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    Determinación de Hemoglobina

    Cargado por

    Cristóbal Castro
    Este documento describe un método para determinar la hemoglobina (Hb) en la sangre mediante la formación de cianometahemoglobina. La sangre se mezcla con un reactivo que contiene ferrocianuro de potasio y cianuro de potasio para oxidar el hierro de la hemoglobina y formar cianometahemoglobina, cuya absorción a 540 nm se mide espectrofotométricamente y se compara con una curva de calibración para cuantificar la concentración de hemoglobina. El método es estable y puede real

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    Determinación de Hemoglobina

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    Título original

    Determinación de hemoglobina

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    Este documento describe un método para determinar la hemoglobina (Hb) en la sangre mediante la formación de cianometahemoglobina. La sangre se mezcla con un reactivo que contiene ferrocianuro de potasio y cianuro de potasio para oxidar el hierro de la hemoglobina y formar cianometahemoglobina, cuya absorción a 540 nm se mide espectrofotométricamente y se compara con una curva de calibración para cuantificar la concentración de hemoglobina. El método es estable y puede real

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    Determinación de hemoglobina (Hb)

    Fundamento:

    Es una proteína conjugada de color rojo integrantes de los eritrocitos entre un 31-34%.

    Existen varios métodos para determinación como hematina ácida, hematina alcalina,
    oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de
    elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado
    estándares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en
    espectrofotómetro de uso común y corriente.

    La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de


    potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina.
    El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina.
    La cloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina
    presente.

    Material:

     Tubos de ensayo de 13 x 100 ml

     Pipetas de 1ml

     Pipetas de Salí

     Boquillas

     Gradillas

     Gasa

     Celdas para espectrofotómetro

     Sangre capilar o venosa con anticoagulante.

    Reactivos:

     EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)

     Reactivo DE Drabkin:

    -ferrocianuro de potasio

    -cianuro de potasio

    -bicarbonato de potasio

     Solución estándar de cianometahemoglobina.


    Procedimiento:

    1.- Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de Drabkin

    2.- Homogeneizar bien la sangre

    3.- Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Sahli

    4.-Mezclar la sangre con el disolvente

    5.- Dejar Reposar 10 min. Para la formación de cianometahemoglobina

    6.- leer a 540 nanómetros en el espectrofotómetro contra un blanco de reactivo.

    7.- comparar con la curva calibrada de estándares.

    Valores de referencia:

    Mujeres: 12 -14 gr/dl

    Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl

    Hombres: 13-19gr/dl

    Recién nacidos: 13.19gr/dl

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