INTRODUCCIÓN:

El término Haemophilus se deriva

del griego y significa “ que ama la
sangre” , las especies de Haemophilus
son pequeños bacilos gram ( - ); a
menudo coco bacilos. Son móviles y
esporulados, que requieren uno o dos
factores de crecimiento específicos
presentes en la sangre. Algunos
necesitan el factor X, que consisten en
hem, hematina u otros tetrapirroles. En
general las colonias son lisas con
hemólisis; también forman colonias
planas y rugosas con escasos surcos,
granulares y cohesivas densas. ( 3)
Haemophilus influenza: Es el de mayor importancia médica;
Bacilo muy pequeño, se presentan solos, en pares, algunas veces en
forma bacilar y otras formando largos filamentos. Es inmóvil, no forma
esporas, y se presenta en forma capsulada y otra no capsulada;
presenta tendencia a la coloración bipolar. Son aeróbicos y anaerobios
facultativos, la presencia de CO2 puede favorecer el desarrollo en un
primer cultivo. Requiere un pH ligeramente alcalino y la temperatura
óptima es de 37º C .
(6)
En el hombre H. Influenza fue aislado por Pfeiffer en 1892; este
autor lo considero como agente etiológico de la gripe epidémica o
influenza hasta que se demostró que esa enfermedad era causada por
un virus. Hoy se sabe que el microorganismo puede dar origen a
conjuntivitis agudas, otitis media, faringitis, sinusitis, neumonías y
meningitis especialmente en niños. ( 4 )
Haemophilus ducrey: Es la causa del chancroide ( chancro
blanco), una enfermedad transmitida por contacto sexual. Consiste en
una úlcera de bordes irregulares sobre los genitales, con inflamación
notable y dolor. Los ganglios linfáticos regionales están hipertrofiados y
dolorosos. Los pequeños bacilos gram ( - ) se presentan formando
cordones en las lesiones, habitualmente junto con otros
microorganismos piógenos. (3)
Haemophilus aegyptius: También conocido como H.
Conjuntivitis o bacilo de Koch–Weeks, es el agente causal de una
conjuntivitis ( 4 )
Haemophilus parainfluenza: Puede ser causa de faringitis y, en
ocasiones de endocarditis bacteriana subaguda.( 2 )
 Haemophilus hemolyticus y H. Parahemolyticus: Se
encuentran presentes en las vías respiratorias, usualmente no
patógenas, pero pueden ser causa de endocarditis y faringitis. ( 3)
PRUEBAS BIOQUIMICAS

1. MUESTRAS

Las muestras consisten en exudado nasofaríngeo, pus, sangre y

líquido cefalorraquídeo, para frotis y cultivos.

2. IDENTIFICACIÓN DIRECTA

Cuando los microorganismos son abundantes en una muestra se

pueden identificar por inmunofluorescencia o mezclarlos directamente
con antisuero específico de conejo (tipo b) para una prueba de
tumefacción de la cápsula. En la identificación inmunitaria de antígeno
de H. Influenzae en líquido cefalorraquídeo; una prueba positiva indica
que el líquido contiene concentraciones altas del polisacárido específico
de H. Influenzae del tipo b. ( 1 )

3. CULTIVO

Las muestras se incuban en agar chocolate enriquecidos con

IsoVitaleX hasta que aparecen las colonias típicas (24 a 48 hrs.). El H.
Influenzae se diferencia de los bacilos gram negativos semejantes por su
requerimiento de factor X y V y por la ausencia de hemólisis sobre agar
sangre.
Las pruebas para requerimiento de los factores X (hem) y V
(dinucleótido nicotinamida adenina) pueden efectuarse de varias
maneras. Las especies de Haemophilus que requieren factor de
crecimiento V, crecen alrededor de las tiras de papel o de los discos que
 contienen factor V, colocados sobre la superficie de agar, el cual se ha
esterilizado en autoclave antes de añadir la sangre (el factor V es
termolábil). El crecimiento de Haemophilus en la parte situada entre las
tiras indica requerimiento de ambos factores. Una mejor prueba para el
requerimiento de factor X se basa en la incapacidad del H. Influenzae ( y
de otras especies de Haemophilus) para sintetizar hem a partir del ácido
delta-aminolevulínico. Los microorganismos Haemophylus que no
requieren factor X sintetizan porfobilinógeno, porfirinas, protoporfirina IX
y hem. La presencia de florescencia roja bajo luz ultravioleta
(aproximadamente 360 nm) indica la presencia de porfirinas y prueba
positiva. Las especies de Haemophylus que sintetizan porfirinas (y por
tanto Hem) no son H. Influenzae.( 1,4 )
El crecimiento optimo a PH 7.6 y en medios líquidos, puede estimularse
por aeración.
En el aislamiento primario crecen algunas cepas en presencia de 5%
de CO2.
Las reacciones de fermentación de Hinfluenzae son demasiados
variables como para tener la utilidad diferencial.(2 )

CARACTERÍSTICAS DIFERENCIALES DE LAS ESPECIES DEL GENERO

HAEMOPHILUS(3)

ESPECIE FACTOR HEMÓLISIS GLUCOSA SACAROS LACTO PRESEN CO2

S REQUERIDO A SA CIA DE FAVORECE
X Y CATALA EL
SA CRECIMIE
NTO
H. + + - + - - + -
infl
uen
zae
H. + + + + - - + -
haemol
yticus
H. + - - - - - - -
ducreyi
H. - + + + + - D D
paraha
emolyti
cus
H. - + - + + - D -
parainfl (3)
uenzae
 IMPORTANCIA CLÍNICA

Aunque muchos Haemophillus son habitantes normales del tracto

respiratorio superior del hombre, pueden convertirse en invasores
primarios y secundarios, H.influenzae del tipo b es el responsable del
95% de las infecciones causadas en niños de edades comprendidas
entre los seis meses y 3 años. La infección comprende en meningitis,
epligotitis aguda, faringitis , sinusitis, neumonía, otitis media y
bacteremia, algunas veces también causa endocarditis bacteriana y
artritis séptica, con menor frecuencia produce infecciones similares en
los adultos. En los adultos las enfermedades de vías respiratorias
superiores son causadas por Haemophillus Influenzae son el resultado
de la invasión secundaria de este microorganismo, siguiendo la infección
vírica ( 4)
.
La neumonía por H. Inflhuenzae ocurre con mayor frecuencia en
niños de menos de 5 años de edad y en personas de edad avanzada con
enfermedad pulmonar obstructiva crónica, otros factores importantes
son el cáncer, alcoholismo, desnutrición y diabetes sacarina.(6))
VIRULENCIA
Los influenzae del H. no producen ninguna exotoxinas demostrable el
papel directo de la endotoxina en meningitis o el bacteremia es no
entendible, aunque el liposacaridos externo de la membrana de la
bacteria gram-negativa se piensa para desempeñar un papel en la
inflamación asociada a media del otitis. Todas las tensiones virulentas
producen el neuraminidase y un proteasa de IgA, pero el papel de estas
enzimas extracelulares en la invasión está no probado. El aumento de
Fimbria la adherencia de bacterias a las células mucosa humanas in
vitro, y ellas se requieren para la colonización acertada del nasopharynx.
El antígeno de Antón, según lo definido en células de sangre rojas,
aparece ser el receptor.

La virulencia, por lo menos en el caso el bacteremia y meningitis, del se

relaciona directamente con la formación de la cápsula. Virtualmente
todas estas infecciones son causadas por el serotype del tipo b, y su
polisacárido capsular, conteniendo el ribose, ribitol y fosfato, es el
determinante probado de la virulencia. El material de la cápsula es
antiphagocytic, y es ineficaz en inducir el camino alternativo del
complemento, de modo que la bacteria pueda invadir la sangre o líquido
cerebroespinal sin la atracción de fagocitos o provocar una respuesta
inflamatoria y bacteriolisis complemento-mediado. Por esta razón, el
anticuerpo anticapsular, que promueve fagocitosis y bacteriolisis, es el
factor principal en defensa inmune contra infecciones de los influenzae .
La cápsula del fosfato del ribitol del polyribosyl (PRP) es el factor más
importante de la virulencia porque hace influenzae del tipo b H.
resistentes a la fagocitosis por los leucocitos polimorfo nucleares en
ausencia del anticuerpo anticapsular específico, y reduce la
susceptibilidad de los bacterum al efecto bactericida del suero. Sin
embargo, la susceptibilidad al efecto bactericida del suero depende de la
presencia anticuerpos a un número de otros sitios antígeno, incluyendo como de los
el liposacaridos y las proteínas externas de la membrana .señaladas .

IDENTIFICACIÓN EN EL LABORATORIO

La base del diagnostico se encuentra en el aislamiento en medios

especiales o placas de agar sangre. Las cepas sospechosas se
estudiaran en sus caracteres morfológicos, exigencias de cultivo y
pruebas serologicas ( 5 )
Si se examinan inmediatamente, pueden observarse bacilos
pleomórficos gram negativos, con concentración bipolar del sedimento
del líquido cefalorraquídeo en frotis teñido por tinción de Gram. El tipo B
se puede identificar de inmediato por la prueba de intumescencia
capsular o por la técnica directa de los anticuerpos fluorescentes.
Actualmente se dispone de los contrainmunoelectroforesis (CIE) para la
detección de los antígenos polisacáridos del Haemophylus influenzae en
líquido cefalorraquídeo. (2,5 )

El diagnostico de laboratorio de meningitis por Hib se basa en la

visualización directa de PMN y coco bacilos gram negativos en muestras
de LCR; la comprobación de niveles bajos de glucosa y altos de
proteínas en muestras de LCR; la demostración inmunológica de
material capsular de Hib en sangre, LCR o muestras de orina, y el cultivo
de microorganismos Hib en muestras de LCR.( 1 )

Se cuentan con diversas pruebas inmunológicas para detectar la

presencia de material capsular. La mayor parte de los laboratorios
emplea una prueba de aglutinación de látex (LA) o la prueba de
coaglutinación de proteína A estafilocócica (COA). Estas incluyen el uso
de anticuerpos anti – PRP que se une con las perlas de látex en la
prueba LA y con los estafilococos en la prueba COA. Se agrega una
muestra pequeña de sangre, LCR u orina al conjugado y las perlas o
estafilococos se aglutinan al ponerlos segundos o minutos si hay PRP.
Parece que la prueba LA es la prueba inmunológica de mayor
sensibilidad disponible. Sin embargo, un ensayo inmunológico
enzimático que se realizó en fecha más reciente que las pruebas LA o
COA demostró ser más específico para detectar el antígeno capsular Hib.
(3)
Como los microorganismos de H. Influenzae son muy sensibles a los
cambios de ambiente, las muestras clínicas que van a cultivarse se
recolectan antes de administrar antibióticos, se transportan al
laboratorio tan rápido como sea posible y no deben refrigerarse. Las
muestras de sangre, LCR y exudado se cultivan sobre agar color
chocolate o en cualquiera de los diversos medios selectivos para H.
influenzae. Cada medio de selectivo incluye sangre desfibrinada de
caballo, la cual contiene los factores X y V. Se agrega bacitracina a la
mayor parte de los medios selectivos para inhibir el crecimiento de otros
microorganismos que quizá se encuentren en la mucosa oro faríngea y
nasofaríngea. (1,5 )
Tras efectuar el cultivo de la muestra de Haemophylus, se utiliza
un panel de pruebas bioquímicas para determinar la especie y el biotipo
de los microorganismos.( 4 )

BIBLIOGRAFÍA:

1) Brooks, F.G. , Butel., Morse, A.G, Microbiologia Medica de Jawetz,

16 Edicion, 1999, cap. 19, pp:301,302,303,304.
2) Davis, D. B., Tratado de microbiología, cuarta
Edición,1996,Cáp..31, pp.:592.
3) Divo, A, Microbiología Medica, Editorial Interamericana,
Cáp..16,pp.:129,130.
4) Pumerola, A, Microbiología Y Parasitología Medica, segunda
Edición, Editorial M asno, Cáp.. 44486.
5) Spaulding,.H.E, Truant,P.J,manual de microbiologia clinica,1981,
cap..26,pp:305.
6) Stuart,T.W, Microbiologia, Editorial Mc Graw Hill, 1998,cap.. 6, pp:149,154,155.