Universidad de San Calos de Guatemala Facultad de Agronoma rea de Ciencias Subrea de Bioqumica

EXTRACCIN Y ESTUDIO CUALITATIVO DE PROTENAS EN LENTEJA (Lens sculenta)

Carmelina del R. Xajil Tohn 200817305

Guatemala, agosto 08 de 2011

INTRODUCCIN

Es importante conocer, como agrnomos, las propiedades fsicas, qumicas y bioqumicas que contienen los productos agrcolas. En esta ocasin se hace referencia al estudio de contenido proteico en la Lenteja (Lens sculenta) a la que luego de deshidratar y procesar hasta llevarla a harina se le realizar extracciones por mtodos salinos y acuosos para identificar la mayor cantidad posible de protenas que pudiera contener. Las protenas de los granos de leguminosas son fuente potencial de nutrientes valiosos, por lo cual son objeto de estudios para lograr su mejor aprovechamiento. El propsito de este trabajo consisti en determinar varias caractersticas cualitativas de las fracciones protenicas en Lenteja (Lens sculenta), separadas por solubilidad en diferentes agentes precipitantes de carcter metlico, as como de la prueba de Biuret para identificar protenas. Para ello y a modo de referencia se utiliz Casena, Gelatina, Albmina y Peptona como soluciones patrn de las diferentes pruebas sobre presencia de protenas. Los granos de las leguminosas comestibles son en gran medida nutrimentalmente importantes, como la principal fuente de protenas (20 al 40%) de bajo costo en la dieta del hombre. Tal como lo cita el prrafo anterior, se comprob que en efecto la Lenteja contiene un buen porcentaje de protenas puesto que al realizar la prueba de Precipitacin con Metales (Pb 2+ y Ag+) as como la prueba de Biuret, tanto para el extracto salino como para el extracto acuoso las pruebas fueron positivas.

OBJETIVOS

y y y

Llevar a cabo la extraccin acuosa y salina de protenas en Lenteja. Cualificar protenas en Lenteja con la prueba de Biuret Cualificar protenas en Lenteja con la precipitacin de metales pesados

RESULTADOS

Pruebas Cualitativas de Soluciones Patrn y Extractos de Protena

Prueba Muestra analizada Extracto Acuoso Extracto Salino Peptona Albumina Casena Gelatina

Metales Pesados Pb2+ + + + + + + Ag+ + + + + + +

Biuret + + + + + +

Fuente: datos experimentales, Laboratorio de Bioqumica, Edificio T-8, USAC

Prueba de Biuret: Soluciones Patrn y Extractos de Protenas

Muestra Extracto Acuoso Extracto Salino Casena Gelatina Albmina Peptona

Coloracin obtenida Violeta traslcido Violeta azulado Violeta traslcido Rosado traslcido Violeta traslcido Rosado traslcido

Dictamen + + + + + +

Fuente: datos experimentales, Laboratorio de Bioqumica, Edificio T-8, USAC

Porcentajes de Rendimiento
Tabla No.3

Porcentaje de humedad Porcentaje de eficiencia Prdida de masa

15.81 67.24 32.75

Fuente: datos experimentales, Laboratorio de Bioqumica, Edificio T-8, USAC

DISCUSIN DE RESULTADOS Durante la prctica se realizaron dos extracciones proteicas: el extracto salino y el extracto acuoso para analizar cualitativamente la presencia de algn tipo de protena en Lenteja. Para este fin, se llevaron a cabo como soluciones patrn la Casena, Albmina, Gelatina y Peptona, que sirvieron para comparar los resultados de los extractos en Lenteja y dictaminar si haba o no protenas

contenidas en sta. Adems se realiz tambin la prueba de Biuret para tener un patrn ms especfico de los resultados que se esperaban obtener. Los granos de las leguminosas comestibles son en gran medida nutrimentalmente importantes, como la principal fuente de protenas (20 al 40%) de bajo costo en la dieta del hombre. Tal como lo cita el prrafo anterior, se comprob que en efecto la Lenteja contiene un buen porcentaje de protenas puesto que al realizar la prueba de Precipitacin con Metales (Pb 2+ y Ag+) as como la prueba de Biuret, tanto para el extracto salino como para el extracto acuoso las pruebas fueron positivas, evidenciadas en los diferentes precipitados y coloracin de las muestras al agregarles los reactivos; tal como se muestra en los anexos, as como tambin se especifican en la tabla 1 y 2 de los resultados. Es sabido que ciertos factores como el tamao de partcula de la harina, la fuerza de agitacin, la relacin harina-disolvente, el nmero de extracciones por etapa, as como el estado fisiolgico de la semilla, influyen en la proporcin de las diferentes fracciones proteicas.(1) Esos factores, influyeron en la recuperacin total de la protena de Lens sculenta pues en el caso de la prueba de Biuret el color de las soluciones no fue tan marcado como en las soluciones patrn con las que se compar. Sin embargo, de manera general podemos afirmar que el proceso cumpli con lo que se quera, desnaturalizar las protenas para su posterior cualificacin. Y es que es por la desnaturalizacin de las protenas que se logra apreciar, por ejemplo, los precipitados con los metales o la formacin de los complejos y coloides ya que, cuando se desnaturaliza la protena el disolvente (en este caso el Pb2+ y Ag+) disminuyen su estabilidad en disolucin provocando la precipitacin (2). As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitan la agregacin intermolecular y terminan precipitndola (2). La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena: 1. Cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin 2. Una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos hidrofbicos del interior aparecen en la superficie 3. Prdida de las propiedades biolgicas

De tal modo que se espera que la semilla de Lenteja contenga al menos Globulinas, Glutelinas y Albminas ya que estas son las que reaccionan bajo las condiciones que en esta prctica se trabajaron.

En cuanto al porcentaje de rendimiento del procesamiento de la harina de semilla de lenteja, en forma generalizada puede decirse que fue poco rentable dado que el resultado que se muestra en la tabla No.3 es muy bajo para lo esperado. Sin embargo, hay que tomar en consideracin el hecho de que las condiciones de trabajo no fueron estndares ni tampoco controladas, como en un laboratorio de industria, cabra destacar la prdida de masa durante la molienda y tamizado (principalmente) as como el bajo porcentaje de deshidratacin y posiblemente errores en el uso de la balanza y poca precisin de la misma en el momento de la pesa.

CONCLUSIN 1. La semilla de lenteja dio positiva la prueba de precipitacin de metales, por lo cual se deduce que en efecto esta semilla contiene protenas en su estructura. 2. La prueba positiva de Biuret confirm la presencia de protenas en la semilla de Lenteja, pues tanto con el extracto salino como con el extracto acuoso las soluciones se colorearon a violeta traslcido. 3. La semilla de Lenteja contiene protenas que son solubles en agua y en medios salinos, ya que precipitaron con los metales. 4. El poco porcentaje de rendimiento pudo deberse a varios factores, entre ellos poca precisin en la pesada, prdida de masa en la molida y tamizada y bajo porcentaje de prdida de agua.

BIBLIOGRAFA

1. Clark, J. 1964. EXPERIMENTAL BIOCHEMISTRY, W.H Freeman and Company, Estados Unidos. Pp 228 2. Wharton, D. EXPERIMENTS AND METHODS IN BIOCHEMISTRY. CollerMacMIllan, Canada 349p.p 3. Stawnton, E. et.al. 1967. TEXTBOOK OF BIOCHEMISTRY. 4ed. The MacMIllan Co. Estados Unidos. Pp 1595 4. Gonzles, R. Manual de Laboratorio Bioqumica I. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia. Bogot 1997.

ANEXOS

1. Clculo de porcentajes Datos: a. Semilla Hmeda 650.30 g b. Semilla Seca 271.34 g c. Harina Tamizada 182.45 g Porcentaje de humedad (322.3 271.34 / 322.3) * 100 = 15.81 % Porcentaje de eficiencia (182.45 / 271.34) * 100 = 67.24 % Porcentaje de prdida % = 100 67.24 % = 32.75

Prueba de caracterizacin de Casena

Prueba de Caracterizacin de Gelatina

Prueba de Caracterizacin de Albmina

Prueba de Caracterizacin de Peptona

Prueba de Caracterizacin Extracto Acuoso

Prueba de Caracterizacin Extracto Salino

CUESTIONARIO Qu es una solucin patrn? Es una solucin que sirve como referencia para anlisis de otras soluciones desconocidas. Cul cree que es la razn para realizar dos tipos de extraccin de protenas? Porque hay protenas que son solubles en medios acuosos y otras que lo son en medios bsicos o alcalinos; y dado que no sabemos con certeza qu tipo de protena contiene nuestra semilla, es necesario realizar ambas pruebas. Qu tipo de protena segn su configuracin es ms soluble, las fibrosas o las globulares? En funcin de ello qu tipo de protena habr en mayor cantidad en sus extractos de protenas?

Las protenas globulares son ms solubles que las fibrosas, globulares. En qu se basa la prueba de precipitacin proteica por metales pesados, y qu resultado indica positivo y qu se logra identificar con esta prueba? Cuando se desnaturaliza la protena el disolvente (en este caso el Pb 2+ y Ag+) disminuyen su estabilidad en disolucin provocando la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitan la agregacin intermolecular y terminan precipitndola. Con ello se identifican principalmente protenas cargadas negativamente. En qu se basa la prueba de Biuret, cul resultado indica positivo y qu se logra identificar con esta prueba? El ion cobre formar un complejo con las protenas de una manera similar al que forma con el amonio. El complejo en el caso de las protenas es rojo o violeta, y azul en el caso del amonio. La prueba es positiva cuando la prueba analizada posee, al menos, dos enlaces peptdicos. Qu protenas se pueden extraer con agua? Albminas,Albuminoides, Histidinas, Protaminas Qu protenas se pueden extraer con solucin salina? Globulinas A qu se refiere la solubilidad por salado o salting in? Cuando las sales disminuyen o aumentan la solubilidad de una protena, haciendo mayor la cantidad de protena disuelta.