Creatinina

Mtodo colorimtrico con desproteinizacin para la

determinacin de creatinina en suero u orina

SIGNIFICACION CLINICA
La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina
del organismo casi exclusivamente por filtracin renal. Su
determinacin en suero, as como el clearance de creatinina endgena constituyen parmetros importantes para el
diagnstico de diversas afecciones renales. Sin embargo,
debido a los problemas prcticos inherentes a la determinacin del clea-rance (recoleccin de orina en nios, etc.),
la determinacin de creatinina srica es ms utilizada como
ndice de funcionalismo renal.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio
tamponado, previa desproteinizacin con cido pcrico,
obtenindose un cromgeno que se mide a 510 nm.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: cido pcrico 41,4 mmol/l.
B. Reactivo B: buffer glicina/NaOH 1 mol/l.
S. Standard: solucin de creatinina 20 mg/l.
REACTIVOS NO PROVISTOS
Agua destilada.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivos Provistos: listos para usar.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.
Reactivo B: R36/38: irrita los ojos y la piel. S26/28: en caso
de contacto con los ojos y la piel, lvense inmediatamente y
abundantemente con agua y acdase a un mdico. S37/39:
usar guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Los Reactivos Provistos son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
MUESTRA
Suero u orina
a) Recoleccin: obtener suero de la manera usual. Puede
emplearse tambin orina de 2 o de 24 horas. Su recoleccin debe efectuarse en un recipiente perfectamente limpio

mantenido en refrigerador (2-10oC) durante el tiempo de la

recoleccin. Medir la diuresis, tomar una alcuota y efectuar
una dilucin 1:50 de la misma. En caso de que la diuresis
sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12 para
calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.
b) Aditivos: no se requieren. No se recomienda el uso de
plasma pues se obtienen resultados menores en un 8 a
un15%.
c) Sustancias interferentes conocidas: hemlisis ligera a
moderada no interfiere, pero no debe emplearse sangre total
ya que aproximadamente el 60% del material Jaffe-reactivo
de los eritrocitos no es creatinina.
Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
drogas en el presente mtodo.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: es
conveniente utilizar el suero recin obtenido. Si esto no es
posible puede mantenerse hasta 24 horas en refrigerador
(2-10oC) sin variaciones de los resultados.
Orinas destinadas a esta determinacin pueden mantenerse hasta 4 das en refrigerador (2-10oC) sin agregado de
conservantes.
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
- Espectrofotmetro o fotocolormetro.
- Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.
- Tubos.
- Reloj o timer.
CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 510 nm en espectrofotmetro o en
fotocolormetro con filtro verde (500-540 nm).
- Temperatura de reaccin: temperatura ambiente, que no
debe exceder los lmites de 15 y 30oC.
- Tiempo de reaccin: 35 minutos
- Volumen de muestra: 0,7 ml
- Volumen final de reaccin: 3,5 ml
PROCEDIMIENTO
En caso de que la muestra a utilizar sea suero, debe
efectuarse una desproteinizacin de la siguiente manera:
a 0,7 ml de suero agregar 3,5 ml de Reactivo A. Mezclar
por inversin. Dejar reposar 10 minutos y centrifugar a
3000 r.p.m. durante 5 minutos como mnimo.
En tubos marcados B (Blanco), S (Standard), Ds y Do
(Desconocidos suero y orina), colocar:

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Ds

Do

Desproteinizado
Standard

3 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

Orina diluida (1:50) -

Agua destilada

1 ml

Reactivo A

2 ml

2 ml

2 ml

Reactivo B

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

0,5 ml

Mezclar por inversin. Incubar 20 minutos a temperatura

ambiente. Luego leer en espectrofotmetro a 510 nm o
en fotocolormetro con filtro verde (500-540 nm), llevando
a cero el aparato con agua destilada.
MICROTECNICA
Si es necesario usar menos cantidad de muestra y el
aparato de lectura lo permite, pueden desproteinizarse
0,4 ml de suero con 2 ml de Reactivo A separando 1,5 ml de
sobrenadante y adicionando a ste 0,25 ml de Reactivo
B. En ambos casos el Standard y Blanco se procesan
de la forma habitual.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color de la reaccin es estable durante 10 minutos
por lo que la absorbancia debe ser leda dentro de ese
lapso. El Blanco y el Standard pueden leerse hasta los
60 minutos.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Corregir las lecturas S y D restndoles el Blanco (B).
1) Creatinina en suero (mg/l) = Ds x f

f=

20 mg/l
S

Do
2) Creatinina en orina (g/24 hs) =
x V
S

siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
La frmula surge de:

Do
Creatinina en orina (g/24 hs) =
x 0,020 g/l x 50 x V
S

donde:
0,020 g/l = concentracin del Standard
50 = factor de dilucin
3) Depuracin de Creatinina Endgena (D.C.E.):

Creatinina en orina (g/24 hs)
D.C.E. ml/min =
x 694 ml/min
Creatinina en suero (mg/l)

donde:

g/24 hs 1.000 mg x 1.000 ml 1.000.000 ml
694 ml/min =
=
=
mg/l
1 mg x 1.440 min
1.440 min

CONVERSION DE UNIDADES
Creatinina (mg/l) = Creatinina (mg/dl) x 10
Creatinina (umol/l) = Creatinina (mg/dl) x 88,4
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Si la muestra a ensayar es suero, procesar 2 niveles de un
material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles)
con concentraciones conocidas de creatinina, con cada
determinacin. En el caso de muestras de orina, utilizar un
control con base de orina.
VALORES DE REFERENCIA
Suero: 8 a 14 mg/l
Orina: 0,9 a 1,5 g/24 horas.
D.C.E.: 80 a 140 ml/min (promedio 125 ml/min)
Estos valores de D.C.E. corresponden a adultos hasta 60
aos.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
- Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
- En caso de haberse comprobado la presencia de acetoacetato en la muestra, una vez agregado el Reactivo A (y antes
de centrifugar en el caso de suero), colocar en bao de
agua a ebullicin durante 5 minutos, con lo que se elimina
casi totalmente esta interferencia. Enfriar y continuar como
se indica en PROCEDIMIENTO.
- Luego de la desproteinizacin del suero con Reactivo A
pueden observarse eventualmente escasas partculas
en el sobrenadante, las que no interfieren en la reaccin.
- El factor colorimtrico puede utilizarse cuando la reaccin
se efecta entre 20 y 25oC. De no ser as debe procesarse
simultneamente un standard con cada lote de determinaciones. De todos modos la temperatura de reaccin no
debe exceder los lmites de 15 y 30oC.
PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas
muestras en un mismo da se obtuvieron los siguientes
resultados:
Nivel
7,4 mg/l
14,1 mg/l

D.S.
0,19 mg/l
0,25 mg/l

C.V.
2,5 %
1,7 %

b) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 40 mg/l, en caso

de que los resultados superen este valor, deber diluirse la
solucin coloreada final 1:2 1:4 con el Blanco de Reactivos,
repetir la lectura y multiplicar el resultado por la dilucin
efectuada.
c) Recuperacin: agregando cantidades conocidas de
creatinina a distintos sueros se obtuvo una recuperacin
entre 96 y 101%.
d) Lmite de deteccin: depende del fotocolormetro empleado y de la longitud de onda utilizada. En espectrofotmetro con cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor, para
un cambio de absorbancia de 0,001 D.O., el mnimo cambio
de concentracin detectable ser de 0,09 mg/l.

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PRESENTACION
Kit para 220 determinaciones (Cd.1260001).
BIBLIOGRAFIA
- Biggs, H.G. & Cooper, J.M. - Clin. Chem. 7/6:655 (1961).
- Martinek, R.G. - Amer. Med. Technol. 32/6:700 (1970).
- Searcy, R.L. - Diagnostic Biochemistry, Mc. Graw - Hill
Book Co. New York (1969).
- Teger-Nilsson, A.C. - Scand. J. Clin. Lab. Invest. 13:326
(1961).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001.

SIMBOLOS
Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de
reactivos para diagnstico de Wiener lab.

Este producto cumple con los requerimientos previstos

por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios
para el diagnstico "in vitro"

P Representante autorizado en la Comunidad Europea

V

Uso diagnstico "in vitro"

Contenido suficiente para <n> ensayos

Fecha de caducidad

Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar

Riesgo biolgico
Volumen despus de la reconstitucin

Cont.

Contenido

Nmero de lote

Elaborado por:

Xn

Nocivo
Corrosivo / Castico

Xi

i
Calibr.

b
b
c
h

Irritante
Consultar instrucciones de uso
Calibrador
Control
Control Positivo
Control Negativo
Nmero de catlogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
Bioqumica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. N: 252/75 - 1211/00

870400000 / 00 p. 3/6

Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
UR110408