UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES
Departamento de Ciencia y Tecnologa
Bioprocesos I 2010 Segundo Cuatrimestre
1
TRABAJO PRACTICO
CULTIVO DISCONTINUO ALIMENTADO (BATCH ALIMENTADO)
Otro modo de operar un biorreactor es empleando la tcnica de batch alimentado (BA)
o fed batch. Esta tcnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta continuamente
medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. Si el nutriente que se alimenta es el
limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la velocidad de crecimiento () del
microorganismo.
El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular y/o la
formacin de producto son sensibles a la concentracin del sustrato limitante, es decir cuando
el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del metabolito buscado se ven
afectados. As, este mtodo se emplea cuando se quieren evitar fenmenos de inhibicin por
sustrato y se requiere alcanzar una alta concentracin de biomasa.
ESQUEMA
RESERVORIO
BOMBA
BIORREACTOR
F(t)
S
R
(t)
V
R
= V
f
- V
0
V
0
, X
0
, S
0
V
f
, X
f
Donde F(t): caudal de alimentacin
S
r
(t):concentracin de sustrato de la alimentacin
V
f
: volumen final de trabajo
V
o
: volumen al inicio de la alimentacin
X
o
: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin
S
o
: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin
El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V
o
, X
o
y S
o
son las
condiciones finales de dicho batch.
Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo de
caudales variables (F = F(t)), o bien mediante la variacin de la concentracin de sustrato
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limitante (S
r
=S
r
(t)). En el caso del Trabajo Prctico se utilizar el sistema ms simple, es decir
F=cte y S
r
=cte.
PRODUCCION DE BIOMASA: ECUACIONES Y DISEO
El cultivo puede describirse matemticamente. La resolucin de las ecuaciones as
obtenidas permitir calcular la evolucin de la biomasa durante el cultivo, la velocidad
especfica de crecimiento, y la productividad. Asimismo se podrn determinar parmetros de
diseo, tales como F y S
r
.
Para estudiar la evolucin de X durante el cultivo se deben plantear las ecuaciones de
balance de materia.
SUSTRATO
acumulacin = suministro - consumo
(1)
d(S. V)
d t
F S
x V
Y
R
x/s
=
En este caso el volumen no es constante, como ocurre en cultivos en batch o en
continuo. Por lo tanto la expresin (1) quedar:
(2) V
dS
dt
S
dV
dt
F.S
x V
Y
R
x/ s
+ =
La condicin final del batch es S = 0, pues, como se intenta controlar , S no puede ser
saturante (recordar a Monod).
Si S~ 0, dS/dt = 0, con lo que (2) se transforma en
(3)F . S
R
-
x V
Y
x/ s
= 0
de aqu, y recordando que r
x
= . X
(4) F . S
R
=
r V
Y
x
x/s
esta ecuacin indica que la velocidad de produccin de biomasa se acomoda a la velocidad de
suministro de sustrato, es decir que r
x
puede controlarse externamente, modificando F y/o
S
r
.
La ecuacin (3) es en realidad un lmite superior ya que dados , X y V, cualquier par
de valores F, S
r
que satisfagan la condicin
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3
(4) F . S
R
x V
Y
x/s
harn que la velocidad de crecimiento est limitada por la velocidad de alimentacin. Esta
ecuacin (3) ser muy til en el momento de disear la alimentacin.
BIOMASA
La velocidad de acumulacin de biomasa ser:
(5)
d(xV)
d t
x V o bien
d (xV)
d t
r V
x
= =
o, reordenando,
(6) r
x
=
1
V
d(xV)
d t
Si se reemplaza en (4) se obtiene
(7) F . S
R
=
1
Y
d (x V)
d t
x/s
que indica que la velocidad de acumulacin de biomasa depende de la velocidad de
alimentacin de sustrato.
Integrando (7), se llega a
(8) X V = x
o
V
o
+ Y
x/s
F S
R
t
Uno de los objetivos planteados es conocer cmo vara la concentracin de biomasa
con el tiempo. En cultivo en batch, al ser V = cte, X.V es proporcional a X. En BA V no es
constante, sino que vara con el tiempo (F = dV/dt). Integrando se tiene
(9) V = V
o
+ F t
reemplazando en (8) y despejando X, se tendr
(10) X =
x V
Ft + V
Y F S t
Ft + V
o o
o
x/ s R
o
+
expresin que describe la variacin de X con t a lo largo del cultivo alimentado. Puede darse
el caso en que el aumento de V sea tal que haya un efecto de dilucin que provoque la
disminucin de la concentracin de biomasa. As, puede ocurrir que la concentracin final
alcanzada sea menor que la inicial, pero no as la cantidad total X.V.
DISEO
Se desea obtener una concentracin final de biomasa X
f
, con un volumen final V
f
. El
volumen total adicionado durante el BA ser:
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(11) V
f
- V
o
= F.t
donde t
f
es el tiempo total de alimentacin. Cuando t = t
f
, la ecuacin (8) se transforma en
(12) X
f
V
f
= X
o
V
o
+ Y
x s
S
R
F.t
f
Reemplazando (11) en (12), y despejando S
r
queda
(13) S
R
=
X V X V
Y V V
f f o o
x s f o
( )
La ecuacin (13) permite calcular la concentracin de sustrato limitante en el
reservorio. Resta calcular F, cuyo valor debe ser tal que satisfaga la ecuacin (4). En
particular, para t = 0 (inicio de la alimentacin )ser:
(14) F S
R
o o o
x s
X V
Y
``
El valor de t
f
se calcula a partir de la ecuacin (11).
NOTA:
o
puede ser igual a
max
si la alimentacin se inicia el final de la fase exponencial del
batch.
Debe destacarse que si F.S
r
fuera mayor que la velocidad de consumo de sustrato,
habra una acumulacin de sustrato en el medio, y el crecimiento no sera limitado.
Es interesante conocer la variacin de durante el batch alimentado. Recordando el
balance de materia para la biomasa
=
dt
xV d ) (
xV =
dt
xV d
xV
) ( 1
d xV
dt
Y FS
x s R
( )
=
Por lo tanto se obtiene
(15) = Y FS
xV
x s R
1
Si se reemplaza (8) en (15), ser
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(16) =
FS Y
X V FS Y t
R x s
o o R x s
+
expresin que indica que disminuye con t a lo largo del batch alimentado.
Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones
halladas.
Tiempo Hs
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Biomasa total
Sustrato
Volumen
Alimentacin
Al obtener valores de S
r
y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en
batch alimentado. El caso descrito hasta aqu tiene en cuenta que tanto F como S
r
sean
constantes. Es claro que en caso de ser F = F(t) y/o S
r
= S
r
(t), dicha funcionalidad habr de ser
tenida en cuenta para resolver las ecuaciones planteadas.
COEFICIENTE DE MANTENIMIENTO CELULAR
Los microorganismos requieren energa para mantener ciertas funciones especficas,
tales como recambio de material celular, trabajo osmtico, movilidad, entre otros. Esto es
decir que an cuando el crecimiento celular sea nulo (r
x
= 0) puede observarse cierto
consumo de fuente de carbono y energa.
As, puede escribirse una ecuacin para expresar la velocidad de consumo de la fuente
de carbono y energa que tenga en cuenta dicho mantenimiento celular
(1) r
s
=
r
Y
m x
x
x s
s
+ con r
x
= X (2)
Esta es la ecuacin lineal de consumo de sustrato descrita por Pirt, donde:
m
s
: COEFICIENTE DE MANTENIMIENTO (g sustrato / g biomasa . hora)
Y
x/s
: rendimiento terico (rendimiento obtenido si no hubiera consumo de fuente de
carbono y energa para mantenimiento)
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El valor de Y
x/s
es mayor que Y
x/s
, siendo ste el nico posible de ser obtenido a partir
de datos experimentales.
El coeficiente m
s
puede variar en un amplio intervalo (0,01 - 0,1 g/g.h). m
s
aumenta
con la temperatura, con el aumento de presin osmtica y con la fuerza inica. Es evidente
que se debe tratar de trabajar en condiciones tales que m
s
sea bajo si se desea obtener un alto
rendimiento en biomasa.
Las ecuaciones que describen un cultivo en batch alimentado pueden adaptarse para el
caso en que m
s
0 (lo que tal vez sea ms real que considerar m
s
= 0)
El balance de materia para la biomasa ser
(3) =
dt
xV d ) (
xV
y para el sustrato
0
) (
= = V r FS
dt
sV d
s R
(4)
que se iguala a 0 por ser crecimiento restricto. Reemplazando (1) y (2) en (4) llegamos a
(5)
d SV
dt
F S
xV
Y
m xV
R
x s
s
( )
.
/
=
0
Si introducimos (3) en (5), ser
(6) 0
) ( 1
.
/
=
xV m
dt
xV d
Y
S F
s
s x
R
y reordenando
(7)
R s x s x s
FS Y xV Y m
dt
xV d
/ /
) (
= +
Debe notarse que si m
s
= 0, esta es la expresin de velocidad de acumulacin de biomasa para
batch alimentado.
Integrando, con X = X
o
y V = V
o
para t = 0, obtenemos
(8)
t Y m
s
R
o o
s
R s x s
e
m
FS
V x
m
FS
xV
/
+ =
(NOTA): para integrar, hacer la sustitucin
Z = Y
x/s
F S
R
- m
s
Y
x/s
xV
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La variacin de X.V con t puede representarse grficamente
t
X
.
V
X
0
.V
0
t
0
m
s
= 0
m
s
> 0
En (X.V)
max
= cte, ser d(X.V)/dt = 0. Por lo tanto, de (7) surge que
(X.V)
max
= F.S
r
/ m
s
Esto significa que todo el sustrato se utiliza en mantenimiento, y la concentracin
celular X disminuye, pues hay una gran dilucin del sistema. Esto puede analizarse desde el
punto de vista de
d(X.V)/dt = 0 = r
x
.V
o sea, r
x
= 0
Con estas consideraciones puede evaluarse m
s
.
De la ecuacin (6 ) surge que
(9) m
s
=
xV dt
xV d
Y xV
S F
s x
R
1 ) ( 1 .
/
Experimentalmente podrn encontrarse tres casos:
a) X.V = cte, lo cual implica que
(10) m
xV
S F
R
=
.
s
b) Acumulacin de biomasa, es decir d(xV)/dt > 0. Por lo tanto
(11)
F S
xV
m
R
s
.
>
c) Disminucin de la biomasa: d(xV)/dt < 0. En este caso ser
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(12)
s
R
m
xV
S F
<
.
(Este ltimo caso se explica mediante el llamado modelo del metabolismo endgeno)
EL EXPERIMENTO
Se realizar un cultivo en batch alimentado de la levadura Saccharomyces cerevisiae.
El medio y las condiciones de cultivo a emplear en el batch previo al comienzo de la
alimentacin se describen en la gua Cultivo en batch.
El diseo de la alimentacin se debe realizar de modo tal que sea x
f
= 15 g/l. El
volumen final V
f
= 4.5 l. Las condiciones al inicio de la alimentacin sern: V
o
= 3 l; x
o
= 7
g/l; S
o
= 0. Se sabe que
max
= 0,40 h
-1
pero que el valor de no debe superar el valor de 0,3
ya que por encima de este valor el microorganismo produce etanol y que Y
x/s
= 0,45 g cel/g
sustrato.
Con estos datos deben calcularse F, S
r
y t
f
tales que cumplan con las condiciones
impuestas. Tambin pueden evaluarse la evolucin de X, de X.V y de durante la
alimentacin.
Las condiciones sern:
Volumen inicial: V
o
= 3.5 l
Concentracin inicial de biomasa: x
o
= 7 g/l
Volumen final: V
f
= 4.5 l
tiempo de alimentacin: 6 h
El protocolo de trabajo es el mismo que el utilizado en el trabajo prctico de Batch.
