TG Color GPO/PAP AA 10 x 20 ml Mtodo enzimtico para la determinacin de triglicridos en suero o plasma Mtodo enzimtico para la determinacin de triglicridos en suero

o plasma con una porcin de Buffer y luego transferir al frasco de Buffer enjuagando varias veces. Homogeneizar y fechar. PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro". ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No mantener a temperaturas elevadas durante lapsos prolongados. Reactivo de Trabajo: es estable 30 das en refrigerador (2- 10oC). INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS El Reactivo de Trabajo puede presentar una coloracin rosada que no afecta su funcionamiento. Lecturas del Blanco superiores a 0,160 D.O. o lecturas del Standard anormalmente bajas, son indicios de deterioro del Reactivo. En tal caso, desechar. MUESTRA Suero o plasma a) Recoleccin: previo ayuno de 12 a 14 horas, obtener suero o plasma. Separar de los glbulos rojos dentro de las 2 horas de extraccin. b) Aditivos: en caso de emplear plasma, se recomienda el uso de Anticoagulante W o heparina para su obtencin. c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros con hemlisis intensa o marcadamente ictricos producen resultados errneos, por lo que no deben ser usados. Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las drogas en el presente mtodo. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: los triglicridos en suero son estables 3 das en refrigerador (2- 10oC). No congelar. MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotmetro o fotocolormetro. - Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados. - Tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas. - Bao de agua a 37oC.

- Reloj o timer. CONDICIONES DE REACCION - Longitud de onda: 505 nm en espectrofotmetro o 490-530 nm en fotocolormetro con filtro verde. SIGNIFICACION CLINICA Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma endgena a partir de los carbohidratos. Su medicin es importante en el diagnstico y manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen gentico o ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones endcrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como un factor de riesgo en enfermedades aterosclerticas. FUNDAMENTOS DEL METODO El esquema de reaccin es el siguiente: lipoprotein lipasa triglicridos > glicerol + cidos grasos glicerol kinasa glicerol + ATP > glicerol-1-P + ADP GPO glicerol-1-fosfato + O2 > H2O2 + dihidroxiacetonafosfato POD 2 H2O2 + 4-AF + clorofenol > quinonimina roja REACTIVOS PROVISTOS Buffer: solucin de buffer Good conteniendo clorofenol, pH 7,5. Enzimas: viales conteniendo lipoprotein lipasa, glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato oxidasa (GPO), peroxidasa (POD), adenosina trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4-AF). Standard: solucin de glicerol 2,26 mmol/l (equivale a 2 g/l de triolena). Concentraciones finales Good ........................................................ 50 mmol/l; pH 7,5 clorofenol ............................................................... 2 mmol/l lipoprotein lipasa .................................................... 800 U/l GK ......................................................................... 500 U/l GPO .................................................................... 1500 U/l POD ...................................................................... 900 U/l ATP ....................................................................... 2 mmol/l 4-AF ................................................................... 0,4 mmol/l REACTIVOS NO PROVISTOS Calibrador A plus provisto separadamente por Wiener lab. cuando se emplea la tcnica automtica. INSTRUCCIONES PARA SU USO

Standard: listo para usar. Reactivo de Trabajo: - 5/10 x 20 ml: agregar 20 ml de Buffer a un vial de Enzimas. Mezclar hasta disolucin completa. Homogeneizar y fechar. - 4 x 50 ml: reconstituir el contenido de un vial de Enzimas TG Color 861110005 / - Temperatura de reaccin: 37oC - Tiempo de reaccin: 5 minutos - Volumen de muestra: 10 ul - Volumen de reactivo: 1 ml - Volumen final de reaccin: 1,01 ml PROCEDIMIENTO Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos. En tres tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar: BSD Muestra - - 10 ul Standard - 10 ul Reactivo de Trabajo 1 ml 1 ml 1 ml Mezclar, incubar 5 minutos a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente (1825oC). Enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490- 530 nm) llevando el aparato a cero con agua destilada. ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL El color de reaccin final es estable 60 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leda dentro de este lapso. CALCULO DE LOS RESULTADOS Corregir las lecturas con el Blanco de reactivos y usar las lecturas corregidas para los clculos. 2 g/l TG g/l = D x factor factor = S METODO DE CONTROL DE CALIDAD Standatrol S-E 2 niveles. VALORES DE REFERENCIA El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los siguientes valores de Triglicridos: Deseable: < 1,50 g/l Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l

Elevado: 2,00 - 4,99 g/l Muy elevado: 5,00 g/l No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos o valores de referencia. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Los reductores disminuyen la respuesta de color, mientras que los oxidantes colorean el Reactivo aumentando los Blancos. Las contaminaciones con glicerol producen resultados falsamente aumentados. PERFORMANCE a) Reproducibilidad: procesando simultneamente replicados de las mismas muestras en 10 das diferentes, se obtuvieron los siguientes datos: Nivel D.S. C.V. 1,14 g/l 0,021 g/l 1,82 % 7,41 g/l 0,074 g/l 2,11 % b) Recuperacin: agregando cantidades conocidas de triolena a distintos sueros, se obtuvo una recuperacin entre 99,2 y 100,7% para todo el rango de linealidad del mtodo. c) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 10 g/l de triglicridos. Para valores superiores, repetir la determinacin con muestra diluida 1:2 con solucin fisiolgica. Multiplicar el resultado obtenido por la dilucin efectuada. d) Lmite de deteccin: depende del fotmetro empleado. En espectrofotmetros, el cambio mnimo de concentracin detectable en las condiciones de reaccin descriptas, para una variacin de absorbancia de 0,001 D.O. ser aproximadamente de 0,008 g/l. PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS Longitud de onda primaria ....................................... 505 nm Longitud de onda secundaria ................................... 700 nm Tipo de reaccin .................................................. punto final Direccin de la reaccin ....................................... aumenta Temperatura de reaccin .............................................. 37oC Relacin muestra/reactivo .......................................... 1:100 Tiempo de equilibrio ........................................... 3 segundos Tiempo de retardo .......................................... 300 segundos Tiempo de lectura ......................................... 5-20 segundos Absorbancia de Blanco ................................... < 0,250 D.O. Lmite de absorbancia ........................................ 2,000 D.O. Linealidad ................................................................... 10 g/l Para las instrucciones de programacin debe consultarse el Manual del Usuario del Analizador en uso. Para la calibracin debe emplearse Calibrador A plus de

Wiener lab., de acuerdo a los requerimientos del analizador. PRESENTACION - 5 x 20 ml (Cd. 1780107). - 10 x 20 ml (Cd. 1780101). - 4 x 50 ml (Cd. 1780105).
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