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    Enzimoinmunoensayo

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    Clara Benedicto Escrig
    Este documento describe las consideraciones clave para seleccionar una enzima adecuada para su uso como marcador en ensayos inmunoenzimáticos. Explica que la enzima debe ser específica para un sustrato, producir un cambio detectable en el sustrato, y no debe estar presente de forma endógena en las muestras biológicas para evitar falsos positivos. También enumera algunas enzimas comúnmente utilizadas como marcadores, incluida la peroxidasa y la glucosa-6-fosfato desh

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    Enzimoinmunoensayo

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    Este documento describe las consideraciones clave para seleccionar una enzima adecuada para su uso como marcador en ensayos inmunoenzimáticos. Explica que la enzima debe ser específica para un sustrato, producir un cambio detectable en el sustrato, y no debe estar presente de forma endógena en las muestras biológicas para evitar falsos positivos. También enumera algunas enzimas comúnmente utilizadas como marcadores, incluida la peroxidasa y la glucosa-6-fosfato desh

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    enzimoinmunoensayo

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    Este documento describe las consideraciones clave para seleccionar una enzima adecuada para su uso como marcador en ensayos inmunoenzimáticos. Explica que la enzima debe ser específica para un sustrato, producir un cambio detectable en el sustrato, y no debe estar presente de forma endógena en las muestras biológicas para evitar falsos positivos. También enumera algunas enzimas comúnmente utilizadas como marcadores, incluida la peroxidasa y la glucosa-6-fosfato desh

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    ENZIMO INMUNO ENSAYO

    Marcaremos el Ag o el Ac con un enzima (este es especfico de un sustrato y transforma


    este en un producto; utilizaremos un sustrato que no es cromognico que cuando acta
    la actividad cataltica del enzima nos da un producto con color que se mide en el
    espectrofotometro).
    Si recordamos el fluorocromo no deba de tener poder inmunolgico. Aqu el enzima
    debe de ser una protena que no tenga actividad inmunolgica, debe ser especfica de
    un sustrato (actividad cataltica especfica), debe ser de medida sencilla, sensible y
    rpida.
    Una vez conjugada (pegada) con el Ag o Ac no debe perder la actividad cataltica. De
    fcil obtencin y bajo coste. Alto nivel de pureza.
    No debe ser un enzima que est presente en los fluidos biolgicos (sino obtendr un
    falso positivo).
    Los ms utilizados:
    - Peroxidasa
    - Glucosa oxidasa
    - Glucosa 6P deshidrogenasa
    - Fosfatasa Alcalina
    - -galacto-oxidasa
    Algunos existen en el organismo pero en muy baja cantidad. Se puede realizar una
    tcnica previa de adsorcin para eliminarlo del suero.
    Cmo se pega el enzima? Se pega el enzima con Glutaldehdo
    Cmo son las tcnicas de inmunoensayo? Se puede utilizar el inmunoensayo tanto para
    tcnicas cuantitativas como cualitativas. Son sensibles.
    Frente al RIA, ventajas:
    - Aparataje
    - Caducidad de los radioistopos, los enzimas caducan ms tarde
    No todo son ventajas, el enzima para que tenga su actividad cataltica necesita una
    temperatura y un pH determinado.
    Fundamento:

    Los tipos de Inmunoenzimoensayo son:


    - Homogneos
    - Heterogneos

    PREGUNTAS
    1. QU OCURRIR SI LA ENZIMA QUE ESTAMOS UTILIZANDO COMO
    MARCADOR EN LAS TCNICAS DE EIA SE ENCUENTRA PRESENTE EN LA
    MUESTRA DE MANERA SIGNIFICATIVA?
    Que dar falso positivo porque el sustrato ser transformado a producto por la
    enzima que est presente en el suero.
    2. FACTORES QUE INFLUYEN EN LAS TCNICAS EIA:
    o pH determinado, temperatura determinada
    o Medio
    o Especificidad
    o Fuerza inica
    3. CAL ES EL FLUOROCROMO MS UTILIZADO?
    La fluorescena porque es ms fcil visualizarla con el ojo humano (color verde
    manzana)

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