta 50ºC y añadir los
elementos nutricionales y de tampón, de tal manera que el 100 ml de medio urea, estéril. Mezclar bien y distribuir asép-
medio permitiese el crecimiento de un gran número de bac- ticamente en tubos de ensayo estériles. Dejar endurecer el
terias y se observase la degradación de la Urea por parte no medio en posición inclinada pero con fondos de unos 2 cm
sólo de los fuertes productores de ureasa, sino también, de de profundidad. A pH 6,8-7,0 el medio debe tener un color
los más débiles (Enterobacter, Klebsiella, Micrococo). amarillo rosado débil. No refundir el medio.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: naranja-rojo. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 52: 461-466 (1946)
Meat and Meat Products-Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa claro. pH: 6,8 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
J. Bact., 49: 437-444 (1945)
J. Lab. Clin. Med., 28, 1715 - 1720 (1943)
Historia Preparación
Este medio permite realizar 3 pruebas bioquímicas al mismo Disolver 30 g en 1 l de agua destilada. Añadir 10 ml de
tiempo y que son de interés en la identificación de especies Etanol 96% y esterilizar por filtración. Repartir según nece-
del genero Enterobacteriáceas. sidades, habitualmente es en fracciones de 1 ml en
pequeños tubos.
Fundamento
El microorganismo con actividad Ureasa alcaliniza el medio; Modo de empleo
este cambio de pH se aprecia por el viraje del indicador Inocular el medio a partir de una suspensión de microorga-
Rojo de Fenol que pasa a rojo-violeta. Esta reacción, a nismo en cultivo puro. Incubar a 37 ºC durante 18-24 horas.
veces, es visible a las 3-4 horas de incubación. Los fosfa- Pasado este tiempo proceder a la lectura de los resultados:
tos se ocupan de mantener el pH del medio y la presencia 1. Si el medio ha adquirido un color rojo es que el micro-
de Triptófano permite detectar la actividad Triptófano- organismo presenta actividad Ureasa.
Desaminasa y/o la producción de Indol. La actividad 2. Añadir unas gotas de reactivo de Kovacs, si aparece un
Triptófano-Desaminasa (TDA) se revela por la aparición de anillo rojo el microorganismo ha producido Indol a partir
un color marrón o marrón rojizo al añadir al cultivo una solu- del Triptófano.
ción de Hierro Cloruro; mientras que la producción de Indol 3. Añadir unas gotas de Hierro cloruro solución 30% dilui-
se manifiesta por la aparición de un anillo rojo al añadir unas da a 1/3. Si aparece un color marrón o marrón rojizo es
gotas de Reactivo de Kovacs. que el microorganismo tiene actividad TDA.
E. coli no tiene actividad Ureasa ni TDA y es Indol positiva.
Fórmula (por litro)
Proteus vulgaris es positivo a las 3 pruebas.
Urea........................................................ 20,0 g
Potasio di-Hidrógeno Fosfato ................. 1,0 g
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ................. 1,0 g Reactivos auxiliares
Rojo fenol ............................................... 0,025 g
Sodio Cloruro ......................................... 5,0 g Ref. Descripción Envase
L-Triptófano ............................................ 3,0 g 252908 Reactivo de Kovacs DC 100 ml
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 6,7 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella, salvo la Salmonella typhi, en
heces, carnes y productos alimenticios.
Historia Preparación
Las primeras formulaciones del medio se deben a Suspender 58 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Kristensen y colaboradores, que lo encontraron muy indica- tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
do para diferenciar ciertas Salmonellas de otros microorga- esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar
nismos intestinales Gram-negativos. Posteriormente hasta 45-50ºC, verter en placas de Petri estériles y dejar
Kauffmann modificó la fórmula inicial que mejoró notable- gelificar durante 2 horas con las cubiertas parcialmente
mente los resultados. La fórmula actual corresponde a las abiertas, si fuera necesario. Las placas son de color ana-
recomendaciones de la USP. ranjado-rojizo.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: rosado. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Appl. Mic., 16: 746
USP 25 (2002)
Historia Preparación
Este medio se basa en la formulación original de Zebovitz, Suspender 60 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
que posteriormente fue modificada por Vogel y Johnson. hasta ebullición y disolución total. Esterilizar a 121ºC duran-
Su formulación actual corresponde a las recomendaciones te 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45-50ºC y añadir 20 ml
de la USP. de Potasio Telurito al 1% ó 5,7 ml de Potasio Telurito al
3,5% estéril, por litro de medio. Mezclar bien y distribuir.
Fundamento Para un medio menos selectivo añadir sólo 10 ml de
La presencia del Litio Cloruro, de la Glicina y del Potasio Potasio Telurito al 1%.
Telurito dan a este medio una fuerte acción selectiva donde
la flora secundaria es inhibida casi por completo. Los Modo de empleo
Estafilococos reducen el telurito a teluro metal lo que da Sembrar grandes inóculos en la superficie del medio.
colonias negras sobre un fondo rojo si no son fermentado- Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas. Los Estafilococos pató-
res del manitol. Los Estafilococos fermentadores del mani- genos crecen casi siempre durante las primeras 24 horas.
tol, (presuntivamente patógenos), dan colonias negras Las colonias de Staphylococcus aureus serán negras con
rodeadas de un halo amarillo. El cambio de color del medio halo amarillo. Una vez añadido el Potasio Telurito el medio
es debido al viraje del indicador de pH producido por la no debe volver a fundirse, y su conservación no será más
acumulación de productos ácidos, obtenidos en la fermen- de 1 semana a 4°C.
tación del manitol. La selectividad del medio se mantiene
durante las primeras 24 horas, pasado este tiempo pueden
crecer otros microorganismos. Reactivos auxiliares
Fórmula (por litro) Ref. Descripción Envase
Extracto de Levadura ............................. 5,0 g 414724 Potasio Telurito sol. 3,5% CULTIMED 50 ml; 100 ml
Glicina .................................................... 10,0 g
Litio Cloruro ............................................ 5,0 g
D(-)-Manita.............................................. 10,0 g
di-Potasio Hidrógeno Fosfato ................. 5,0 g
Rojo de Fenol ......................................... 0,025 g
Triptona .................................................. 10,0 g
Agar........................................................ 15,0 g
pH final: 7,2 ± 0,2
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: con precipitado.
Color: verde claro. pH: 7,2 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
USP 25 (2002)
J. Bact., 70: 686-690 (1955)
Medio para el cultivo y para las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de las bacterias anaerobias.
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación en anaerobiosis a
temperatura de 37ºC y observados a las 24-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Peptostreptococcus ATCC27337 Bueno
Bacteroides melcuinogenicus ATCC15930 Bueno
Bibliografía
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 987 (1993)
Wilkins, T.D. & Chalgren, S. Antimicrob. Agents Chemother. 14: 384-399 (1978)
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 30ºC
y observados a las 48 horas.
Desarrollo en Desarrollo en
Microorganismos
WL, Agar Nutriente WL, Agar Diferencial
Escherichia coli ATCC 25922 Moderado Bueno
Lactobacillus fermentun ATCC 9338 Moderado Bueno
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Bueno Inhibido
Saccharomyces uvarum ATCC 9080 Bueno Inhibido
Proteus mirabilis ATCC 25933 Moderado Bueno
Bibliografía
Wallerstein Lab. Comm., 13: 357 (1950)
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 7,4 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC
y observados a las 24 horas.
Bibliografía
Am. J. Clin. Path., 44: 471-475 (1965)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
FDA. Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC (1995)
ANEXO III
Los siguientes principos, relativos a los métodos que utilicen parámetros microbiológicos, se dan ya sea como
referencia, en los casos en que se da un método CEN/ISO, o como guía, en espera de la posible adopción futu-
ra, conforme al procedimiento establecido en el artículo 12, de nuevos métodos internacionales CEN/ISO para
dichos parámetros. Los Estados miembros podrán emplear métodos alternativos, siempre que se cumpla lo dis-
puesto en el apartado 5 del artículo 7.
Filtrado sobre membrana e incubación anaerobia de la membrana en agar m-CP (nota 1) a 44 ±1°C durante 21 ±3 horas.
Recuento de las colonias de color amarillo opaco que cambien a color rosa o rojo al cabo de 20 a 30 segundos de expo-
sición a vapores de hidróxido amónico.
D-cicloserina.............................. 400 mg
B-sulfato de polimixina .............. 25 mg
ß-D-glucosuro de indoxyl........... 60 mg
Deberá disolverse en 8 ml de agua
destilada estéril antes de añadirse
Solución de difosfato
de fenolftaleína al 0,5%
esterilizada por filtración ............ 20 ml
FeCl3·6H2O al 4,5%
esterilizada por filtración ............ 2 ml
Bibliografía
DOCE L330/32 Directiva 98/83/ce del Consejo de 3 de noviembre de 1998 (5-12-98)
B.O.E. nº 193 (13-08-1983)
B.O.E. nº 226 (20-09-1990)
B.O.E. nº 114 (13-05-1987)
B.O.E. nº 178 (26-07-1991)
ISO 7704 (1988)
Cetrimida, Agar
Cetrimide Agar
Cód.: 423752 Envase: 20 placas ø55 mm + filtro Conservación: 7 meses
Cód.: 443752 Envase: 20 placas ø55 mm Conservación: 7 meses
m-CP, Agar
m-CP Agar
Cód.: 425463 Envase: 10 placas ø55 mm + filtro Conservación: 45 días
Nutritivo, Agar
Nutrient Agar
Cód.: 423792 Envase: 20 placas ø55 mm + filtro Conservación: 7 meses
Cód.: 443792 Envase: 20 placas ø55 mm Conservación: 7 meses
SPS Agar
SPS Agar
Cód.: 424125 Envase: 20 placas ø55 mm + filtro Conservación: 7 meses
Cód.: 444125 Envase: 20 placas ø55 mm Conservación: 7 meses
La Directiva de Higiene de los alimentos 93/43/CEE, establece que las empresas del sector alimentario deben poner
en marcha un Sistema de Autocontrol de sus producciones, basado en el método de Análisis de Riesgos y Control
de Puntos Críticos (ARICPC), extendiendo esta obligación no solo a toda la industria de elaboración o transforma-
ción de la Unión Europea, sino también a las empresas de distribución, restauración, etc. (DOCE, 1993)
La finalidad del sistema ARICPC es lograr que el control y el esfuerzo se centre en los puntos críticos de control
(PCC), de tal manera que si llegara el caso en el que se identifique un riesgo, y evaluada la posibilidad de su apari-
ción y no se lograra controlar ningún PCC, deberá considerarse la posibilidad de modificar el proceso.
Dentro de un sistema de autocontrol de la industria alimentaria, los aspectos relacionados con la limpieza y desinfec-
ción ocupan un lugar importante. La normativa comunitaria obliga a las empresas a verificar la eficacia de los procedi-
mientos de limpieza y desinfección mediante controles regulares de la higiene general de las condiciones de produc-
ción, incluso mediante controles microbiológicos. Dichos controles se referirán a los utensilios, instalaciones y maqui-
naria en todas las fases de la producción y, si fuese necesario, a los productos.
Los procedimientos de verificación según la ICMSF (International Commission for Microbiological Specification for
Foods) y las indicaciones de los inspectores veterinarios de la Comisión Europea son:
1. Inspección visual de la limpieza aparente.
2. Controles microbiológicos mediante análisis de las muestras procedentes de las instalaciones y utensilios y del
medio ambiente. Al no estar establecidas la periodicidad de los controles ni de los recuentos microbiológicos
permitidos, se recomienda que cada empresa fije su "estándar de higiene" como conclusión a los muestreos y
análisis repetidos y vaya aumentando su nivel progresivamente.
3. Controles microbiológicos en o sobre los productos una vez realizadas todas las operaciones de manipulación,
ya que el contenido microbiano del alimento es consecuencia parcial de la contaminación procedente de las
superficies que contactan con el mismo.
4. Muestreo del diagrama de flujo. Se trata de determinar los niveles microbianos en o sobre las muestras de los
alimentos obtenidos en cada una de las fases de transformación.
El método más utilizado para verificar el grado de limpieza y desinfección de las instalaciones es la toma de mues-
tras con placas de contacto sobre las superficies higienizadas. Es adecuado en las superficies planas tales como
maquinaria, mesas, suelos, paredes, etc.
La diversidad de medios de cultivo y los aditivos que en algunos de ellos se han incluido, permiten seleccionar y
mejorar el control que se va a realizar. La presencia de Cloranfenicol en algunos medios de Hongos y levaduras,
permite el recuento de estos microorganismos sin interferencias bacterianas. El Tween y la Lecitina son agentes
neutralizantes de algunos antimicrobianos y su función es inhibir los restos de desinfectantes que puedan haber
quedado sobre las superficies y que podrían interferir en el crecimiento microbiano durante el periodo de incu-
bación de las placas y darnos falsos negativos.
Bibliografía
Ecología microbiana de los alimentos. ICMSF (International Commission for Microbiological Specification for Foods). Ed. Acriba.
Zaragoza. 141- 149 (1983).
Teixidó, A. Importancia de la higiene en el Sector cárnico. Eurocarne. (agosto-septiembre).17-20 (1992)
Ingeniería, Autocontrol y Auditoría de la Higiene en la Industria Alimentaria. Puig-Durán, J. Ed. Mundi-Prensa. (1999)
Técnicas para el análisis microbiológico de alimentos y bebidas. CENAN. (1982)
Baird-Parker, Agar
Baird-Parker Agar
Cód.: 433744 Envase: 20 placas de contacto Conservación: 7 meses
Cetrimida, Agar
Cetrimide Agar
Cód.: 433752 Envase: 20 placas de contacto Conservación: 7 meses
PCA, Agar
Plate Count Agar (PCA)
Cód.: 433799 Envase: 20 placas de contacto Conservación: 7 meses
TSA-Tween-Lecitina-Agar
TSA-Tween-Lecithin-Agar
Cód.: 435095 Envase: 20 placas de contacto Conservación: 7 meses
Agua de Peptona
Agua de Peptona con agentes neutralizantes, (Ph. Eur.)
Agua de Peptona Tamponada
Baird-Parker, Agar
Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Glucosa (VRBG), Agar
Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Lactosa (VRBL), Agar
Bilis-Verde Brillante 2%, Caldo
Bilis-Verde Brillante 2%, Caldo (2X)
Canamicina Esculina Azida (CeNAN), Agar
Canamicina Esculina Azida, Caldo
Cetrimida, Agar
EC, Medio
EE, Caldo
EMB Levine, Agar
Giolitti-Cantoni, Caldo
Glucosa Cloranfenicol, Caldo
Glucosa Sabouraud, Agar
Glucosa Sabouraud+Cloranfenicol, Agar
Hektoen, Agar Entérico
Hierro de Kligler, Agar
Hierro y Lisina, Agar
Hierro y Triple Azúcar, Agar
Lactosado, Caldo
Lauril Triptosa, Caldo
Lauril Triptosa, Caldo (2X)
Legionella, Agar
Letheen, Agar
Letheen, Caldo
MacConkey, Agar
MacConkey, Caldo
m-CP, Agar
MRS, Agar
Nutritivo, Agar
PALCAM, Agar
PALCAM, Caldo
PCA, Agar
Rappaport-Vassiliadis (RVS), Caldo
Rosa de Bengala y Cloranfenicol, Agar
Sal y Manitol, Agar
Salmonella y Shigella, Agar
Selenito y Cistina, Caldo
Slanetz y Bartley, Medio
Soja Triptona (TSA), Agar
Soja Triptona (TSB), Caldo
SPS, Agar
Tergitol 7, Agar (Chapman TTC modificado)
Tioglicolato USP, Medio Líquido
TSA-Tween-Lecitina, Agar
TSN, Agar
XLD, Medio
Agua de Peptona
Peptone Water
Cód.: 463794.0922 Envase: 20 tubos x 9 ml Conservación: 12 meses
Cód.: 493794.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml
Cód.: 493794.0978 Envase: 6 frascos x 475 ml
Cód.: 493794.0979 Envase: 10 frascos x 225 ml
Baird-Parker, Agar
Baird-Parker Agar
Cód.: 453744.0922 Envase: 20 placas ø90 mm Conservación: 3 meses
Cód.: 493744.0922 Envase: 10 frascos x 90 ml Conservación: 12 meses
Cetrimida, Agar
Cetrimide, Agar
Cód.: 453752.0922 Envase: 20 placas ø90 mm Conservación: 3 meses
Cód.: 493752.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
EE, Caldo
EE Broth
Cód.: 463829.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservación: 12 meses
Cód.: 493829.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
Giolitti-Cantoni, Caldo
Giolitti-Cantoni Broth
Cód.: 463765.0922 Envase: 15 tubos x 19 ml Conservación: 6 meses
Letheen, Agar
Letheen Agar
Cód.: 495379.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
Cód.: 495379.0980 Envase: 6 frascos x 450 ml Conservación: 12 meses
Letheen, Caldo
Letheen Broth
Cód.: 465382.0922 Envase: 20 tubos x 9 ml Conservación: 12 meses
Cód.: 495382.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
MacConkey, Caldo
MacConkey Broth
Cód.: 493780.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
MRS, Agar
MRS Agar
Cód.: 493784.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
Cód.: 493784.0978 Envase: 6 frascos x 475 ml Conservación: 12 meses
Nutritivo, Agar
Nutrient Agar
Cód.: 453792.0922 Envase: 20 placas ø90 mm Conservación: 4 meses
Cód.: 493792.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
PALCAM, Agar
PALCAM Agar
Cód.: 455380.0922 Envase: 20 placas ø90 mm Conservación: 4 meses
PALCAM, Caldo
PALCAM Broth
Cód.: 465383.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservación: 6 meses
SPS, Agar
SPS Agar
Cód.: 454125.0922 Envase: 20 placas ø90 mm Conservación: 3 meses
Cód.: 464125.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservación: 12 meses
Cód.: 494125.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservación: 12 meses
TSN, Agar
TSN Agar
Cód.: 463833.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservación: 12 meses
XLD, Medio
XLD Medium
Cód.: 453826.0922 Envase: 20 placas ø90 mm Conservación: 3 meses
Medio para el cultivo y el aislamiento de las especies de Legionella en muestras clínicas y otras.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: satisfactorio.
Color: negro con matices azules. pH: 6,9 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón después de incubación a 37ºC y observados
entre los 3 y 7 días.
Microorganismos Desarrollo
Legionella pneumophila ATCC33216 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno-moderado
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno-moderado
Candida albicans ATCC10231 Inhibido
Bibliografía
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 122 (1993)
New England, J. Med; 326: 151 (1992)
New England, J. Med; 302: 365 (1992)
ISO 11731:1998
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: satisfactorio. Volumen (465382): 9 ml
Color: turbio y marronáceo. Volumen (495382): 100 ml
pH: 7,0 ± 0,2 Volumen (495379): 100 ml
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón después de incubación a 37ºC y observados a
las 24- 48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Bueno
Bibliografía
FDA. Bacteriological Analytical Manual. Chapter 23: Microbiological Methods for Cosmetics. 8th Ed. AOAC. (1995)
Atlas R.M. & L.C Parks. Handbook of Microbiological Media. (1993)
Medio de cultivo para el recuento de C. perfringens (incluidas las esporas), en agua destinada al consumo
humano y aguas superficiales.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: satisfactorio.
Color: violeta. pH: 7,6 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación en anaerobiosis a 37ºC
durante 24 horas.
Bibliografía
DOCE. Directiva 98/83/CE del consejo, L330: 32-54 (1998)
EPA. ICR Microbial Laboratory Manual. Section XI: 1-15 (1996)
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón después de incubación a 37ºC y observados a
las 48-72 horas
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Listeria monocytogenes ATCC 19118 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Control físico-químico
Aspecto: satisfactorio.
Color: rojo. pH: 7,0 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón después de incubación a 37ºC y observados a
las 48 horas.
Bibliografía
Int. J. Food Microbiol., 8, 299-316 (1989)
Atlas R.M. & Parks L.C, Handbook of Microbiological Media , 688 (1993)
FDA Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC (1995)
VAN NETTEN, P., Liquid and solid selective differential media for the detection and enumeration of L. Int. J. Food Microbiol., 8(4); 299-
316 (1989)
LUND, A.M.: Comparison of Methods for Isolation of Listeria from Raw Milk - J. Food Protect., 54(8); 602-606 (1991)
Medio recomendado para la detección y recuento de una amplia gama de microorganismos. La presencia
de Lecitina y Tween permite neutralizar la actividad antibacteriana, facilitando la investigación de los gérme-
nes en productos o superficies que contengan: Aldehídos, derivados fenólicos, o amonio cuaternario.
Control de calidad
Control físico-químico
Aspecto: satisfactorio.
Color: beige. pH: 7,3 ± 0,2
Control microbiológico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patron después de incubación a 37ºC y observados
a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Bibliografía
USP 24 (2000)
Ph. Eur. III (2000)
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA (1978)
III
Agar-Agar
Agar-Agar
Agente solidificante en medios de cultivo bacteriológicos y en otras aplicaciones (cultivo de tejido, difusión
inmunológica, estudios nutricionales, etc.).
El Agar es un poligalactósido que se obtiene a partir de algas rojas marinas. La mayoría de microorganismos
son incapaces de degradarlo.
Las concentraciones más habitualmente utilizadas en los medios de cultivo bacteriológicos es de 13-20 g/l
para medios sólidos y 5-7 g/l para medios semi-sólidos. En las distintas aplicaciones, se precisan distintos
grados de pureza. El tratamiento de un Agar y los métodos utilizados en su purificación dan, básicamente,
4 tipos de Agar:
Agar Técnico
Agar, Technical
Cód.: 401792 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Este Agar es similar al Agar Bacteriológico Tipo Europeo pero con una menor
fuerza de gel. A una concentración del 1,5% la fuerza de gel del tipo A es de
600-850 g/cm2, mientras que el tipo E es de 800-1100 g/cm2. Con este Agar
se debe trabajar a mayores concentraciones.
Agar Purificado
Agar, Purified
Cód.: 403904 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Intervalo de fusión del gel al 1,5% .......... 84,5-87,5°C Pérdida por desecación a 105°C.................... 10 %
Fuerza del gel al 1,5% (Método Nikan) ...800-850 g/cm2 Residuo de calcinación (en SO4) ..................... 5 %
pH en gel al 1,5%................................... 5,5-7,0
Conservar en lugar fresco y seco
Los extractos son infusiones de carnes, de plantas o de levaduras que producen preparados acuosos
comúnmente utilizados como base nutritiva en los medios de cultivo para el crecimiento de diversos orga-
nismos. Estos productos contienen aminoácidos, péptidos de bajo peso molecular, carbohidratos, vitaminas
y minerales. El extracto es obtenido al hervir una cantidad de tejido (organismo) y utilizar el líquido o más
habitualmente el sólido obtenido al desecar la infusión.
Lista de los extractos más comúnmente utilizados como ingredientes en diversos medios de cultivo:
Bilis de Buey
Ox Bile
Cód.: 403685 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Extracto de Carne
Meat Extract
Cód.: 403692 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Extracto de Malta
Malt Extract
Cód.: 403690 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Fécula de Patata
Potato Starch
Cód.: 404148 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Sales Biliares nº 3
Bile Salts nº 3
Cód.: 403896 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Las peptonas y las triptonas son los productos que se obtienen por la degradación proteolítica de proteínas
de diversos orígenes (carne, soja, malta, caseína, ...), obtenidas por digestión péptica, tríptica, pancreática,
etc. El producto obtenido es rico en aminoácidos libres y péptidos de pequeño peso molecular. Es utilizado
como fuente de Nitrógeno por una gran diversidad de organismos. Los diferentes orígenes, dan peptonas
con diferentes aportes nutricionales. Las más utilizadas son la Peptona de Caseína y la Bacteriológica, sin
embargo, a veces es necesario la mezcla de peptonas de diferentes orígenes para el cultivo de determina-
dos microorganismos.
Peptona Bacteriológica
Bacteriological Peptone
Cód.: 403695 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Peptona de Carne
Meat Peptone
Cód.: 403683 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Peptona de Gelatina
Gelatine Peptone
Cód.: 403686 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Peptona de Soja
Soy Peptone
Cód.: 403684 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Proteosa Peptona
Proteose Peptone
Cód.: 403901 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Proteosa Peptona nº 3
Proteose Peptone nº 3
Cód.: 403939 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Triptosa
Tryptose
Cód.: 403903 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
IV
Lista de Aditivos, Reactivos y Productos Auxiliares
Hemoglobina
Hemoglobine
Cód.: 402876 Envase: 500 g
Preparación autoclavable de sangre de vacuno utilizable como aditivo en medios de cultivo para aislar micro-
organismos exigentes. Se suele preparar en solución al 2 %. Se presenta en forma de polvo desecado y se
utiliza como material de enriquecimiento en ciertos medios de cultivo, para aislar gérmenes exigentes.
Tween 80
Tween 80
Cód.: 142050 Envase: 1000 ml
Aditivo para medios de cultivo, actuando como nutriente en algunos casos o como emulsionante. Es uno de
los aditivos que aconseja la Farmacopea para la preparación de muestras poco solubles. También es un adi-
tivo en la preparación de muestras de origen cosmético.
Aplicaciones en Inmunología y bioquímica.
Se utiliza como reactivo para la prueba de la Catalasa. La catalasa es una enzima propia de la mayoría de
las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que poseen citocromos, con la excepción de Estreptococos.
Su función es descomponer el Peróxido de Hidrógeno (H2O2) desprendiendo oxígeno libre. La catalasa tam-
bién se determina en organismos anaerobios.
Reactivo de Griess-Ilosvay A
Griess-Ilosvay’s A Reagent
Cód.: 171569 Envase: 100 ml
Reactivo de Griess-Ilosvay B
Griess-Ilosvay’s B Reagent
Cód.: 171570 Envase: 100 ml
Modo de empleo
Sembrar el microorganismo procedente de un cultivo puro
en un Medio Manitol Movilidad (CULTIMED 413782) o en un
caldo nutritivo al que se le habrá añadido 0,2 g/litro de
Potasio Nitrato. Incubar el cultivo a la temperatura óptima
durante 2-4 días. Pasado el tiempo de incubación, añadir
0,5 ml de solución A y solución B mezcladas en iguales
proporciones. Interpretar los resultados como se ha descri-
to anteriormente.
Alcohol amílico, Isoamílico, o Butílico; y el reactivo de 413810 SIM, Medio CULTIMED * 500 g; 5 kg
Ehrlich-Böhme donde el alcohol presente en la solución es * Producto Opcional
etanol.
Modo de empleo
Al añadir 0,5 ml de reactivo de Kovacs a un cultivo líquido
de un microorganismo productor de Indol, aparece en
menos de 1 minuto un anillo rojo, indicando que la reacción
es positiva. Si no hay cambio de color es que no existe Indol
en el medio.
Bibliografía
Eine vereinfachte Methode zun Nachweis der Indolbildung durch Backterien; N. Kovacs,A. Immunforsch, 55, 311 (1928)
Las Enterobacteriáceas son capaces de fermentar la glucosa utilizando diferentes vías. Escherichia y
Salmonella fermentan la glucosa por la vía ácido-mixta.
Modo de empleo
Añadir 0,1-0,2 ml aproximadamente del reactivo a 5 ml de
cultivo incubado 48 horas en el medio MR-VP u otros
medios equivalentes. Homogeneizar el cultivo y observar la
aparición de coloración roja. Si los resultados son dudosos,
debe repetirse el ensayo incubando 5 días a 30ºC.
Bibliografía
CLARK, W.M. y LUBBS, H.A. "The Differentiation of Bacteria of the Colon-Aerogenes Family by the use of indicators.
J. Infect. Dis., 17: 161-173 (1915)
Bibliografía
BARRITT, M. M., "The intensification of the Voges-Proskauer reaction by the addition of a-naftol" J. Pathl. Bact., 42: 441-453 (1936)
O'MEARA, R. A., "A simple delicated and rapid method of detecting the formation of actylmethyl-carbinol by bacteria fermenting
carbohydrate". J. Pathol. Bact., 34: 401-406 (1931)
Bibliografía
Acta Pathol. Microbiol. Scan. Sect. B84: 245 (1976)
Microbiol. Rev. 55: 335 (1991)
2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro
Aditivo en distintos medios de cultivo para determinar la actividad biológica. Forma parte de algunos de los
medios aconsejados por la legislación de aguas para la detección de organismos procedentes de contami-
nación fecal.
Bibliografía
Clark G., "Staining Procedures", 4th Ed., Williams and Wilkins, Baltimore 362 (1981)
E. Suárez Peregrin, "Manual Técnico de Análisis Clínicos", 9ª Ed., Prieto, 344 (1972)
S. Frankel, S. Reitman, A. C. Sonnenwirth, "Gradwohl's clinical laboratory methods and diagnosis", 7th Ed.,
The C. V. Mosby Company 2, 1804 (1970)
Tinción Simple
Las coloraciones simples son aquellas que utilizan un solo colorante y tienen por misión poner en evidencia
la morfología bacteriana. Adecuada para la observación y /o recopilación microbiológica general.
El procedimiento que se describe es aplicable a dos colorantes distintos y son los utilizados más habitual-
mente.
Es la coloración diferencial mas utilizada en microbiología. Constituye uno de los primeros niveles de iden-
tificación sistemática diferenciando dos grandes grupos de bacterias según la afinidad que presentan al
colorante. Los microorganismos teñidos con el primer colorante son los denominados Gram positivos y
se observan de color azul-violáceo. Los microorganismos teñidos con el colorante de contraste son los
Gram-negativos y se observan de color rojo-rosa. Los mejores resultados se obtienen con cultivos jóve-
nes ya que las células viejas pierden afinidad por los colorantes. La ruptura física de la pared bacteriana
también altera la coloración.
Bibliografía
Bartholomew, J.W. Variables Influencing Results and the Precise Definition of steps in Gram staining as a Means of Standardizing the
Results Obtained. Stain Technol., 37: 139-155 (1962)
Decolorante:
Alcohol de 90% 1000 ml
Acido Clorhídrico 37% 5 ml
Sodio Cloruro 5g
Bibliografía
Manual de Técnicas en Microbiología Clínica. Alvarez, M. V., Boquet, E., de Fez, Y. Editado por la Asociación Española
de Farmacéuticos Analistas. (1990)
Bibliografía
Manual de Técnicas en Microbiología Clínica. Alvarez, M. V., Boquet, E., de Fez, Y. Editado por la Asociación Española de
Farmacéuticos Analistas. (1990)
Descripción D. INTERPRETACIÓN:
Los ProSpores sirven para controlar los ciclos de esteriliza- Control: La ampolla de control debe presentar turbidez
ción por vapor saturado a 121ºC. Cada ampolla de y/o cambio de color hacia amarillo. El test no es válido, si
ProSpore contiene una suspensión de esporas de Bacillus la ampolla de control no presenta cambios.
stearothermophilus (ATCC nº 7953) en un medio de cultivo Test: El proceso de esterilización no será correcto si la
que contiene púrpura de bromocresol, el cual juega el papel ampolla test presenta turbidez o cambio de color (amari-
de indicador de pH. El crecimiento bacteriano produce llento).
ácido que hace virar el indicador púrpura de bromocresol a Una ampolla test que conserve su color púrpura indicaría
amarillo. un ciclo de esterilización correcto.
(1) Estas ecuaciones provienen del documento USP 24, página 232.
(2) después del primer tratamiento de calor.
(3) determinado en la fabricación usando procedimientos
clasificados de Fracción Negativa.
rentable
sin necesidad de accesorios o aparatos adicionales
económico
bajo coste por ensayo
Indol-positivo
Escherichia coli
Aminopeptidasa-positivo Aminopeptidasa-negativo
GRAM-negativo GRAM-positivo
Escherichia coli Enterococcus faecalis Oxidasa-negativo
Enterobacter aerogenes
Oxidasa-positivo
Pseudomonas aeruginosa
Procedimiento:
Descripción Nº de Código
tests
Control rápido de higiene para grifos de cerveza 20 950 001
Contenido del kit: 20 tubos con medio de control, 40 tubos con medio de detección,
20 tubos estériles para toma de muestra, 21 pipetas Pasteur estériles, 1 tabla de
evaluación para ARICPC
Equipo para toma de muestras para el control de superficies de grifos de cerveza 20 950 002
Contenido del kit: 20 tubos con medio de control, 20 tubos con medio de prueba,
20 tubos con solución de lavado, 21 bastoncillos de algodón estériles, 21 pipetas
Pasteur estériles, 1 tabla de evaluación para ARICPC
Accesorios especiales
Mini-incubador "CULTURA" incluyendo 1 termómetro y 1 gradilla para 3 x 6 tubos de 951 001
ensayo; la incubadora tiene capacidad para 3 gradillas
Gradilla para tubos de ensayo para el mini-incubador "CULTURA" con 3 x 6 posiciones 951 002
tamaño 18 x 18 mm
Contenido Observaciones
50 varillas reactivas Tomar siempre sólo el número necesario de varillas reacti-
2 tubos de ensayo pequeños vas. Después de la extracción cierre inmediatamente el
envase. No toque con los dedos la zona reactiva.
Utilización Para la realización de la prueba, lo mejor es un medio com-
Comprobación rápida del enzima L-alanina-aminopeptida- pleto libre de sustancias inhibidoras, como por ejemplo el
sa en los microorganismos y estimación del comportamien- agar nutritivo. Para la prueba de la aminopeptidasa
to GRAM de los microorganismos en el diagnóstico micro- deberían utilizarse solamente colonias de bacterias sin una
biológico. coloración propia.
Para el control se recomienda efectuar siempre una prueba
Composición comparativa con un gérmen positivo a la aminopeptidasa
La zona reactiva contiene como sustancias reactivas (por ejemplo, Escherichia coli) y un gérmen negativo a la
L-alanina-4-nitroanilida y sustancias tampón. aminopeptidasa (por ejemplo, Enterococcus faecalis).
Instrucciones de uso Bacterias de control
1. Añadir 0,2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo Aminopeptidasa-positiva: Escherichia coli ATCC 25922
pequeño. Aminopeptidasa-negativa: Enterococcus faecalis DSM 2570
2. Extraer una colonia aislada y bien desarrollada del medio
de cultivo con el asa de inoculación y suspenderla en el Interferencias
tubo de ensayo pequeño hasta conseguir una turbidez Las colonias bacterianas con una intensa coloración pro-
evidente. pia o de sustratos nutrientes, que contienen colorantes,
3. Introducir la tira de ensayo en el tubo de forma que la indicadores o sustancias inhibidoras específicos, pueden
zona reactiva quede sumergida totalmente en la suspen- producir resultados incorrectos.
sión de bacterias.
4. Incubar el tubo a +37ºC entre 10 y 30 minutos. Condiciones de almacenamiento
5. Evaluación: con los microorganismos aminopeptidasa Proteja las tiras reactivas de la luz solar y de la humedad.
positivos (=GRAM negativos) la suspensión de bacterias Mantenga el envase en lugar fresco y seco a +2ºC hasta
se vuelve de color amarillo. Con los microorganismos +8ºC. Controle la fecha de caducidad.
aminopeptidasa negativos (=GRAM positivos) no se pro-
duce coloración en la suspensión. Eliminación
Después de usar, las tiras reactivas deben tratarse
Muestra de identificación como material contaminado y deben eliminarse según la
Según las investigaciones completas realizadas desde buena praxis microbiológica. Esto puede hacerse
hace tiempo existe una buena correlación entre la reac- mediante combustión, autoclave o la colocación en una
ción de la aminopeptidasa y el comportamiento GRAM de solución desinfectante como mínimo durante 6 horas.
los microorganismos. Según ello, todos los microorganis-
mos GRAM positivos investigados hasta ahora son nega-
tivos a la aminopeptidasa y todos los microorganismos
GRAM negativos son positivos a la aminopeptidasa.
Constituyen excepciones los siguientes microorganismos
gram negativos, que reaccionan de forma negativa a la
aminopeptidasa: Bacteroides fragilis, Bacteroides vulga-
ris, las especies de Campylobacter, Veillonella parvula.
Utilización Interferencias
Para la demostración rápida de la formación de indol en el Si las colonias de las bacterias a examinar crecen en
diagnóstico microbiológico. medios de cultivo sin triptófano o peptonas de digestión
tríptica, se pueden producir falsos negativos. En este
Composición caso los microorganismos a examinar deben ser someti-
La zona de ensayo contiene como reactivo 4-dimetila- dos a un cultivo intermedio en un medio que contenga
minocinamaldehído. triptófano o peptonas de digestión tríptica (por ejemplo,
agar nutritivo estándar o medio triptófano)
Instrucciones de uso
1. Coloque una gota de reactivo Indol-1 sobre la zona reac- Condiciones de almacenamiento
tiva amarilla que, de esta manera, se volverá incolora. Proteja las tiras reactivas de la luz solar y de la humedad.
2. Tome con el asa de inoculación una colonia aislada y Mantenga el envase en lugar fresco y seco a +2ºC hasta
bien desarrollada del medio de cultivo. +8ºC. Controle la fecha de caducidad.
3. Coloque la colonia en la zona reactiva y extiéndala con el
asa de inoculación. Eliminación
4. Después de 1 ó 2 minutos se procede a la evaluación: Después de usar, las tiras reactivas deben tratarse como
en microorganismos indol-positivos se forma un comple- material contaminado y deben eliminarse según la buena
jo cromático azul-verdoso. praxis microbiológica. Esto puede hacerse mediante
combustión, autoclave o la colocación en una solución
Observaciones desinfectante como mínimo durante 6 horas.
Tomar siempre sólo el número necesario de tiras reactivas.
Después de la extracción cierre inmediatamente el envase.
No toque con los dedos la zona reactiva.
Los siguientes cambios en los tubos con medio de detección en cuanto a color, turbidez y/o desarrollo de micelios en
comparación con el tubo que contiene medio de control, pueden ser observados y clasificados como positivos.
Nota: La tabla anterior se refiere a cultivos puros de los microorganismos típicos. En la realidad hay poblaciones mixtas
de diferentes especies y géneros, por lo que pueden obtenerse otras tonalidades.
Si después de un máximo de 28 horas no se ha producido ningún cambio de color, ni turbidez, ni desarrollo de micelios
en el tubo de detección en comparación con el de control, el ensayo puede clasificarse como negativo.
Para simplificar el análisis se recomienda usar la tabla de evaluación, pudiendo ser copiada para su uso personal.
Interpretación de resultados
Conservación
Mantener el equipo de reactivos en la oscuridad y a una temperatura entre +4 y +8ºC.
Eliminación
La biomasa que crece en los tubos de detección, que se han clasificado como positivos, consisten en bacterias
y/o hongos y deben ser manipulados con precaución. Por lo tanto, los medios de detección de pruebas positivas
deben ser eliminados de acuerdo con las buenas prácticas microbiológicas. Si no se dispone de equipamiento
apropiado para los métodos físicos o químicos de eliminación, tratar los tubos de la siguiente manera: Añadir algu-
nas gotas de desinfectante convencional o doméstico (p. ej. Sagrotan®), dejándolo toda la noche y luego vaciar
los tubos en el desagüe.
El medio de control y el contenido de los tubos de muestra y de detección clasificados como negativos, pueden
ser vaciados directamente en el desagüe sin ningún tratamiento.
V
Comparación de denominaciones MERCK - CULTIMED
Ref. Código
MERCK MERCK CULTIMED
CULTIMED
Ref. Código
DIFCO DIFCO CULTIMED
CULTIMED
Ref. Código
OXOID OXOID CULTIMED
CULTIMED
VI
Determinaciones más habituales en la Industria Alimentaria
Esta clasificación se ha hecho de forma orientativa, sin embargo, existen otras posibilidades
que no se han incluido en este esquema ya que el objetivo es que sea ágil y de fácil consulta.
VII
Símbolos de envase
Envase de vidrio
Envase de polietileno
Tubo de vidrio
? ø55 mm Placa preparada de 55 mm de diámetro
? ø90 mm Placa preparada de 90 mm de diámetro
> Placa de contacto
Programa completo
Cultimed
según Aplicación
VII-I
Esta clasificación se ha hecho de forma
orientativa, agrupando los medios en base
a su utilización más habitual. Sin embargo
existen otras posibilidades que no se han
incluido en este esquema ya que el objetivo
es que sea ágil y de fácil consulta.
Uso general
VII-II
Medios de cultivo deshidratados
Frascos preparados
VII-III
Índice alfabético de productos