Manual de Hematologia I-4

Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANLISIS CLNICOS LABORATORIO DE HEMATOLOGA I Q.F.
BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LICENCIATURA: QUMICO FARMACOBILOGO REA ESPECFICA DE ANLISIS CLNICOS
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO
ASIGNATURA DE: CDIGO: FECHA DE ELABORACI: NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: TIPO DE ASIGNATURA:
HEMATOLOGA I LQFB 406L MARZO 2006 FORMATIVO CB
PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIN:

M. C.. SILVIA GARCA GONZLEZ M. C.. MIGUEL ANGEL VILLEGAS GONZLEZ
HORAS PRCTICA. 2
TOTAL DE CRDITOS: 0
Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANLISIS CLNICOS LABORATORIO DE HEMATOLOGA I Q.F.B
NDICE
PRESENTACIN E INTRODUCCIN PRCTICA 1 PRCTICA 2 PRCTICA 3 TOMA DE MUESTRAS SANGUNEAS CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG, CUENTA DE ERITROCITOS E NDICES ERITROCITARIOS CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIN DE EXTENDIDO SANGUNEO (TINCIN DE WRIGHT Y GIEMSA) CON VALORES ABSOLUTOS Y RELATIVOS. CUENTA DE RETICULOCITOS Y FRAGILIDAD ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTNICAS CITOMETRA HEMTICA COMPLETA DE FORMA MANUAL CITOMETRA HEMTICA AUTOMATIZADA SEMINARIO SOBRE INTERPRETACIN DE HISTOGRAMAS CITOMETRA HEMTICA Y SU INTERPRETACIN EN DIVERSAS PATOLOGAS 3 4 7 10
PRCTIC 4
22
PRCTICA 5 PRCTICA 6 PRCTICA 7 PRCTICA 8 PRCTICA 9
31 36 38 41 42 43 45 48 51 51 52 54 57
PRCTICA 10 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS MICROCTICAS, NORMOCTICAS Y MACROCTICAS. PRCTICA 11 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS HEMOLTICAS PRCTICA 12 OBSERVACION DE MEDULA OSEA NORMAL. PRCTICA 13 RESOLUCIN DE CUADROS CLNICOS PRCTICA 13 EVALUACIN FINAL PREPARACIN DE REACTIVOS CUESTIONARIO BIBLIOGRAFA
INTRODUCCIN Siglos atrs la sangre fue considerada como el lquido esencial para la vida y se le atribua ser la fuente que mantena el equilibrio en el organismo, sin embargo la composicin celular de la sangre no se reconoci hasta la invencin del microscopio, siendo Leeuwenhoek el primero en observar los glbulos rojos, no fue hasta aos despus cuando se logr realizar exploraciones de los elementos que constituyen a la sangre, definindose sta como un rgano polisistemtico constituido por eritrocitos, leucocitos, plaquetas y plasma. La complicada composicin de la sangre provoc el inters para realizar estudios sobre las clulas que la constituan, siendo K. Vierordt quin realiz los primeros anlisis cuantitativos de stas, pero fue hasta los aos treinta que se intent relacionar el nmero de clulas sanguneas con algunas patologas, mtodos cada vez mejores y conocimientos ms profundos sobre la fisiologa sangunea permiti una relacin estrecha con el cuadro clnico presentado por diferentes pacientes. En la actualidad se han desarrollado tcnicas cualitativas y cuantitativas de los componentes celulares, que en conjunto constituyen la CITOMETRA HEMTICA: Determinacin de hemoglobina y hematocrito, cuenta de eritrocitos, leucocitos, plaquetas, observacin del frotis sanguneo y clculos de los ndices eritrocitarios. La Citometra hemtica es sin lugar a dudas el primer paso para el diagnstico, dado que numerosos trastornos se acompaan de alteraciones en las clulas por lo cual es importante hacer la diferenciacin. Las clulas pueden sufrir alteraciones no slo en su forma sino tambin en su cantidad y su funcin, que pueden ser secundarias a algunas alteraciones fisiopatolgicas, enfermedades crnicas, terapias con medicamentos, dficit de algn componente, neoplasias, etc., lo cual lleva a alterar las funciones que desempean como es: defensa contra infecciones, aporte de oxgeno. etc. Actualmente se cuenta con aparatos automatizados para la determinacin de la citometra hemtica, da a da han sustituido a la forma manual, ya que los valores son ms precisos; sin embargo el Qumico Farmacobilogo debe estar preparado para realizar esta prueba por ambos mtodos. OBJETIVOS. 1. El alumno conocer el funcionamiento de un laboratorio de hematologa, as como las medidas de precaucin para su proteccin personal en cuanto al manejo de las muestras de sangre, al ser considerarlas potencialmente infecto-contagiosas. 2. El alumno conocer y aprender a manejar el material y equipo ms comn que se utiliza en la realizacin de la citometra hemtica. 3. El alumno aprender a analizar y correlacionar el resultado de la citometra hemtica con las manifestaciones clnicas que presente el paciente. 4. El alumno conocer las alteraciones morfolgicas ms frecuentes que se presentan en las anemias.
PRCTICA No. 1 TOMA DE MUESTRA SANGUNEA OBJETIVO: El alumno conocer y aprender a realizar una puncin venosa para obtener muestra de sangre. 1. MTODOS DE EXTRACCIN SANGUNEA. Las determinaciones de la Citometra Hemtica, de preferencia se realizan con sangre venosa, ya que la extraccin es ms fcil, se obtiene una cantidad adecuada como para repetir cuantas veces sea necesario, la manipulacin y el pipeteo es mucho ms fcil, sin embargo tambin se puede utilizar sangre capilar o arterial. 1.1. OBTENCIN DE SANGRE CON JERINGA. La extraccin se realiza con jeringa de plstico y aguja desechable. En las tomas de muestra el operador debe adoptar una actitud de confianza y seguridad para que el paciente pueda ser tranquilizado y colabore de forma eficaz. 1.1.1 MATERIAL A UTILIZAR POR EQUIPO. 1 Torniquete por equipo 1 Frasco con torundas con alcohol etlico al 70 %, como antisptico. 2 Tubos de ensayo de 13x75 mm con tapn de color lila. 1 Frasco con 10 ml con solucin de etilen-diamino-tetra-acetato de sodio al 10 % (EDTA). 1.1.2 PROCEDIMIENTO. 1) En un tubo de ensayo de 13x75 mm se coloca una gota del anticoagulante, en la etiqueta se escribe en el nombre del paciente, fecha y anlisis deseado. 2) El paciente cmodamente sentado, coloca el brazo en posicin horizontal, se palpan las venas, (venas ceflica media y baslica) al mismo tiempo se le solicita que abra y cierre el puo con la finalidad de hacerlas ms evidentes. 3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuar la puncin, se sujeta el brazo del paciente tensando la piel, se limpia la zona en forma circular y de dentro hacia afuera, con el antisptico, se deja secar, sin soplar. 4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba del pliegue del codo, no apretndolo demasiado y slo el tiempo necesario, para evitar la hemoconcentracin. 5) Se toma la jeringa de manera que el bisel de la aguja se encuentre hacia arriba, se coloca paralela al trayecto de la vena, se introduce a la piel y vena con una puncin directa y nica. 6) Cuando la aguja ha penetrado en la vena, se ve el flujo de la sangre en la jeringa. 7) Jalar suavemente el mbolo de la jeringa para obtener la cantidad de sangre deseada, hacer esta operacin despacio para evitar la hemlisis. 8) Se suelta el torniquete y se retira la aguja suavemente aplicando la torunda sobre el sitio de la puncin, indicndole al paciente que flexione el codo suavemente con el puo abierto, con la finalidad de evitar hemorragias o hematomas. 9) Se quita con mucho cuidado la aguja de la jeringa con la ayuda de su funda, con movimiento de torsin, y la sangre se vaca lentamente por las paredes del tubo que contiene el anticoagulante, se tapa y se mezcla suavemente, durante un minuto.
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1.2
OBTENCIN DE SANGRE CON SISTEMA VACUTAINER.
El fundamento es la aspiracin directa de la sangre en tubos al vaco que contienen el tipo y cantidad apropiada de anticoagulante. 1.2.1 MATERIAL A UTILIZAR POR EQUIPO. 1 Torniquete 1 Soporte Vacuntainer 2 Agujas Vacuntainer de calibre 20x25mm (Bisel corto) y/o 20x32mm (bisel largo) 2 Tubos al vaco con EDTA (Tapn color lila) 1 frasco con Torundas con alcohol al 70 % por seccin 1 par de guantes de ltex desechables por persona 1.2.2 PROCEDIMIENTO (Presentacin de video) 1) Preparar el sistema: La aguja se gira para romper el sello de esterilidad, se atornilla al soporte, se quita la capucha, quedando lista para la puncin, el tubo debe estar rotulado con el nombre del paciente, estudio y fecha de realizacin. 2) El paciente cmodamente sentado coloca el brazo en posicin horizontal, se palpan las venas, (venas ceflica media y baslica) al mismo tiempo se le solicita que abra y cierre el puo con la finalidad de hacerlas ms evidentes. 3) Una vez seleccionada la vena en la que se efectuar la puncin, se sujeta el brazo del paciente tensando la piel, se limpia la zona en forma circular y de dentro hacia afuera, con el antisptico, se deja secar, sin soplar. 4) Se aplica el torniquete a 7 cm. aproximadamente por arriba del pliegue del codo, no apretndolo demasiado y slo el tiempo necesario, para evitar la hemoconcentracin. 5) Sujetar firmemente el soporte con la mano derecha e introducir la aguja con el bisel hacia arriba en la vena elegida, se sujetar el brazo del paciente con la mano izquierda, y con el pulgar se sostendr el soporte vacuntainer para evitar que se mueva la aguja. 6) Empuje el tubo vacutainer hasta el final del soporte, perforando completamente el tapn. 7) Dejar fluir libremente la sangre hasta que se acabe el vaco. 8) Retire el torniquete suavemente. 9) Jalar el tubo vacuntainer hacia afuera del soporte y sin quitar el tapn mezcle suavemente la sangre con el anticoagulante lentamente sin sacudir. (aprox. 60 veces) 10) A continuacin retire la aguja colocando la torunda en el sitio de la puncin, indicndole al paciente que flexione el brazo suavemente. 1.2.3 PRECAUCIONES:
1. Verificar que el material sea estril, para evitar la transmisin de VIH y HEPATITIS, entre otras, se debe utilizar guantes durante la extraccin sangunea para proteccin personal. 2. Debe evitarse una mala puncin o exceso de presin ya que puede provocar hemorragias, hematomas y dolor en la zona de puncin.
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3. Evitar la permanencia prolongada de agujas dentro de las venas, ya que en ocasiones puede provocar flebitis. 4. En el momento de la puncin asegurarse que la aguja penetre en la luz del vaso, para evitar la formacin de hematomas. 5. Si por algn motivo la extraccin de sangre se realiza en vena femoral, se debe tener la precaucin que la aguja no penetre demasiado para evitar lesin vascular. 1.2.4 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE AMBOS MTODOS.
El mtodo de extraccin por sistema Vacutainer no requiere tanta preparacin. Se pueden obtener varias muestras en una sola puncin, en cambio con jeringa slo se obtiene el volumen indicando en sta. En el sistema Vacutainer existe una gran variedad de tubos tanto en volumen como en el tipo de anticoagulante que contienen, adems slo se extrae la cantidad exacta de sangre con relacin a la cantidad de anticoagulante. TIPO DE TUBO Tapn morado Tapn verde Tapn gris Tapn azul Tapn rojo
ANTICUAGULANTE EDTA Heparina Oxalato de litio, de potasio y sodio. Citrato de sodio. Sin anticoagulante.
PRCTICA No. 2 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA OBJETIVO: El alumno conocer los sistemas de control de calidad interno y externo que se utilizan en el laboratorio hematolgico para garantizar al paciente resultados precisos y exactos. La citometra hemtica, es sin duda uno de los estudios de laboratorio ms solicitados y la interpretacin correcta supone el anlisis exacto, preciso y confiable de cada uno de los parmetros que se informan. Sin embargo, a pesar de realizar cuidadosamente las determinaciones analticas, es habitual que se produzcan pequeos errores durante el desarrollo de las tcnicas, siendo imposible reproducir exactamente mediciones sucesivas de una misma muestra an contando con tecnologa de punta. De ah que sea necesario contar con sistemas de control de calidad interno y externo que garantice a su vez el control de las variables que pueden ser causa de error durante el trabajo diario de laboratorio. Si consideramos el trabajo de laboratorio como un proceso continuo desde la recepcin del paciente hasta la emisin de resultados, podemos dividir el trabajo de laboratorio en tres grandes fases: 1. Pre-analtica, 2.Analtica y 3. Post-analtica, en las cuales se pueden estar introduciendo errores que deben ser detectados por nuestro sistema de control de calidad para realizar las acciones correctivas necesarias. Los errores que se pueden presentar en el trabajo diario de laboratorio son: Burdos.- este tipo de error solo se presenta por descuido del personal de laboratorio, ya que como su nombre lo dice son errores muy graves que no se pueden detectar por ningn sistema de control de calidad. Por ejemplo cambio de una muestra por otra, deun reactivo por otro, de una cantidad por otra, etc. Sistemticos.- este tipo de error es el que produce dentro del sistema o mtodo de prueba, afectando gravemente la precisin de nuestros resultados y se presentan como consecuencia de procedimientos de calibracin incorrecta, funcionamiento defectuoso o falta de precisin de alguna parte del proceso. stos a su vez pueden ser constantes o proporcionales. Aleatorios.- este tipo de error se produce como su nombre lo indica sin prediccin ni regularidad, afectando gravemente la exactitud de nuestros resultados As pues, el control estadstico de calidad tiene como finalidad monitorear en forma continua mediante tcnicas estadsticas, la estabilidad del proceso, y mediante los grficos de control de este anlisis detectar en forma visual la variabilidad de nuestras mediciones, las cuales probablemente se pueden atribuir a alguna causa especfica que se podr investigar y corregir. CONTROL DE CALIDAD INTERNO Los programas de control de calidad interno comprende el anlisis de muestras de control junto con las muestras de pacientes y la evaluacin estadstica de los resultados para determinar la aceptabilidad de la corrida analtica. Con ste trabajo se evala y controlan la
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precisin y el sesgo debido al anlisis de un mtodo de prueba, pero no la exactitud. Una muestra control es una muestra especial insertada en el proceso de comprobacin y tratada como si fuera la de un paciente. Debe tener concentraciones apropiadas en niveles significativos, para que el mdico pueda utilizarlos para tomar decisiones acerca del tratamiento. Debe hacerse una distincin entre los controles y los calibradores o los estndares, los dos ltimos se utilizan para ajustar la instrumentacin o definir una curva estndar para el anlisis. Adems de tener un valor asignado con precisin que ya se prob segn un mtodo de referencia, el calibrador debe tener las mismas caractersticas que el mtodo control. Los materiales de calibracin y control no son intercambiables. El control debe ser independiente por completo del proceso de calibracin para poder detectar errores sistemticos causados por el deterioro del calibrador o un cambio en el proceso analtico. Las propiedades de un material de control ideal para hematologa, segn Bachner son las siguientes: Econmica Estabilidad prolongada Probados directamente Que se suspenda con facilidad y no se aglutine Caractersticas de flujo similar a la de la sangre Proporciones pticas y elctricas similares a las de la sangre Tamao y forma de las partculas similares a los de la sangre Evaluable por mtodos independientes
Sin embargo, la mayora de los productos de control para hematologa disponibles en el comercio no son muy buenos, pero tienen varias ventajas sobre las muestras de pacientes conservadas. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO. Con un programa de control de calidad externo puede evaluarse la exactitud de un procedimiento, as como el rendimiento de cada laboratorio o participante sobre una muestra idntica o compararlo con el rendimiento de laboratorios con mtodos iguales o similares. Estos programas de control obligatorios pueden ser inspecciones estatales o nacionales. Se considera que la media del grupo o el resultado consensuado del grupo es el valor verdadero o exacto. As, el rendimiento del laboratorio se evala por la proximidad de sus resultados en comparacin con los de la opinin promedio del grupo.
CAPACITACIN CONTINUA. Un laboratorio de hematologa que pretenda tener un nivel elevado constante, deber contar con un programa activo de capacitacin continua para su personal. Es de suma importancia programar talleres sobre identificacin celular en sangre perifrica, lecturas y seminarios de citogramas e histogramas de recuento diferencial automatizado y su correlacin con las anormalidades que puedan hallarse en los extendidos de sangre perifrica, solo as podr detectarse variables espurias relacionadas con la muestra que pueden producir resultados inexactos en los valores obtenidos en hematologa automatizada. El contar con profesionales clnicos bien capacitados y concientes son la mejor forma de prevenir errores en el laboratorio de hematologa. Debe disearse un plan que identifique los aspectos necesarios para garantizar la calidad, junto con los mecanismos y las personas que los evalen e informen. Las caractersticas generales de cualquier plan deben incluir las metas, los objetivos, las fuentes de autoridad, la definicin del alcance de servicios, la seleccin de temas, un calendario de actividades supervisado, las acciones correctivas, la evaluacin peridica y los mtodos de comunicacin. El objetivo de la garanta de calidad del laboratorio es verificar que la calidad de los servicios contribuya con resultados confiables, exactos y precisos que coadyuven a la prestacin global de atencin mdica de excelencia. Esto implica, que el laboratorio deber supervisar todos los aspectos de la atencin, desde la solicitud de las pruebas hasta el uso de los resultados de la prueba
PRCTICA No. 3 DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG, CUENTA DE ERITROCITOS E NDICES ERITROCITARIOS OBJETIVO: El alumno conocer y realizar los mtodos bsicos de la frmula roja para aprender a calcular los ndices eritrocitarios. 1. DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA 1.1 EL MTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA. En la Citometra hemtica una de las determinaciones es la hemoglobina la cual se expresa en g/dl. El mtodo de la Cianometahemoglobina es el ms empleado, debido a que es colorimtrico, es barato y permite medir todas las hemoglobinas presentes en la sangre (HbO2, Hb-CO2, Hb-H a excepcin de la Hb-S). FUNDAMENTO. Para convertir la Hb-O2 en Hb-CN se utiliza el Reactivo de Drabkin, el cual contiene ferricianuro de potasio K3Fe(CN)6 que convierte el Fe++ en Fe+++ convirtindose en metahemoglobina. Luego el KCN del mismo reactivo se combina para formar la Cianometahemoglobina, cuyo pico mximo de absorcin es de 540nm con un rango de 530 a 550 nm. MATERIAL 2 Tubos de ensayo de 13x100 mm por equipo 1 Pipeta de Salh por equipo 2 Pipeta de 5 ml por equipo 1 Micropipeteador o boquilla por equipo. 1 Perilla por equipo. 1 Espectrofotmetro por seccin. REACTIVOS: 10ml de reactivo de Drabkin por equipo PROCEDIMIENTO: 1) Se marcan 2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y se colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno. 2) Con la pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20l) de sangre limpiando perfectamente la pipeta por fuera con un segmento de papel desechable humedecido con solucin salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiracin y expulsin del reactivo dentro de la misma. 3) Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos. Pasar a las celdas. 4) Ajustar el espectrofotmetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo (B) a 540 nm. y se lee la absorbancia del tubo problema. 5) Calcular la concentracin de la Hemoglobina, a partir de la Ley de Beer o bien extrapolando en la Curva de calibracin.
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Ley de Beer [m] =
A= a.b.c. Abs m [St] Abs St [m] = concentracin de la muestra Abs m = Absorbancia de la muestra c St = concentracin del estandard Abs St = Absorbancia del estndar
CURVA DE CALIBRACIN. La curva de calibracin se realiza de la siguiente manera: a) Marca 5 tubos de ensaye de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl b) Pipetear con precisin, de la solucin valorada de cianometahemoglobina (St) de concentracin de 20 g/dl y del Reactivo de Drabkin, en cada uno de los tubos correspondientes y mezclar bien.
CONCENTRACIN HEMOGLOBINA Estndar de Cianometahemoglobina 0.0 ml 1.25 ml 2.5 ml 3.75 ml 5.0 ml B 5 10 15 20 g/dl
Reactivo de Drabkin
5.0 ml
3.75 ml
2,5 ml
1.25 ml
0.0 ml
c) Medir la absorbancia de cada dilucin en el espectrofotmetro a 540 nm, contra el blanco (B). d) Graficar en papel milimtrico, en las ordenadas (Y) las absorbancias y en las abscisas (X) las concentraciones. e) Trazar una lnea perpendicular que parta del vrtice (O) y toque el mayor nmero de puntos. f) Extrapola las absorbancias de las muestras problema. PRECAUCIONES. 1. Se debe de utilizar guantes para la proteccin del estudiante. 2. El reactivo de Drabkin contiene cianuro, es necesario emplear la perilla auxiliar, prohibido pipetear con la boca. 3. Es muy importante que las mediciones de las soluciones sean exactas, eso favorecer que la lnea perpendicular pase por todos los puntos de interseccin. 4. Verificar antes de iniciar, que el espectrofotmetro est prendido, se encuentre ajustado a CERO de absorbancia en la longitud de onda de 540 nm.
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VENTAJAS. 1. El mtodo de Cianometahemoglobina posee ciertas ventajas, ya que la mayora de las formas de hemoglobina que se puedan encontrar en la sangre (a excepcin de Hb S) se convierten a cianometahemoglobina con la adicin del reactivo de Drabkin. 2. La mxima absorcin de la cianometahemoglobina a 540 nm, permite la utilizacin de fotmetros con rangos de lectura cortos. DESVENTAJAS. 1. La nica desventaja es que se trabaja con pequeos volmenes de sangre (20 l) por lo que aumenta la probabilidad de error. VALORES DE REFERENCIA. HOMBRES 15 a 20 g/dl MUJERES 12.5 a 16.5 g/dl 9.3 a 12.4 mmol/l 7.5 a 10.33 mmol/l
2. MTODO DE WINTROBE PARA SEDIMENTACIN GLOBULAR Esta sencilla prueba se emplea universalmente como un indicador de la presencia de enfermedades activas, ya que permite conocer las caractersticas fsicas del ambiente en el que se encuentran los eritrocitos. FUNDAMENTO: Consiste en dejar que la sangre sedimente por la accin de la gravedad formando un paquete ms o menos compacto separado del plasma, ello depende de varios factores como son: a. Factores plasmticos: En donde los niveles elevados en la concentracin de fibringeno y/o de globulinas originan la disminucin del potencial Z de los eritrocitos, favoreciendo la formacin del fenmeno de Rouleaux. b. Factores eritrocitarios: Cuando aumenta tamao de los eritrocitos (macrocitos), se sedimentan ms rpido que los de tamao normal (normocitos) o los de menor tamao (microcitos). c. En los pacientes con anemia se disminuye la relacin eritrocitos/plasma, lo que favorece el apilamiento de los eritrocitos y el aumento de la VSG. MATERIAL. 1 Pipeta Pasteur por equipo 1 Tubo de Wintrobe por equipo 1 Soporte para tubos de Wintrobe por seccin PROCEDIMIENTO. 1. Mezclar bien el tubo que contiene la sangre. 2. Llenar la pipeta Pasteur de sangre, despus introducir la punta hasta el fondo del tubo de Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la formacin de burbujas, hasta llegar a la marca de 0.
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3. Colocar el tubo verticalmente en la gradilla (fijarse que este nivelada) durante una hora. 4. Leer la altura de la columna de plasma que aparece en la parte superior, en la escala que va del 0 al 10 cada raya equivale a un mm y se reporta en mm/hora. PRECAUCIONES. a) El tubo de Wintrobe deber llenarse desde el fondo hasta la marca cero, evitando la formacin de burbujas. b) Durante el proceso de reposo deber verificarse que se encuentre exactamente vertical, de lo contrario el valor determinado ser errneo. c) Verificar que el reposo del tubo de Wintrobe este exento de vibraciones. d) La sangre debe de estar perfectamente mezclada para evitar un cambio en la relacin, eritrocitos-plasma. VENTAJAS. a) Pequea cantidad de muestra. b) Es sencillo. c) Puede calcularse el valor del hematocrito con la misma preparacin despus de haber determinado la velocidad de sedimentacin globular. (VSG). DESVENTAJAS. Se altera fcilmente con movimientos, vibraciones y sangres hemolizadas. VALORES DE REFERENCIA. HOMBRES 0 a 7 mm/hr. MUJERES 0 a 15 mm/hr. 3. DETERMINACION DE HEMATOCRITO. El hematocrito es un parmetro indispensable para poder calcular los ndices eritrocitarios y se define como el volumen que representa el paquete globular en el total del volumen sanguneo. El hematocrito en porcentaje (%) representa aproximadamente tres veces el valor de la concentracin de hemoglobina y su valor ser siempre fraccionario, es decir menor a uno (en el sistema internacional de unidades). Para reportar dicho valor se har como porcentaje o como fraccin celular, para su determinacin se utiliza el mtodo Wintrobe (macro mtodo) o bien el micro mtodo (en un tubo capilar) que posee menos errores inherentes. 3.1 MACROHEMATOCRITO. MATERIAL. 1 Pipeta Pasteur por equipo 1 Tubo de Wintrobe por equipo 1 Centrifuga por seccin PROCEDIMIENTO.
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Despus de haber determinado la VSG con el tubo Wintrobe. a) Calcule el hematocrito, centrifugando el tubo a 3500 r.p.m. durante 30 minutos. En caso de no contar con esta preparacin efectuar el procedimiento (2). Procedimiento (2). a) Con una pipeta Pasteur llnese de sangre el tubo Wintrobe hasta la marca de 0 cero. b) Centrifguese el tubo A 3500 r.p.m. durante 30 minutos. LECTURA: En la graduacin en la que el 0 cero est en el fondo del tubo, lase a que nivel est el lmite superior de la columna roja (la sangre se ha separado en cuatro capas: roja formada por los eritrocitos, blanca griscea por leucocitos, amarillenta cremoso por plaquetas y la ltima lquida formada por plasma habitualmente de color amarillento.). 3.1 MICROHEMATOCRITO. MATERIAL. 2 Capilares por equipo 1 Mechero de Buncen por seccin 1 Lector para hematocrito por seccin 1 Micro centrfuga por seccin PROCEDIMIENTO. a) Llenar con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres cuartas partes del total de su longitud. b) Cierre el extremo del tubo capilar distante de la sangre acercndolo a la flama del mechero y rotndolo, tambin se puede sellar con plastilina (cercirese de que el cierre de dicho extremo haya sido completo). c) Centrifguese en la centrfuga para microhematocrito durante 5 min. d) Leer en el lector del microhematocrito. PRECAUCIONES. a) En ambos mtodos se debe de evitar la hemoconcentracin de la muestra durante la obtencin. Si el hematocrito excede de 50 % centrifugar nuevamente el capilar o tubo utilizado Para la determinacin, durante 5 minutos. b) En el caso del micro mtodo si el sellado es con mechero cudese que la sangre no llegue al extremo calentado del tubo ni quede al nivel de la flama. c) En el caso del macro mtodo el tubo de Wintrobe se debe aforar exactamente a cero y no deben de quedar burbujas de aire entre columna de sangre o en el fondo. e) se debe de mezclar la sangre perfectamente antes de llenar los tubos de Wintrobe o capilares. VENTAJAS Y DESVENTAJAS. a) El micro mtodo es el ms empleado debido a que requiere menos tiempo de centrifugacin, y cantidad de muestra, se puede utilizar sangre capilar o venosa en comparacin con el macro mtodo.
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b) Se prefiere el micro mtodo debido a que existen diferentes marcar comerciales de tubos de Wintrobe para el macro mtodo con lo que se obtienen diferentes resultados del hematocrito. c) La cantidad de plasma atrapado es mayor en el macro mtodo dando valores ms elevados. VALOR DE REFERENCIA. HOMBRES 46 a 56 % MUJERES 39 a 50 %
100%
0% Lector de microhematocrito
4. RECUENTO CELULAR ERITROCITARIO INTRODUCCIN. El recuento de glbulos en la sangre es una prctica habitual en el laboratorio clnico, en el cual se determina el nmero de eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm3 de sangre, con la ayuda de la cmara de Neubauer o hemocitmetro. La cmara de Neubauer o hemocitmetro es un grueso portaobjetos de vidrio, en el centro de su superficie se encuentra un cuadrado de 3 mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada uno de 1 mm, los cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento de leucocitos y se encuentran divididos por 16 cuadros ms pequeos. El cuadro central esta dividido en 25 cuadros los marcados con la letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos y los marcados con P para plaquetas. Fig. (1) Cada uno de estos cuadros se divide en 16 cuadros ms pequeos dando un total de 400 en el cuadro central. Fig.(2) rea total = 9 mm2. rea de cada cuadro marcado como L = 1 mm2. rea de cada cuadro marcado como e y P = 0.04 mm2 rea total de los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm2. rea de cada cuadrito marcado como e 0 0.0025 mm2.
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L
E P 8 mm P E E P E P P E
1 mm
L
e
2mm
L
0.05mm.
Fig. (2) Amplificacin de un cuadro de eritrocitos.
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CUIDADOS DE LA CMARA. a. Debern utilizarse cubreobjetos especiales ya que los convencionales poseen superficie irregular. a. Se debe lavar la cmara con agua tibia o un pao suave empapado en alcohol. b. No se deber tocar el rayado de la cmara con los dedos ya que manchan la cmara y puede provocar errores de apreciacin c. Evitar usar lienzos rgidos que puedan araar el rayado sensible de la cmara. Tomarla nicamente por sus bordes MTODO DE CONTEO. El conteo se inicia por la parte superior de izquierda a derecha y luego de derecha a izquierda sucesivamente, teniendo la precaucin de contar las clulas que tocan una de cualquiera de las tres lneas como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaucin de no contar una clula dos veces. Figura (3)
0.05 mm
.2 mm
Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de eritrocitos. MATERIAL. 1 Pipeta de Thoma para glbulos rojos por equipo 1 Cmara de Neubauer o Hemacitmetro por equipo 1 Boquilla o micropipeteador por equipo Reactivos: 1 frasco con 100ml. de Lquido diluyente de Gower para eritrocitos por seccin PROCEDIMIENTO. a) Con la ayuda de la boquilla o el micropipeteador, se aspira sangre homogeneizada con la pipeta de Thoma para eritrocitos hasta la marca de 0.5 b) Aspirar luego el lquido diluyente de eritrocitos hasta la marca 101.
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c) Se debe de evitar la formacin de burbujas. Agitar la pipeta suavemente para mezclar o bien mezcle por medio de agitador electrnico si es que cuenta con l. d) Eliminar de 4-5 gotas de la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la cmara de Neubauer previamente preparada. e) Dejarla reposar por dos minutos, colocarla bajo el objetivo seco fuerte (40x) y contar los eritrocitos presentes en los cinco cuadros marcados con la letra E, utilizando el mtodo sealado. f) Una vez concluido el conteo, lavar la cmara con el agua de la llave, agua destilada y finalmente con alcohol. Secar con un pao limpio, suavemente y utilizar jabn si es necesario. NOTA: Llenar ambos lados de la cmara de Neubauer, sacar un promedio de los conteos y calcular el nmero de eritrocitos 7 mm3 multiplicando por el factor de 10000 mm3 Reportar el nmero de eritrocitos por milmetro cbico de sangre. CLCULOS: El factor 10,000 esta dado por: - 1.5 que corresponde a la fraccin de la cmara en la que se cuentan los eritrocitos (los 25 cuadros centrales). - 1/10 es la profundidad de la cmara de Neubauer. 1/200 es la dilucin realizada a la sangre con la pipeta de Thoma. ( 1/5 ) ( 1/10 ) ! 1/200 ) = ( 1/19,000 mm3 ) Esto ser valido en el caso de que la dilucin inicial haya sido 1:200 y se cuenten los cinco cuadros marcados con la letra E. CONCENTRACIONES. El lquido diluyente de Gower para eritrocitos es isotnico y acta como fijador para preservar la forma celular. VALORES DE REFERENCIA HOMBRES: 5.5 a 6.3 Millones / mm MUJERES: 4.1 a 5.7 Millones / mm3 1 mm3 = 1 l
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o l o l
5.5 a 6.3 x 1012 /1 4.1 a 5.7 x 1012 /1
EN EL S.I
5. VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO. Este parmetro nos indica el tamao promedio de los eritrocitos en un paciente y se calcula de la siguiente manera.
Hematocrito (Hto) VCM = ________________________________ x 10 = u3 # de eritrocitos / ul
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La obtencin de un VCM inferior a los valores de referencia, indicar la presencia de eritrocitos pequeos o microcticos. La obtencin de un VCM que cae entre los valores de referencia, indicar que se tienen eritrocitos de tamao normal o normocitos. La obtencin de un VCM mayor a los valores de referencia, indicar la presencia de eritrocitos grandes o macrocitos. VALORES DE REFERENCIA. HOMBRES MUJERES 84 a 95 u3 79 a 103 u3 En el S. I. 84 a 95 f1 78 a 103 f1
6. CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR. Este ndice eritrocitario da una idea de la coloracin de los eritrocitos en base a su contenido de hemoglobina, ya que determina la concentracin promedio de hemoglobina en todos lo eritrocitos. Su determinacin se realiza de la siguiente manera: CMHC =
___________________________________________
Hemoglobina ( g/100 ml) Hematocrito (%)
x 100 = g/dl
La obtencin de una concentracin media de hemoglobina corpuscular (CMHC) menor a los valores de referencia indicar la presencia de eritrocitos con un bajo contenido de hemoglobina o hipocrmicos. La obtencin de un valor mayor o menor a los valores de referencia, indicar la presencia de eritrocitos hipercrmicos. Sin embargo debe de usarse rara vez este trmino, ya que el nico eritrocito hipercrmico es el esferocito. Un valor de CMHC que cae entre los valores de referencia indicar la presencia de eritrocitos con contenido normal de hemoglobina o normocrmicos. VALORES DE REFERENCIA. HOMBRES. 32 a 34 g/dl MUJERES. 30 a 32 g/dl En el S. I. 9.85 a 21.10 m mol/1 18.61 a 21.10 m mol/1
7. HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA ( CMH ). Este ltimo ndice eritrocitario nos indica el promedio de hemoglobina en cada eritrocito y se calcula de la manera siguiente. Hemoglobina ( g/dl )
CMH =
_______________________________________
x 10 = pg
# de eritrocitos / ul Es importante comprender que las clulas microcticas no son hipocrmicas en forma obligada, y los macrocitos no son por lo general hipercrmicos, esto hace que la
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hemoglobina corpuscular media (CMH) sea demasiado intil, ya que no toma en cuenta el tamao de la clulaVALORES DE REFERENCIA. EN HOMBRES Y MUJERES 27 a 31 pg (tambin en el S.I)
8. FORMA DE REPORTAR LOS RESULTADOS. El diagnstico de una anemia est basado en el historial clnico del paciente, el examen fsico y la investigacin por parte del laboratorio. El mdico examinar el informe de los resultados proporcionados por el laboratorio, aqu el Qumico toma una gran importancia, ya que en l cae la responsabilidad de ayudar a diagnosticar trastornos hematolgicos en un paciente. Los datos ms importantes que debe reportar el laboratorio en la biometra hemtica son los siguientes: FECHA:___________________ PACIENTE:_______________________________________________________________ DOCTOR(A):______________________________________________________________ EXAMEN:________________________________________________________________ VALORES DE REFERENCIA RESULTADO ERITROCITOS (millones) m/ml HEMOGLOBINA (g/dL) HEMATOCRITO (%) HCM (pg) CmHb (%) VCM mm 3 VGM (fl) VSG (mm/hr) HOMBRES 5.5 - 6.3 15 - 20 46 - 56 27 - 34 32- 34 84- 95 0- 7 MUJERES. 4.1 - 5.7 12.5 - 16.5 39 - 50 27 - 34 30 - 34 78 - 103 0 - 13
VALORES DE REFERENCIA RESULTADO RETICULOCITOS (%) PLAQUETAS (x mm 3 ) ml LEUCOCITOS (x mm 3 ) ml HOMBRES MUJERES. 0.5 - 1.5 0.5- 1.5 150,000 - 450,000 4,000 - 12000
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FORMULA DIFERENCIAL MIELOCITOS METAMIELOCITOS EN BAMDA SEGMENTADOS NEUTROFILLOS EOSINOFILOS BASOFILOS LINFOCITOS MONOCITOS OBSERVACIONES: Anormalidades de eritrocitos: Anormalidades de leucocitos: Anormalidades de plaquetas:
CIFRAS RELATIVAS (%) 0 02 0 11 40 74 40 85 07 03 12 46 1 13
CIFRAS ABSOLUTAS (Clulas/ L) 0 10-500 100-800 2 000-6 000 1 500-7 000 100 -200 10-20 1 000 -4 200 100-800
ATENTAMENTE _________________________________
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PRCTICA No. 4 CUENTA DE LEUCOCITOS Y REALIZACIN DE EXTENDIDO SANGUNEO (TINCIN DE WRIGHT Y GIEMSA) CON VALORES ABSOLUTOS Y RELATIVOS. OBJETIVO: El alumno realizar la cuenta de leucocitos y un extendido de sangre perifrica para identificar la morfologa de cada una de las clulas y aprender los fundamentos de las tinciones y a obtener valores absolutos de cada uno d los leucocitos. 1. CUENTA DE LEUCOCITOS INTRODUCCIN. El recuento de glbulos en la sangre es una prctica habitual en el laboratorio clnico, en el cual se determina el nmero de eritrocitos, leucocitos y plaquetas por mm3 de sangre, con la ayuda de la cmara de Neubauer o hemacitmetro. La cmara de Neubauer o hemacitmetro es un grueso portaobjetos de vidrio, en el centro de su superficie se encuentra un cuadrado de 3 mm de lado dividido en 9 cuadros grandes cada uno de 1 mm, los cuadros marcados con la letra L son utilizados para el recuento de leucocitos y se encuentran divididos por 16 cuadros ms pequeos. El cuadro central esta dividido en 25 cuadros los marcados con la letra E son utilizados para el recuento de eritrocitos y los marcados con P para plaquetas. Fig. (1) Cada uno de estos cuadros se divide en 16 cuadros ms pequeos dando un total de 400 en el cuadro central. Fig.(2) rea total = 9 mm2. rea de cada cuadro marcado como L = 1 mm2. rea de cada cuadro marcado como e y P = 0.04 mm2 rea total de los cinco cuadros centrales E= 0.2 mm2. rea de cada cuadrito marcado como e 0 0.0025 mm2. CUIDADOS DE LA CMARA. 2.1. Debern utilizarse cubreobjetos especiales ya que los convencionales poseen superficie irregular. 2.2 Se debe lavar la cmara con agua tibia o un pao suave empapado en alcohol. 2.3 No se deber tocar el rayado de la cmara con los dedos ya que manchan la cmara y puede provocar errores de apreciacin 2.4 Evitar usar lienzos rgidos que puedan araar el rayado sensible de la cmara. Tomarla nicamente por sus bordes MTODO DE CONTEO. El conteo se inicia por la parte superior de izquierda a derecha y luego de derecha a izquierda sucesivamente, teniendo la precaucin de contar las clulas que tocan una de cualquiera de las tres lnea como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaucin de no contar una clula dos veces. Figura (3)
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L
E P 8 mm P E E P E P P E
1 mm
L
.2 mm
L
0.05 mm
Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de leucocitos
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MATERIAL: 1 Pipeta de Thoma para glbulos blancos por equipo 1 Cmara de Neubauer o hemacitmetro por equipo 1 Boquilla o micropipeteador por equipo 1 Microscopio por equipo Reactivos: Diluyente para leucocitos (TURK) PROCEDIMIENTO. a) Llenar de sangre homogenizada la pipeta de leucocitos hasta la marca 0.5 aforando exactamente. b) Limpiar con papel absorbente el exterior de la pipeta. c) Aspirar lquido diluyente de leucocitos hasta la marca 11. d) Tapar los extremos de la pipeta y agitar manualmente. La agitacin podr hacerse con el agitador mecnico de pipetas si se cuenta con el. e) Limpiar la cmara, el cubreobjetos y colocar ste sobre aquella. f) Eliminar las cinco gotas de la pipeta y con la siguiente llenar por capilaridad la cmara. g) Despus de dos minutos observar a seco dbil, 1/10x) localizar el rea correspondiente para contar leucocitos (cuadros L ) , y proceder a contarlos. h) El nmero de leucocitos contados en los cuadros grandes se multiplican por el factor 50, donde el nmero de leucocitos por milmetro cbico de sangre. i) Si existe leucopenia es decir un nmero de leucocitos inferior a 2000, repetir la cuenta de acuerdo con las siguientes indicaciones. Llenar la pipeta con sangre hasta la marca 1 y aforar hasta 11 con el diluyente, llenar la cmara y contar nueve cuadros, el resultado se multiplica por 11.1; si las cifras son de 2000 a 4000 se hace una dilucin 1:20, se cuentan nueve cuadros y se multiplica por 22.2 Si hay leucocitosis (ms de 50000 leucocitos/ mm3 ) se emplean pipetas de Thoma para eritrocitos, las diluciones son de 1/100 a 1:200. Con dilucin 1:100, los factores de multiplicacin seran 1000, 500, 333, 250 y 111, si se cuentan 1,2,3,4,y 9 cuadros de la cmara. Con dilucin 1:200, los factores de multiplicacin sern 2000, 1000,500, 222 si se cuentan 1,2,4, y 9 cuadros. CLCULOS. Para conocer el nmero de leucocitos por mm3 de sangre se aplica la siguiente frmula. Nmero de leucocitos / mm =
3 ______________________________________________
Nmero de clulas contadas. Volumen
Volumen = Dilucin x profundidad de la cmara x el rea contada. Las diluciones para leucocitos son 1:10, 1:20
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La profundidad de la cmara es de 1/10 mm El rea contada en leucocitos es: 4 mm2 ( 4 cuadrados contados ) Por ejemplo: Leucocitos contados 500 Cuadros L utilizados 4 Dilucin 1:20 Sustituyendo la formula: V = ( 1/20 ) ( 1:10 ) ( 4 ) = 4/200 = 1/50 mm3
Leucocitos / mm =
Nmero de clulas contadas. Volumen
___________________________________
_______ _______
500 1
50 mm3 = = En leucocitosis: Dilucin realizada Profundidad de la cmara Cuadros utilizados Leucocitos contados 1/100 1/10 2 80 500 x 50 mm3 25,000 / mm3
Volumen = Dilucin x profundidad x rea contada. Volumen = ( 1/100 ) ( 1/10) ( 2 ) = 2/1000 Nmero de Leucocitos/mm3 = 80
_________________________________
Nmero de clulas contadas Volumen
______
_______________
80 x 1000 2
2 ____ 1000 =
___________
80000 2
= 40000/ mm3
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CONSIDERACIONES. El lquido diluyente de leucocitos lisa eritrocitos y es isotnica para los leucocitos. VALORES DE REFERENCIA. EN HOMBRES Y MUJERES: EN EL SISTEMA INTERNACIONAL: 2. TINCIONES HEMATOLGICAS 2.1. TINCION DE WRIGHT. El recuento diferencial es una parte importante de la valoracin hematolgica y consiste en reconocer las distintas variedades de glbulos blancos y las posibles anormalidades celulares en un frotis de sangre teido con el colorante de Wright. Debido a que el colorante de Wright se trata de una solucin de eosina y una mezcla de tiacinas que incluyen el azul de metileno, el citoplasma de las clulas se tien con el colorante cido (eosina) ya que en l, se encuentran los componentes bsicos de la clula, por otro lado, el ncleo de la clula se tie con los colorantes bsicos (azul de metileno) ya que en el se encuentran los componentes cidos de la clula. MATERIAL. 1Puente de tincin por seccin 2 Portaobjetos por equipo 1 Microscopio por equipo 1 Contador de clulas por seccin Agua destilada. Aceite de inmersin. REACTIVOS. Colorante de Wright Buffer pH = 7.0 Para el recuento diferencial el frotis no deber ser tan fino no tan grueso de tal manera que las clulas estn juntas pero no apiladas. La extensin que se prepare deber secarse inmediatamente. MTODOS PARA PREPARAR EXTENDIONES SANGUINEAS. 1.- Mtodo de los dos portaobjetos o de la cua. a) Colocar la gota de sangre de un tamao regular (2 a 3 mm de dimetro) aproximadamente a un centmetro del extremo de un portaobjetos. b) Tomar otro portaobjetos con el dedo ndice y pulgar de la mano derecha. c) Colocar el borde libre sobre la gota de sangre y dejar que esta se extienda a lo largo del borde libre. El segundo portaobjetos deber hacer un ngulo de 30 a 45 con el primer portaobjetos. Con movimiento suave pero firme y a velocidad constante desplazar el segundo portaobjetos a lo largo del primer portaobjetos.
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4000 - 12000 Leucocitos/ mm3 4 - 12 X 109 leucocitos/L.
Es una buena extensin, los leucocitos no estn demasiado juntos y los eritrocitos no estn apilados. El secado de la extensin debe de hacerse con movimientos laterales y verticales repetidos al aire o con un ventilador. Marcar los frotis con lpiz graso o de plomo para su correcta identificacin. 2.- Mtodo de los dos cubreobjetos. Es un mtodo que requiere mayor prctica y no es tan usual. 3.- Mtodo de centrifugacin. Es un mtodo casi automatizado, brinda mejores resultados pero debido a lo anterior no es tan utilizado comnmente. 4.- Mtodo transversal. Es el ms empleado en la actualidad y su tcnica es la siguiente:
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Se coloca una gota de sangre en el borde del portaobjetos colocado horizontalmente, y se llena por capilaridad en su borde inferior el otro portaobjetos colocado a 45 , la sangre se extiende en forma transversal hacia el otro extremo del portaobjetos, en el paso siguiente se unen ambos para que la sangre se extienda homogneamente a lo ancho de la superficie del fondo, despus se desliza el portaobjetos de arriba para retirar el exceso de sangre, quedando una pelcula delgada que se secar con movimientos vigorosos de arriba hacia abajo quedando la preparacin lista para ser teida; se contarn de 100 a 200 clulas si el nmero de leucocitos es de 2 000 - 10 000 leucocitos/mm3 , y de 200 - 400 clulas si la cifra de leucocitos/ mm3 es superior a 10 000. La lectura se har con un microscopio de luz, realizando una observacin primera a 40x para tener una panormica de la distribucin de las clulas, despus a 100x para estudiara fondo la morfologa de las clulas. FIJACIN. Es necesaria una fijacin de la extensin sangunea para evitar la prdida de muestra en el portaobjetos. Existen dos tipos de fijacin. Qumica.- sta se hace cubriendo la extensin sangunea por uno a dos minutos con metanol puro o alcohol absoluto, o bien, quince minutos en alcohol absoluto-ter 1:1, tambin se puede usar una solucin de HgCl2 al 1 % o solucin al 1 % de formalina en alcohol. Calor.- Casi no se usa debido a las alteraciones que causa en la muestra. Algunos colorantes fijan y tien a la vez como por ejemplo el colorante de Wright que contiene metanol como fijador, y existen as mismo otras soluciones fijadoras especiales. PROCEDIMIENTO a) Realice un frotis sanguneo por el mtodo transversal y se deja secar al aire sobre el puente de tincin. b) Cubra la extensin con un exceso de colorante de Wright durante 2 minutos, esto tiene como finalidad evitar la evaporacin del colorante y la formacin de precipitados. c) Transcurrido el tiempo, aada una cantidad igual de solucin amortiguadora. d) Soplar suavemente sobre la superficie de la mezcla con la finalidad de homogenizar. e) Se deja reposar exactamente 4 minutos. f) Sin tirar la mezcla, lave con agua destilada hasta que el agua que escurra no lleve colorante. g) Secar al aire y aadir una gota de aceite de inmersin para observar en el microscopio a inmersin. h) Para la frmula diferencial debe de contarse 100 clulas y deber hacerse la diferenciacin entre monocitos, linfocitos, basfilos, eosinfilos, neutrfilos, y simultneamente, ver el nmero de mielocitos, bandas, metamielocitos, y segmentados que existen entre neutrfilos, si hay otro tipo de clulas como por ejemplo blastos, debern incluirse en el total.
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CONCLUSIONES: Se deben obtener extensiones de sangre bien niveladas para un trabajo exacto. Los portaobjetos deben estar perfectamente limpios y sin grasa para que no se deformen las clulas. Si el frotis se realiza del pulpejo del dedo, su elaboracin debe ser rpida antes de que inicie la coagulacin y sin exprimir el dedo para evitar la hemodilucin. En casos graves de anemia hay que preparar extensiones delgadas y secarlas al momento. El borde del portaobjetos extensor debe de ser liso para evitar zonas con abundantes leucocitos. METODO DE CONTEO: El recuento diferencial se realiza recorriendo el largo de la preparacin de izquierda a derecha hasta contar 100 clulas, identificando cada una de ellas, si no basta un solo recorrido, se elige un nuevo campo y se hace completar el nmero de clulas. (Fig. 12)
Fig. ( 12 )
2.2 TINCION MAY GRNWALD-GIEMSA: Es una tincin que tambin se usa de rutina en muchos laboratorios, pero es un poco ms tardada, sin embargo mediante esta tincin se pueden diferenciar mucho mejor las estructuras intercelulares. Contiene azur II-eosina y eosinato azul de metileno aunque actualmente el colorante se vende por separado el mercado por lo que seguiremos la siguiente tcnica. PROCEDIMIENTO: a) Cubrir la extensin con 10 gotas a 15 gotas de May Grnwald tres minutos. b) Aadir la misma cantidad de agua destilada procurando que se mezclen por un minuto. c) Escurrir el lquido y " sin previo lavado " aadir la solucin diluida de Giemsa recin preparada dejndola actuar por 30 min. d) Lavar, secar y observar a inmersin.
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2.4 TINCION DE AZUL DE PRUSIA: Se utiliza para la identificacin de grnulos de hierro (Fe) en el citoplasma de los eritrocitos que se presentan en casos de ciertas anemias refractarias, despus de una esplenectoma u otros casos. Los grnulos de hierro no estn unidos al grupo heme sino a la apoferritina (protena) constituyendo a la ferritina (en forma de grnulos). En mdula sea se presentan con mayor frecuencia en el caso de los normoblastos aunque recordemos que su presencia es normal debido a la sntesis de la hemoglobina. Estos grnulos no se observan en casos de anemias por deficiencia de hierro. Los grnulos aparecen de color azul. PROCEDIMIENTO PARA EXTENSIONES DE SANGRE PERIFRICA: a ) Preparar una extensin sangunea fina, secarla al aire. b) Fijar por 5 a 10 min. en metanol absoluto, secar. c) Introducir la extensin en una mezcla de K3 Fe (CN)6 -HCl 1:1 por 10 minutos. d) Lavar con agua destilada. e) Contrastar con eosina acuosa al 0.1 % por uno a dos minutos o solucin de safranina, f) Lavar, secar al aire y observar a inmersin. PROCEDIMIENTO PARA EXTENSIONES DE MDULA SEA: 1. Aspirar 3.0 ml de una solucin e EDTA (1 mg/ml) en una jeringa de plstico, tomar de 20 ml junto con 3.0 ml de sangre y mdula sea aspirados. 2. Depositar el contenido de la jeringa en un vidrio e reloj grande e identificar las partculas de mdula sea. 3. Extender las partculas de mdula sea. 4. Fijar la extensin en metanol por 10 min. 5. Lavar en agua destilada. 6. Contrastar con eosina acuosa al 0.1 % o solucin de safranina por uno o dos minutos. 7. Lavar con agua destilada, secar y observar a inmersin. 2. 5 FORMA DE REPORTAR.
MIELOCITOS METAMIELOCITOS. EN BANDA. SEGEMTNADO. NEUTROFILOS. EOSINOFILOS BASOFILOS. LINFOCITOS. MONOCITOS. VALOR OBTENIDO ________________ ________________ ________________ ________________ ________________ ________________ ________________ ________________ ________________ * VALOR DEW REF. (%) 0 0 0 - 11 40 - 74 40 85 0 -7 0 -3 12 - 46 1 - 13
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PRCTICA No. 5 CUENTA DE RETICULOCITOS ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTNICAS
FRAGILIDAD
OBJETIVO: El alumno aprender a realizar la cuenta de reticulocitos y su importancia en la valoracin de la eritropoyesis en la mdula sea. 1. CUENTA DE RETICULOCITOS. INTRODUCCIN: Los eritrocitos anucleados que contienen organelos y un sistema ribosmico extenso para sintetizar hemoglobina, se conocen como reticulocitos, los cuales son retenidos de dos a tres das en mdula sea y despus permanecen otro da en la circulacin perifrica, indicando la actividad eficaz de la mdula sea para producir eritrocitos. MATERIAL. 2 Tubos de ensayo por equipo 1 Bao mara por equipo 1 Termmetro por equipo Aceite de inmersin. 1 Microscopio por equipo REACTIVOS: Azul cresil brillante PROCEDIMIENTO: 1. En el tubo de ensaye colocar 2 gotas de azul de cresil brillante con dos gotas de sangre homogenizada y mezclar nuevamente. 2. Incubar la mezcla por 10 min. en el bao Mara a 37 C 3. Transcurrido el tiempo preparar una extensin por el mtodo transversal de la siguiente manera: Coloque una gota de la siguiente preparacin de 2 a 3 mm de dimetro en el borde de un portaobjetos. Coloque el otro portaobjetos sobre la gota en un ngulo de 45 y deje que se distribuya por capilaridad. Extienda la sangre en forma transversal hacia el otro extremo de portaobjetos. Una ambos portaobjetos para que la sangre se extienda homogneamente a lo ancho de la superficie. Deslice el portaobjetos de arriba para retirar el exceso de sangre quedando una pelcula delgada. Secar y observar a inmersin. 4. Los reticulocitos s observarn de color azul, con material reticular citoplasmtico de color azul intenso. 5. Contar 1000 eritrocitos y los reticulocitos que se encuentran entre ellos, o bien, contar el nmero de reticulocitos que hay en 10 campos
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CALCULOS. % de reticulocitos =
________________________________________________
Nmero de reticulocitos contados Nmero de clulas contadas.
x 100
Nmero de reticulocitos contados % de reticulocitos =
_________________________________________________
Nmero de campos recorridos (10) No. absoluto de restis. PRECAUCIONES: Agregar la cantidad de sangre y colorante indicadas para evitar dificultad al examinar las preparaciones. Asegurarse que las clulas en el frotis se encuentran distribuidas homogneamente para evitar que los campos tengan un nmero confuso de eritrocitos. No se debe de contar dos veces la misma clula. La sangre a utilizar debe mezclarse perfectamente para no alterar el resultado. VENTAJAS: Es un mtodo econmico. La preparacin del complejo RNA-colorante no requiere temperatura estrictamente controlada. El mtodo utilizado para la realizacin del frotis asegura una distribucin ms uniforme que cualquier otro mtodo. DESVENTAJAS: Debido a nmero de eritrocitos que se deben de contar el error es relativamente grande. Si no se eligen adecuadamente los campos se pueden contar un mayor o menor nmero de reticulocitos. VALOR DE REFERENCIA. HOMBRES Y MUJERES VALOR RELATIVO. 0.5 a 1.5 % EN EL S.I. 0.005 a 0.015 =
________________________
% de reticulocitos. 100
( Nmero de eritrocitos / mm3 ).
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2. FRAGILIDAD A LAS SOLUCIONES HIPOTNICAS FUNDAMENTO: Al estar los eritrocitos a concentraciones cada vez menores de sal, estos se van llenando con agua y se lisan. Eritrocitos que tengan una estructura defectuosa de su membrana, se lisaran primero o antes del testigo que tiene una estructura normal. ste anlisis es parte de un estudio para anemias hemolticas hereditarias. ESPECMEN. De 4 a 5ml de sangre con EDTA con anticoagulante al 7.5%. Debe tomarse un testigo para la buena interpretacin de los resultados. REACTIVOS Y EQUIPO: Solucin salina (cloruro de sodio) al 0.85% y 0.9%, espectrofotmetro, tubos y pipetas. TCNICA: 1. En una gradilla poner 15 tubos de 15 x 100mm. En el primero pipetear 2ml de solucin salina, en el segundo 2.5ml, aumentar 0.5ml en cada tubo, en el tubo 14 poner 8.5ml de solucin salina solamente, en el tubo 15 poner 8.5ml de solucin salina al 9.0%. 2. Completar a 8.5ml. el volumen de cada tubo con agua destilada desionizada. La concentracin final de NaCl y los volmenes se ven en la siguiente tabla: TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 SOL. SALINA (ml) 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 8.5 H2O 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0,0 CONC. NaCl (%) 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90
3. Colocar en la misma gradilla y por delante de los tubos anteriores, dos series de tubos de 15 x 100mm. Numerar los tubos del 1 al 12 y marcar T para el testigo y P para el problema.
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4. Pasar de la serie de tubos de la mezcla con agua y solucin salina, 3ml al tubo correspondiente. 5. Con una pipeta Pasteur, poner una gota de sangre en cada tubo, la sangre deber estar mezclndose continuamente antes de agregar la gota (T para testigo, P para problema). 6. Agitar cada tubo con las manos, con golpes laterales. Dejar los tubos en reposo a temperatura ambiente durante 30-60min. 7. Centrifugar los tubos a 1500rpm, durante 3 minutos, cuidando de no darle a los tubos movimientos bruscos despus de centrifugar. 8. Leer tanto en la serie testigo y en la problema, en que tubo se inicia la hemlisis (hemlisis inicial) y en cual ya no existe el botn de eritrocitos (hemlisis completa). Ver en el cuadro anterior a que concentracin de NaCl pertenece, tanto la hemlisis inicial como la completa. Ejemplo: TESTIGO PROBLEMA HEMLISIS INICIAL 0.50% 0.60% HEMLISIS FINAL 0.30% 0.45%
VALORES DE REFERENCIA: 0.45% - 0.50%
0.30% - 0.40%
Si se requiere ser ms preciso, puede leerse en el espectrofotmetro a 420nm. La absorbancia y graficar la hemlisis como en las graficas anexas. Usar solucin salina como blanco. Grfica de preferencia el porcentaje de hemlisis contra la concentracin en gramos (% de NaCl).
120 100 80 60 40 20 0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
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PRCTICA No. 6 CITOMETRA MANUAL
HEMTICA COMPLETA DE FORMA
OBJETIVO: El alumno realizar una citometra hemtica completa en forma manual e interpretar los resultados obtenidos, detectando posibles causas de error en sus resultados. REPORTE DE RESULTADOS:
FECHA: ___________________ PACIENTE: ______________________________________________________________ DOCTOR(A): _____________________________________________________________ EXAMEN: _______________________________________________________________ VALORES DE REFERENCIA RESULTADO Eritrocitos (millones) m/ml Hemoglobina (g/dL) Hematcrito (%) HCM (pg) CmHb (%) VCM mm 3 VGM (fl) VSG (mm/hr) HOMBRES 5.5 - 6.3 15 - 20 46 - 56 27 - 34 32- 34 84- 95 0- 7 MUJERES. 4.1 - 5.7 12.5 - 16.5 39 - 50 27 - 34 30 - 34 78 - 103 0 - 13
VALORES DE REFERENCIA RESULTADO Reticulocitos (%) Plaquetas (x mm 3 ) ml Leucocitos (x mm 3 ) ml HOMBRES MUJERES
0.5 - 1.5 0.5- 1.5 150,000 - 450,000 4,000 - 12000
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FORMULA DIFERENCIAL MIELOCITOS METAMIELOCITOS EN BAMDA SEGMENTADOS NEUTROFILLOS EOSINOFILOS BASOFILOS LINFOCITOS MONOCITOS FORMULA DIFERENCIAL MIELOCITOS METAMIELOCITOS EN BAMDA SEGMENTADOS NEUTROFILLOS EOSINOFILOS BASOFILOS LINFOCITOS MONOCITOS OBSERVACIONES: Anormalidades de eritrocitos: Anormalidades de leucocitos: Anormalidades de plaquetas:
RESULTADOS (%)
CIFRAS RELATIVAS (%) 0 02 0 11 40 74 40 85 07 03 12 46 1 13
RESULTADOS (Clulas/ L)
CIFRAS ABSOLUTAS (Clulas/ L) 0 10-500 100-800 2 000-6 000 1 500-7 000 100 -200 10-20 1 000 -4 200 100-800
ATENTAMENTE
_________________________________
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PRCTICA No. 7 CITOMETRA HEMTICA AUTOMATIZADA. OBJETIVO: El alumno realizar una citometra automatizados y har la interpretacin de sus resultados hemtica por mtodos
W. Coulter describi su mtodo "El instrumento emplea un sistema de medicin no ptico que provee un rango de medicin que excede las 6.000 clulas individuales por segundo con un intervalo de conteo de 15 segundos. Una suspensin de clulas sanguneas es pasada a travs de un pequeo orificio simultneamente con una corriente elctrica. Las clulas sanguneas individuales pasando a travs del orificio producen un cambio de impedancia (resistencia) en el orificio el cual est determinado por el tamao de la clula. El sistema cuenta las clulas individuales y provee distribucin de tamaos. El nmero de clulas contadas por muestra es aproximadamente 100 veces mayor que los recuentos microscpicos, reduciendo el error estadstico aproximadamente 10 veces"(1)
El Coulter Counter Model S fue el primer instrumento que de manera automtica proces datos multiparamtricos en sangre.
El nmero de pulsos elctricos indica la cantidad de partculas que pasan a travs de la apertura y el tamao de los pulsos es proporcional al volumen de las partculas(2,3,4,5) Los contadores modernos an siguen usando este mtodo, el cual es el mtodo de referencia para recuentos de clulas
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Los contadores COULTER realizan este recuento por triplicado para eritrocitos, leucocitos y plaquetas Este sistema es actualmente el mtodo de referencia para el recuento de clulas y es usado por todos los fabricantes de contadores celulares
Algunas limitaciones del Mtodo Las limitaciones de este mtodo estn relacionadas con los tipos de partculas a medir, como condicin bsica las partculas en estudio deben ser menos conductoras de electricidad que el medio en que estn disueltas, el tamao de las partculas a medir debe estar entre el 2 y el 60 % de el dimetro de la apertura Como se diferencian los Eritrocitos, Leucocitos y Plaquetas? Los sistemas COULTER poseen 2 baos, uno de eritrocitos y otro de leucocitos, en el bao de eritrocitos se encuentra una apertura de 50m y en el de los leucocitos otra de 100m En cada apertura se realizan 3 recuentos de 4 segundos y se obtiene el promedio (en el caso de STKS y GEN-S, estos poseen 3 aperturas de eritrocitos y 3 de leucocitos por lo que la lectura slo dura 4 segundos y se obtiene el promedio de las 3 aperturas) En el bao de los eritrocitos el sistema identifica los eritrocitos como aquellas partculas que poseen un volumen igual o mayor que 36 fL (femtolitro), en este mismo bao se realiza el recuento de plaquetas las cuales tienen un volumen entre 2 y 20 fL, en los contadores COULTER si existe un recuento pequeo de plaquetas, el tiempo de recuento se extiende por 4 segundos ms, a fin de tener un mayor valor estadstico. En el bao de leucocitos posterior a la dilucin con diluyente isotnico, se aplica agente lisante, el cual destruye la membrana citoplasmtica de eritrocitos y leucocitos, permaneciendo los ncleos intactos. Es as que las partculas que midan 35 fL o ms son contadas como leucocitos. Hay que hacer notar que los ncleos de eritroblastos si existiesen tambin son contados, por lo que si el instrumento seala sospecha de su presencia se deben buscar en el frotis y de tener un nmero considerable, se debe corregir el recuento de leucocitos. Posterior al recuento de leucocitos y utilizando la reaccin qumica del lisante con la hemoglobina libre en la mezcla, se mide un complejo qumico estable a 525 nm, el cual dependiendo del instrumento, puede ser realizado en el mismo bao o en una cubeta de flujo especialmente diseada. Consecuentemente los parmetros medidos son: Eritrocitos (RBC), Leucocitos (WBC), Plaquetas (PLT) y Hemoglobina (Hgb) Los parmetros derivados de las mediciones de volumen: Volumen corpuscular medio (VCM), Ancho de distribucin eritrocitaria (ADE) y Volumen plaquetario medio (VPM) Los parmetros calculados son: Hematocrito (Hct), Hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentracin corpuscular media (CHCM Como se obtienen los histogramas de leucocitos, eritrocitos y plaquetas? Como se mencionaba anteriormente el analizador mantiene una estadstica de los volmenes celulares, y luego realiza una distribucin de cantidad relativa versus volumen de estas tres poblaciones, la separacin de volmenes se hace con una resolucin de 256 canales para cada parmetro
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PRCTICA No, 8 SEMINARIO SOBRE INTERPRETACIN DE HISTOGRAMAS OBJETIVO: El alumno conocer las diferentes distribuciones de clulas en los histogramas para aprender a interpretarlos correctamente.
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PRCTICA No. 9 CITOMETRA HEMTICA Y SU INTERPRETACIN EN DIVERSAS PATOLOGAS
OBJETIVO: El alumno aprender a interpretar y correlacionar la alteracin de los parmetros de la citometra hemtica con diversas patologas. INTRODUCCIN La anemia es una alteracin causada por disminucin del nmero de glbulos rojos y disminucin de la hemoglobina bajo los parmetros estndares. Rara vez se registra en forma independiente una deficiencia de uno solo de estos factores. Los rangos de normalidad son muy variables en cada poblacin, dependiendo de factores ambientales (nivel sobre el mar) y geogrficas. A nivel del mar encontraremos valores mnimos, y a gran altura los valores debern ser ms altos (la menor presin parcial de O2 obliga al organismo a optimizar su transporte). Adems, vemos variaciones de sexo, observando valores menores en mujeres (posiblemente por la prdida de eritrocitos y contenido sanguneo en cada ciclo menstrual). En general puede establecerse como normal para un hombre un hematocrito entre 40 y 50%, hemoglobina entre 13 y 18 g%, y para una mujer: hematocrito entre 37 y 40%, y hemoglobina entre 12 y 16 g%. Los sntomas y signos de la anemia se correlacionan con su intensidad, su rapidez de instalacin y el sitio donde se produce. En cuanto a su rapidez de instalacin puede ser aguda o crnica, siendo la primera ms dramtica, ya que la crnica permite una paulatina adaptacin. Otros factores influyentes en el cuadro sintomtico son la edad, el estado nutritivo, cardiovascular y respiratorio. Los sntomas que se observan en la anemia aguda se denominan sndrome anmico, e incluyen: palidez, astenia, adinamia, palpitaciones y disnea de esfuerzo. Frecuentemente y sobre todo en las anemias severas se observa esplenomegalia, hepatomegalia, petequias, equimosis, ictericia. Tambin puede incluir sntomas propios de otros sistemas, como cardiovascular (taquicardia, disnea de esfuerzo marcada, angor, claudicacin intermitente), digestivo (dispepsia, disfagia, anorexia, diarrea) o neuropsiquitrico (parestesias, mareos, depresin, cambios de carcter como irritabilidad, mal humor). Para ser capaz de tratar exitosamente un sndrome anmico, debe caracterizarse, y establecerse su etiologa, y para ellos se bede estudiar a fondo las caractersticas de los glbulos rojos, de los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que circulan en la sangre mediante un hemograma, y las caractersticas de las series hematopoyticas mediante un mielograma. ste no es indispensable, generalmente un mdico capacitado logra clasificar una anemia slo con el cuadro sindromtico y el hemograma. De acuerdo a todos los factores mencionados, las anemias pueden clasificarse en diferentes grupos.
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PRCTICA No. 10 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS MICROCTICAS, NORMOCTICAS Y MACROCTICAS. OBJETIVO: El alumno revisar las alteraciones morfolgicas que se presentan en los eritrocitos en las anemias microcticas, normocticas y macrocticas. INTRODUCCIN: La anemia puede definirse como una disminucin de los eritrocitos, hemoglobina y hematocrito, sin embargo no se considera como una enfermedad, sino ms bien como la expresin de un trastorno o enfermedad subyacente. Las primeras manifestaciones muestran algunos sntomas como debilidad, hipoxia, fatiga, cefalea, vrtigo, todo esto debido a la falta de oxigeno. Existen varias formas de clasificar a las anemias, una de ellas es, utilizando los ndices eritrocitarios, entre stas tenemos a la anemia microctica hipocrmica, normoctica normocrmica y las macrociticas. 1. ANEMIA MICROCITICA HIPOCROMICA. Es una de las ms comunes en la actualidad, se caracteriza porque el volumen corpuscular medio (VCM) y la concentracin media de hemoglobina (CMHC) son menores a los valores de referencia, por tanto en un frotis de sangre perifrica el eritrocito es menor en tamao, presenta un halo central de gran tamao y el grado de poiquilocitosis (cambios de la forma) depende de la gravedad del paciente. Las causas que dan origen a este padecimiento son: Deficiencia en la ingestin de hierro. Una prdida excesiva de sangre. Mala absorcin del hierro. Defectos de maduracin citoplasmtica.
2. ANEMIA NORMOCITICA NORMOCROMICA. Esta se caracteriza porque el nmero de eritrocitos, la hemoglobina y el hematocrito disminuyen proporcionalmente, por lo tanto, el frotis de sangre perifrica se observa normal ya que el VCM y CMHC se encuentran dentro de los valores de referencia. Este tipo de anemia puede aparecer en las siguientes condiciones: Poco despus de una hemorragia masiva. En el descenso de la produccin de sangre, por ejemplo en las anemias aplsticas (por agentes qumicos, uremia, radiaciones, causas desconocidas, tejido maligno en mdula sea. Anemias hemolticas (ya que por lo general son normocticas normocrmicas). En el aumento del volumen sanguneo (principalmente en el embarazo).
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3. ANEMIAS MACROCITICAS. Las anemias macrocticas se caracterizan porque el VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM) es mayor al de referencia, dando origen a eritrocitos grandes. Esta anemia se clasifica en dos grupos, las que se asocian con un tipo de megaloblasto de maduracin de eritrocitos en la mdula sea y las que no lo hacen. 1).- En la anemia macrocitica megaloblstica existe una interrupcin en la sntesis nuclear, que trae como consecuencia un defecto en la maduracin del ncleo en el seguimiento de la megaloblastocis, la causa principal que origina esta anemia es la deficiencia de vitamina B 12 y cido flico que funcionan como coenzimas en la sntesis del cido nucleico. DEFICIENCIA DE ACIDO FOLICO. 1) Ingestin diettica inadecuada. 2) Requerimiento mayor. 3) Mala absorcin en el intestino delgado. 4) Inhibicin de medicamentos. DEFICIENCIA DE VITAMINA B 12 1) Carencia del factor intrnseco. 2) Mala absorcin. 3) Ingestin diettica inadecuada. Esta anemia se caracteriza porque el frotis sanguneo presenta la siguiente triada: macrocitos ovales, neutrfilos hipersegmentados (con ms de cinco lbulos) y los cuerpos de Howell-Joly, la anisocitosis es moderada y la poiquilocitosis es ms grave cuando la anemia es ms intensa. 2) Anemias macrocticas no megaloblsticas an no se define la causa de su origen, pero es posible que se relacione con un incremento de los lpidos membranales. Esta anemia se caracteriza porque se presenta acompaando las siguientes enfermedades: Alcoholismo. Reticulocitosis. Enfermedad heptica. Insuficiencia respiratoria. El frotis de sangre perifrica presenta macrocitos no tan grandes como la anemia megalobstica, los cuales son redondos con membranas delgadas, no hay neotrfilos hipersegmentados, la cuenta de lecuocitos y plaquetas son normales generalmente. La poiquilocitosis es el trmino que se utiliza para descubrir una variacin en la forma de los eritrocitos mientras que la anisocitosis denota una variacin del tamao celular, ambos se reportan como leve, moderada o acentuada. Los cuerpos de Howell-Jolly, son grnulos constituidos por fragmentos nucleares (DNA), en forma redonda y de color prpura obscuro o violeta que se presentan por lo general solo en los eritrocitos.
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PRCTICA No. 11 OBSERVACIN DE LAMINILLAS CON DE ANEMIAS HEMOLTICAS
OBJETIVO: El alumno revisar las alteraciones morfolgicas que se presentan en los eritrocitos en las anemias hemolticas.
INTRODUCCIN: Se denomina hemlisis al proceso de destruccin de glbulos rojos que determina una disminucin de la supervivencia de los mismos, acompaado de incapacidad de la mdula sea de realizar el aumento compensatorio. (Una mdula sea estimulada al mximo puede aumentar la eritropoyesis entre 6 a 8 veces su capacidad normal, y la vida media del eritrocito puede disminuir hasta 15 a 20 das sin llegar a anemia). Esta disminucin de la vida eritrocitaria determina: - un aumento de la formacin de glbulos rojos a nivel medular: aumento de eritropoyesis. - un aumento del catabolismo de la hemoglobina. La hemoglobina liberada de los glbulos rojos sufre metabolizacin y determina un aumento de la bilirrubina indirecta, que determina clnicamente la aparicin de ictericia (coloracin amarillenta de piel y mucosas). El lugar de mxima remocin por fagocitosis es el bazo. Nos encontramos frente a un caso de hemlisis crnica cuando este proceso de destruccin acelerada de glbulos rojos se mantiene en el tiempo, causando los sntomas y signos caractersticas del sndrome hemolitico (vase ms adelante). 1.1 Clasificacin de las anemias hemolticas:

De acuerdo al sitio de hemlisis: intra o extravascular. Patognica: corpusculares (intrnsecas) o extracorpusculares (extrnsecas). Etiolgica: heredadas o adquiridas.
La mayor parte de las alteraciones intrnsecas son hereditarias, y la mayor parte de las extrnsecas son adquiridas. Excepciones a esta regla son la hemoglobinuria paroxstica nocturna*, el dficit de G6PD y el dao trmico. En investigacin, el diagnstico diferencial de estas patologas se hace por transfusiones cruzadas. 1.1.1 Clasificacin segn su sitio: La hemlisis puede ser extravascular o intravascular. Cuando ocurre un proceso de hemlisis extravascular los eritrocitos fagocitados sufren ruptura de su membrana. La hemoglobina es degradada por enzimas lisosomales y se recupera fierro y aminocidos. El fierro es transportado a la mdula sea para nueva produccin de hemates. A su vez, cuando ocurre hemlisis intravascular la hemoglobina libre se disocia en dmeros alfa y beta, los que se unen haptoglobina u oxidan a metahemoglobina. Luego estas molculas se
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disocian y liberan el grupo Hemo para unirse a la albmina y hemopexina, lo que permite la captacin del Hemo por los hepatocitos para recuperar el fierro y para producir bilirrubina. La hemlisis intravascular se manifiesta por: Hemoglobinuria, Metahemalbuminemia, Ictericia, Hemoglobinemia, Hemosiderinuria, Hemosiderinuria. El paso final de la hemlisis intra y extravascular ser la conjugacin de bilirrubina por el hepatocito, excrecin de ella a la bilis, conversin de la bilis por parte de la flora intestinal en urobilingeno y urobilina, y por ltimo la excrecin en la orina y heces. En la hemlisis extravascular, al excederse la capacidad del sistema monoctico macrofgico aparecen alteraciones morfolgicas de los hemates como microesferocitosis, clulas mordidas, eritrocitos fragmentados y con inclusiones citoplasmticas. Adems la regurgitacin de hemoglobina libre al plasma provoca disminucin de la haptoglobina. En tanto, en la hemlisis intravascular con destruccin de 20 a 40 ml de eritrocitos al da aparece una reduccin de la haptoglobina a niveles detectables y disminucin de la hemopexina. La deplecin en ambos sistemas (intra y extravascular) provoca aparicin de hemoglobina libre en el suero y orina, y aumento de la metalbmina. 1.1.2 Clasificacin patognica: CORPUSCULARES: aqu el defecto est en los glbulos rojos, al ser defectuosos son eliminados de la circulacin. El defecto puede ser: 1. Enzimtico: alteracin cuantitativa o cualitativa de enzimas que intervienen en el metabolismo del glbulo rojo; son poco frecuentes. Dficit de enzimas de la gliclisis: dficit de piruvato kinasa. Anomalas del metabolismo de nucletidos: dficit de pirimidin 5nucleotidasa. Dficit de enzimas de shunt pentosas y metabolismo del glutatin: G6PD, glutatin sintetasa, glutatin reductasa. 2. Hemoglobina: hay una alteracin en la molcula de la hemoglobina. Aqu entran las hemoglobinopatas y las talasemias. Existen varias hemoglobinopatas; la hemoglobinopata ms frecuente es la anemia de clulas falciformes o hemoglobinopatas, tambin llamada Drepanocitosis. Aqu hay un aminocido cambiado en la hemoglobina (hemoglobina S) que altera la estructura del glbulo rojo adoptando forma de hoz. Estos glbulos rojos llamados falciformes aumentan la viscosidad sangunea determinando mayor de oclusin de vasos pequeos que determina microinfartos. Se manifiesta clnicamente por anemia crnica con episodios de crisis hemolticas, crisis vasoclusivas (las ms graves son aquellas que ocluyen vasos cerebrales y seos, pero puede afectarse cualquier rgano). Existen dos formas clnicas: la homocigota, que presenta anemia hemoltica y fenmenos vasooclusivos, y la heterocigota (o rasgo drepanoctico), ms frecuente, asintomtica. En estos ltimos slo se pone de manifiesto la enfermedad en situaciones en que disminuye la presin parcial de oxgeno.
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Las talasemias son alteraciones en la hemoglobina por falta total o parcial de las cadenas de globina. El 90% de la hemoglobina est formada por el grupo y 4 cadenas de globina (2 alfa y 2 beta). Cuando falta alguna cadena entonces surgen las talasemias. Existen varias talasemias, se deben a mutaciones genticas segn las cadenas afectadas, las llamamos alfatalasemias, betatalasemias. 3. Defectos de membrana: esferocitosis hereditaria, eliptocitosis, acantocitosis y estomatocitosis. Anomalas en la permeabilidad inica: Hidrocitosis congnita y Xerocitosis congnita. La ms frecuente de este grupo es la esferocitosis hereditaria. Es una anemia hemoltica crnica de herencia autosmica dominante con morfologa eritroctica caracterstica (esferocito), en la cual la hemlisis es extravascular. B. EXTRACORPUSCULARES: aqu la destruccin del glbulo rojo es por presencia de factores externos, del medio en que estn. Como causas de esta anemias se debe mencionar: 1. Hiperesplenismo: la funcin del bazo de retener los glbulos rojos alterados o viejos se extiende tambin a los glbulos rojos normales. En general se debe a otras enfermedades (hepatopatas, linfomas) que al tratarlas disminuye la hemlisis. 2. Anemias hemolticas inmunes: aqu el organismo produce anticuerpos que actan contra los glbulos rojos determinando la hemlisis. Esto puede ocurrir, por ejemplo, luego de una transfusin en que los glbulos rojos transfundidos tienen algn antgeno (sustancia que es considerada extraa por el receptor y ste reacciona formando anticuerpos). Otro ejemplo es el de la enfermedad hemoltica del recin nacido, cuando existe una incompatibilidad entre los glbulos rojos de la madre y el feto. Pero a veces surgen anticuerpos formados por el propio organismo (auto-anticuerpos) por fallas en los mecanismos que regulan el sistema inmune. La formacin de anticuerpos puede ser secundaria a otras enfermedades. C. OTRAS CAUSAS DE LA ANEMIA HEMOLTICA EXTRACORPUSCULAR SON: - la causa mecnica - por ejemplo, los pacientes con vlvulas protsicas cardacas; stas pueden lesionar los glbulos rojos circulantes. - por txicos directos: algunas infecciones, algunos agentes qumicos (arsnico, cobre, plomo), toxinas de animales (araas, ofidios). - Las drogas: asociadas a hemlisis por oxidantes (que causan dficit de G6PD).
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PRCTICA No. 12 OBSERVACION DE MDULA SEA NORMAL. OBJETIVO: El alumno revisar extensiones de mdula sea de morfologa normal para familiarizarse con los precursores de cada una de las clulas de la sangre. INTRODUCCIN: Solo por experiencia se consigue interpretar bien la citologa de mdula, que debe considerarse como un mtodo. Por eso el examinador debe informarse con respecto a la naturaleza clnica de la enfermedad del paciente. En general hay dos mtodos de examinar una extensin de mdula. El primero consistente en observar varios portaobjetos a poco aumento, luego a gran aumento en seco y, finalmente, con el objetivo de inmersin en aceite; y, a base de una experiencia previa, es posible lograr una impresin respecto al nmero y la distribucin de las clulas, de modo muy similar a como el patlogo analiza sus cortes de tejido. El segundo consiste en efectuar un recuento diferencial de un gran nmero de clulas (300-1000) y calcular el porcentaje de cada tipo de clula. Finalmente se puede emplear una combinacin de los dos mtodos. El segundo mtodo, un laborioso recuento diferencial, constituye una parte esencial del adiestramiento en este trabajo, sin el cual no es posible llegar a realizar el primero con exactitud. El recuento diferencial proporciona, adems, un registro objetivo y til como referencia para medir ulteriores cambios. El reconocimiento de los tipos celulares, y en particular de la fase de maduracin dentro de cualquier serie dada, tiende a variar de un laboratorio en otro, a pesar de los numerosos esfuerzos realizados para unificar nomenclatura, con descripciones, fotografas y dibujos. No pueden aceptarse como universales ningn promedio ni mrgenes normales. La lnea de base ms vlida es la que determina cada laboratorio particular y aun entonces, de no emplear un adiestramiento en grupo, puede haber variaciones notables de un examinador a otro. Por fortuna estas limitaciones del mtodo slo son graves cuando no se tienen en cuenta. Con prctica y experiencia, los investigadores de laboratorio pueden obtener resultados provechosos y conseguir un alto grado de reproducibilidad en sus recuentos diferenciales de la mdula. Es recomendable el siguiente procedimiento para examinar preparaciones de esta clase: 1- Inspeccin a simple vista de los portaobjetos, para escoger la extensin que contenga partculas. 2- Examen a poco aumento (16mm) de las partculas a fin de determinar previamente si la mdula es normoplsica, hipoplsica o hiperplsica. 3- Seleccionar de una zona celular, generalmente en la porcin caudal de la pelcula, alrededor de las partculas, a la que sigue un estudio minucioso de los detalles citolgicos a gran aumento y con objetivo de inmersin en aceite CELULARIDAD: El grado de celularidad, si el conjunto de la medula es hiperplsica o hipoplsica, es un aspecto difcil de determinar por el examen de un material aspirado. Si este dato es esencial, solo podemos asegurarnos estudiando cortes histolgicos de partculas
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aspiradas o del material obtenido por biopsia por trocar o por biopsia quirrgica. Si la aspiracin se efecta de una manera uniforme y si retiran solo cantidades mnimas de material, es posible poder obtener estimaciones tiles, aunque solamente aproximadas, de la celularidad. La celularidad (expresada como relacin entre el volumen de clulas hematopoyticas en la medula y el volumen total de clulas ms grasa) varia normalmente con la edad del individuo y la zona medular examinada. Por ejemplo a la edad media de 50 aos, la celularidad en las vrtebras es de un 75%; en el esternn de un 60%; en la cresta iliaca de un 50%, y en las costillas de un 30%. La celularidad normal del hueso iliaco en diferentes edades ha sido muy bien descrita por Hartsock y cols. en 1965. El informe debe comprender los aspectos siguientes: descripcin de la celularidad en general, tipo de eritropoyesis, madurez general de las clulas eritropoyticas, y clculo de los cocientes mieloide-eritroide o leucocito idee-eritroide, basados en un recuento de 5001000 clulas. Un recuento diferencial es til, especialmente en casos seleccionados, como, por ejemplo, en una leucemia para seguir el efecto de la teraputica. Pero se suelen conseguir mejores resultados examinando un nmero mayor de preparaciones en el mismo tiempo que se invierte en los recuentos diferenciales. RELACIN MIELOIDE-ERITROIDE (M:E) En el adulto normal, la relacin M:E viene a ser de 3:1 4:1. ste trmino muy, difundido, se refiere a los recuentos diferenciales en que no se han excluido, los granulocitos maduros. La relacin M:E al nacer es de 1.85:1 aumenta con rapidez poco despus y alcanza el nivel normal mximo de 11:1 en las dos primeras semanas de vida, para descender luego gradualmente hasta un promedio de 3:1 en los primeros 20 aos. INTERPRETACIN: Una relacin M:E aumentada, por ejemplo, de 6:1 puede significar la respuesta a una infeccin o a una leucemia, una reaccin leucemoide o una hipoplasia eritroide. Cuando esta disminuida, esto es, menor de 2:1 puede significar una reduccin de leucopoyesis o una hiperplasia eritropoytica. La hiperplasia eritroide normoblstica puede provenir de una de las muchas formas de anemia, de afecciones hepticas o de una pilicitemia, mientras que la megaloblstica puede ser causada por una deficiencia de cido flico o de vitamina B12 como en la anemia perniciosa. Una relacin M:E normal no significa necesariamente una medula normal. Por ser irregular la distribucin de los diversos tipos de clulas, los recuentos diferenciales de las clulas nucleadas de la medula no son ms que aproximaciones. Las irregularidades se deben en parte a que los normoblastos, los granulocitos neutrfilos maduros RECUENTO DIFERENCIAL DE LA MDULA: Los datos publicados respecto a los recuentos normales de las clulas medulares varan segn los autores y se echan de menos las cifras normales generalmente aceptadas para la sangre perifrica. Esta diversidad refleja la tcnica de cada uno de los investigadores, tanto al realizar los recuentos como en la
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interpretacin. Por consiguiente, es mejor que cada uno de establezca sus propios valores normales; de las observaciones nuestras se relacionan en la tabla 1: RECUENTOS DIFERENCIALES DE LA MDULA SEA EN PORCENTAJES DEL TOTAL DE CLULAS NUCLEADAS ROSSE MAUER JANDI (1977) (1969) (1987)
TIPOS CELULARES ALNACER MEDIA, DE 14.48+-7.24 1 MES MEDIA, DE 8.04+-5.00 18 MESE MEDIA, DE 8.21+-3.71 0.08+-0.13 0.50+-0.34 6.97+-3.56 0.44+-0.49 36.08+-7.40 0.06+-0.08 0.64+-0.59 2.49+-1.39 12.42+-4.15 14.20+-5.23 6.31+-3.91 2.70+-2.16 0.10+-0.12 45.5 1.99+-1.00 43.55+-8.56 0.06+-0.08 2.12+-1.59 0.07+-0.12 4:4 INFANCIA MEDIA, MITES 23.1 0.5(0.0-1.5) 1.7(0.2-4.8) 18.2(4.8-34) 2.7(0-7.8) 57.1 1.2(0-3.2) 1.4(0-4.0) 18.3((8.529.7) 23.3(14-34.2) 12.9(4.529.0) 3.6(1.0-9.0) 0.06(0-0.8) 16(4.8-35.8) EDAD ADULTA MEDIA, LMITES 21.5(14.2-30.4) 0.6(0.2-1.4) 2.0)0.7-3.7) 12.4(12.2-24.2) 6.6(2-22.7) 56(45.1-66.5) 1.0(0.5-1.8) 3.4(2.6-4.6) 11.9((8.1-16.9) 18(9.8-25.3) 11(8.5-20.8) 10.7(8.0-16.0) 3.2(1.2-6.2) <0.1(0.0-0.2) 15.8(10.8-22.7)
NORMOBLASTOS TOTALES PRONORMOBLASTOS BASFILOS n. POLICROMTICOS n. ORTOCROMTICOS n. NEUTRFILOS TOTALES MIELOBLASTOS PROMIELOCITOS MIELOCITOS METAMIELOCITOS BANDA SEGMENTADOS EOSINFILOS BASFILOS LINFOCITOS TOTALES DE TRANSICIN PEQUEOS CLULAS PLASMTICAS MONOCITOS MEGACARIOCITOS CLULAS RETICULARES RELACIN M:E
0.02+-0.06 0.10+-0.14 0.24+-0.25 0.34+-0.33 13.06+-6.78 6.90+-4.45 0.69+-0.73 0.54+-1.88 60.37-+-8.66 32.35+-7.68 0.31+-0.31 0.62+-0.50 0.79+-0.91 0.76+-0.65 3.95+-2.93 2.50+-1.48 19.37+-4.84 28.89+-7.56 7.37+-4.64 2.70+-1.27 0.12+-0.20 15.6 1.18+-1.13 14.42+-5.54 0.00+-0.02 0.88+-0.85 0.06+-0.15 4:2 11.30+-3.59 14.10+-4.63 3.64+-2.97 2.61+-1.40 0.07+-0.16 49.0 1.95+-0.94 47.05+-9.24 0.02+-0.06 1.01+-0.89 0.05+-0.09 4:0
0.4(0.2-0.6)
2:9(1.2-5.2)
1.8(0.2-2.2) 1.8(0.2-2.8) <0.1(0.0-0.2) 0.3(0.0-0.5) 2:5(1.2_5.0)
INTERPRETACIN DE LOS HALLAZGOS CITOLGICOS: 1. Las clulas normalmente presentes pueden aumentar en nmero. Esto ocasiona un paro en la maduracin con aparicin de las clulas ms jvenes en cantidades anormalmente grandes. 2. Un recuento de eosinfilos de ms de 5%, uno de los linfocitos de ms de 20% y uno de clulas plasmticas de ms de 5% pueden ser significativos. 3. Clulas normalmente ausentes: clulas neoplsicas, metastsicas (cncer) o primarias ( mieloma mltiple, y las que se ven en las tesaurismosis (enfermedad de Gaucher). 4. Lesiones granulomatosas: tuberculosis, enfermedad de Hodgkin y sarcoidosis. 5. Parsitos: paludismo, histoplasmosis.
50
PRCTICA No. 13 RESOLUCIN DE CUADROS CLNICOS OBJETIVO: El alumno ser capaz correlacionar la clnica del paciente con los resultados de la Citometra hemtica a travs de la resolucin de cuadros clnicos.
PRCTICA No. 14 EVALUACION FINAL OBJETIVO: El alumno resolver un problema hematolgico correlacionando la morfologa con los datos de la Citometra hemtica.
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PREPARACIN DE REACTIVOS.
LIQUIDO DILUYENTE DE TURK. (LEUCOCITOS) Acido actico glacial Agua destilada. Azul de metileno. 1 o 3 ml 100 ml 1 gota.
LIQUIDO DILUYENTE DE ERITROOCITOS. Solucin de formaldehdo al 40 % Citrato trisdico al 3% (10 ml) (100 ml)
OXALATO DE AMONIO AL 1 % (PLAQUETAS) Oxalato de amonio 1 ml. Agua destilada. 99 ml. Filtrar y conservar en refrigeracin. COLORANTE DE WRIGHT. Colorante de wright. 2 gr. Glicerina. 30 ml. Metanol. 1000 ml. Dejar madurar 1 mes y filtrar antes de utilizar. BUFFER DE WRIGHT. Fosfato de potasio anhidro. 6.63 g. Difosfato de sodio anhidro. 2.56 g. Agua destilada. 1000 ml. AZUL DE CRESIL BRILLANTE (RETICULOCITOS). Azul de crwil brillante. 1 g. Citrato de sodio. 0.4 g. Cloruro de sodio al 0.85 %. 100 ml. REACTIVO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA (DRABKIN). Bicarbonato de sodio. Cianuro de potasio. Ferricianuro de potasio. Agua destilada. Mantener en refrigeracin. 1 g. 0.25 gr. 0.2 g. 1000 ml
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SOLUCION ISOTONICA (0.85%). Cloruro de sodio. Agua destilada. SOLUCION DE EDTA. AL 10 %. Dietilendamin-tetra-actico de sodio. (EDTA). 10 gr. Agua destilada. 100 ml. 0.85 g. 100 ml.
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CUESTIONARIO. 1) Mencione los mtodos que se utilizan para realizar la venopuncin. 2) Las precauciones que se deben de tener para realizar la venopuncin son: a) Qu el material sea estril . b) No es necesario la asepsia. c) Ninguna de las anteriores. 3) Cules son las ventajas del sistema vacutainer. 4) El mtodo de la cianometahemoglobina permite medir las siguientes hemoglobinas. a) Hb-F b) Hb-S c) Hb-O2 , Hb-CO2 , Hb-H 5) La cantidad de muestra que se obtiene con la pipeta de Sahli es: a) 0.002 ml. b) 0.2 ml. c) 0.02 ml. 6) Al agregar la muestra al reactivo de Drabkin se debe agitar vigorosamente con el fin de: a) Evitar la hemolisis. b) Para lisar los eritrocitos y ser transformada la hemoglobina. c) Para concentrar la muestra. d) Ninguna de las anteriores. 7) Dibuje el tubo de Wintrobe. 8) Haga un esquema de flojo de la VSG y mencione como se expresa el resultado. 9) Indique el material empleado en: a) Macrohematocrito. b) Microhematocrito. ( ( ( ( ( ( ( ) Microcentrifuga. ) Tubo de Wintrobe. ) Lector. ) Capilares. ) Mechero o plastilina. ) Centrfuga. ) Pipeta pasteur.
10) Cuales son las capas obtenidas en el hematocrito. 11) Los factores que aumentan el valor del hematocrito son:
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12) Dibuje la cuadrcula de la cmara de Neubauer, la pipeta de Thoma para glbulos rojos y blancos. 13) Indique las diluciones que se obtienen con: a) La pipeta de Thoma para glbulos rojos. b) La pipeta de Thoma para glbulos blancos. ( ) 1:20 ( ) 1:200 ( ) 1:100 ( ) 1:25 ( ) 1:50 ( ) 1:25
14) Relacione las siguientes columnas. a) Leucocitosis. b) Trombocitemia. c) Oligocitemia. d) Policitemia. ( ( ( ( ( ( ) Leucocitos disminuidos. ) Plaquetas aumentadas. ) Plaquetas disminuidas. ) Leucocitos incrementados. ) Eritrocitos disminuidos. ) Eritrocitos aumentados.
15) Calcule el factor que se emplea para conocer el nmero de plaquetas por mm3 de sangre. 16) Si un paciente tiene un recuento de 500 eritrocitos en la cmara de Neubauer, Cuntos eritrocitos por mm3 de sangre tendr ?. 17) El recuento de reticulocitos nos indica: a) La eficacia de la hemostacia. b) La identificacin de eritrocitos jvenes. c) La eficacia de la eritropoyesis. 18) Dibuje un reticulocito. 19) Dibuje las siguientes clulas: Neutrfilos segmentado, monocito, linfocito, eosinfilo, banda. 20) Porqu es importante realizar una buena tincin hematolgica. 21) En el recuento diferencial adems de la morfologa celular se puede observar: a) Parsitos. b) Cristales. c) Bacterias. d) Poiquilocitosis y anisocitosis. e) Anormalidades de las plaquetas. f) Todas las anteriores. g) Ninguna de las anteiores.
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22) Para qu sirven los ndices eritrocitarios?. 23) Calcule el VCM y CMHC de la mujer que tiene una hemoglobina = 10 g/dl, Hematocrito = 33, eritrocitos = 4.2 millones por mm3 e indique que alteracin presenta si los valores de referencia son: CMHC = 30 - 34 g/dl. VCM = 78 - 103 Um3 24) El diagnostico de una anemia se basa en: a) Examen fsico. b) Historia clnica del paciente. c) Todas las anteriores. d) Ninguna de las anteriores. 25) Mencione las pruebas que constituyen a la Ciometra Hemtica. 26) Dibuje: macrocito, microcito, eritrocito normal, eritrocito hipocrmico, un campo que muestre poiquilocitosis y anisocitosis. 27) La anemia macroctica megaloblstica es causada por la falta de Vitamina B12 y cido flico. F o V. 28) Mencione las causas del deficid de cido flico y Vitamina B12 . 29) Las anemias normocticas se caracterizan por: a) El VCM, CMHC disminuyen proporcionalmente. b) Se presentan principalmente en anemias hemolticas y en el embarazo. c) Ninguna de las anteriores. 30) Mencione la importancia de los programas de Control de Calidad en el laboratorio.
56
BIBLIOGRAFA:
1. ngel G.M., ngel M.A. Interpretacin clnica del Laboratorio 6 Edicin., Editorial Panamericana. Mxico 2001. 2. Bick L. Roger, M.D. Hematology Clinical and Laboratory. Practice. Tomo I y II. 1. Edicin., Editorial Mosby. U.S.A.; 1993. 3. Borbolla E.J. Lpez H. M.A. Hematologa Algoritmos diagnsticos. 1 Edicin., Editorial McGraw Hill. Mxico 2005. 4. Carrillo, F.A. Hematologa. Casos Clnicos. 2. Edicin., Editorial Interamericana McGraw-Hill. Mxico. 1992. 5. Jaime P.J.C., Gmez A.D., Hematologa. La Sangre y sus enfermedades. 1. Edicin. Editorial Mc Graw Hill. Mxico 2004. 6. Mazza, J.J. Manual de Hematologa Clnica, 1. Edicin., Salvat Editores, S.A. Madrid, Espaa. 1990. 7. Mckenzie, S.B. Hematologa Clnica 2 Edicin. Editorial., Editorial El Manual Moderno Mxico 2000. 8. Rodak B.F.. Hematologa. Fundamentos y aplicacin clnica. 2. Edicin. Editorial Mdica Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 2004. 9. Ruiz Argelles G.J. Fundamentos de Hematologa 6 Edicin., Editorial Panamericana Mxico 2003. 10. Ruiz R.G. Fundamentos de interpretacin clnica de los exmenes de Laboratorio. 1 Edicin., Editorial Panamericana Mxico 2004. 11. Direccin electrnica en internet.
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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

HEMATOLOGA I LQFB 406L MARZO 2006 FORMATIVO CB

PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIN:

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PRCTICA 5 PRCTICA 6 PRCTICA 7 PRCTICA 8 PRCTICA 9

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OBTENCIN DE SANGRE CON SISTEMA VACUTAINER.

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Ley de Beer [m] =

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Fig. (2) Amplificacin de un cuadro de eritrocitos.

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5.5 a 6.3 x 1012 /1 4.1 a 5.7 x 1012 /1

Hematocrito (Hto) VCM = ________________________________ x 10 = u3 # de eritrocitos / ul

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Hemoglobina ( g/100 ml) Hematocrito (%)

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CIFRAS RELATIVAS (%) 0 02 0 11 40 74 40 85 07 03 12 46 1 13

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Fig. (3) Mtodo de conteo, amplificacin de un cuadro de leucocitos

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Nmero de clulas contadas. Volumen

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Nmero de clulas contadas. Volumen

Nmero de clulas contadas Volumen

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4000 - 12000 Leucocitos/ mm3 4 - 12 X 109 leucocitos/L.

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PRCTICA No. 5 CUENTA DE RETICULOCITOS ERITROCITARIA A SOLUCIONES HIPOTNICAS

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Nmero de reticulocitos contados Nmero de clulas contadas.

Nmero de reticulocitos contados % de reticulocitos =

( Nmero de eritrocitos / mm3 ).

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VALORES DE REFERENCIA: 0.45% - 0.50%

120 100 80 60 40 20 0.1

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PRCTICA No. 6 CITOMETRA MANUAL