NOVA - PublicAciN cieNtficA eN cieNciAS biOMDicAS - iSSN:1794-2470 VOl.6 No.

10 JuliO - DicieMbRe De 2008:101-236

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ARTCULO DE REVSN
Mitocondria y muerte celular

Ruth Snchez
1,2,3
; Gonzalo Arboleda
1,4
1. Grupo de Neurociencias, facultad de Medicina, universidad Nacional de colombia.
2. biotecnologa, universidad Nacional de colombia.
3. universidad colegio Mayor de cundinamarca, colombia.
4. Departamento de Patologa, facultad de Medicina, universidad Nacional de colombia.
correspondencia: [email protected]
Recibido: 20-08-08 /Aceptado: 25-09-08
Resumen
Recientemente se ha definido el papel decisivo que tienen las mitocondrias en los mecanismos de muerte celular,
los cuales se han explicado en diversos modelos, donde la permeabilizacin de la membrana externa mitocondrial y
la liberacin de protenas importantes del espacio intermembranal de la mitocondria son caractersticas importantes
que definen este proceso. Especficamente protenas pro-apoptticas tales como Citocromo c, Smac/diablo entre
otras, son liberadas durante estadios tempranos del proceso apopttico. Los mecanismos por los cuales estas
protenas son liberadas dependen presumiblemente del tipo celular y la naturaleza del estimulo. La activacin de
las caspasas (proteasas de cistena) durante la apoptosis temprana parece estar regulada principalmente por la
familia de las protenas Bcl-2, cuya funcin principal es el control de la permeabilidad de la membrana mitocondrial
a travs de la formacin o regulacin de poros, en particular el poro de permeabilidad transicional mitocondrial. La
presente revisin busca mostrar una visin global del papel de la mitocondria en los procesos de muerte celular,
en la apoptosis, y en algunos de los mecanismos moleculares involucrados en su regulacin.
Palabras clave: apoptosis, caspasas, citocromo c, ciclo de Krebs, gluclisis, mitocondria.
Abstract
Mitochondria and cell death
Recently the decisive role of mitochondria in the mechanisms of cell death has been defined in diverse
models, where the permeability of the mitochondrial outer membrane and the important protein release of
the intermembrane space of mitochondria are important characteristics that define this process. Specifically
pro-apoptosis proteins such as Cytochrome c, Smac/devil among others, are released during early stages of the
apoptosis process. The mechanisms by which these proteins are released depend presumably on the cell type and
the nature of the stimulus. The activation of caspases (proteases of cysteine) during the early apoptosis seems to
mainly be regulated by the family of the Bcl-2 proteins, whose main function is the control of the permeability of
the mitochondrial membrane through the formation or regulation of pores, in particular the pore of mitochondrial
transitional permeability. This revision intends to show a global vision of the role of mitochondria in the processes
of cell death, in apoptosis and in some of the molecular mechanisms involved in its regulation.
Key Words: apoptosis, caspases, cytochrome c, glycolysis, Krebs cycle, mitochondria.
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Introduccin
Hasta hace poco tiempo se consideraba que la principal
funcin de la mitocondria estaba limitada a la produccin
de energa en forma de ATP. Sin embargo, se ha descrito
un nuevo papel para este organelo dentro del proceso de
la muerte celular programada (Apoptosis), actuando de
reservorio de protenas apoptticas como el citocromo C,
Smac / Diablo, el factor inductor de apoptosis, (AIF),
endonucleasa G y las procaspasas 2,3,8 y 9 (1). La
liberacin de estas protenas conduce a una secuencia
de cambios morfolgicos que van desde la condensacin
nuclear hasta la exposicin de la fosfatidilserina y de
molculas de adhesin en la superfcie de las clulas
que han entrado en apoptosis (2). Por tanto, parece que
la mitocondria acta como el escenario integrador de
una cadena de estmulos inductores para la apoptosis y
desencadena una serie de cascadas de sealizacin que
terminan con la muerte de la clula. Los avances en este
campo han generado nuevas preguntas a cerca de las
funciones y mecanismos regulatorios de este proceso,
entre las que se incluyen, cmo controla la familia Bcl-2
la liberacin de protenas de la mitocondria?, qu papel
juega el poro de permeabilidad transicional mitocondrial?
(del ingls, mitocondrial permeability transition pore
mPTP), entre otros.
Mitocondria: aspectos estructurales y
fsiolgicos
Generalidades
La mitocondria se conoce desde hace ms de un siglo
y en su historia se encuentra el trabajo de cientos de
investigadores de distintas disciplinas e intereses. El primero
en describir las mitocondrias fue R. Atman en 1884; las
identifc como unas estructuras intracelulares a las que
llam mioblastos. Aos despus, Benda denomin a esas
estructuras mitocondrias, del griego mitos que signifca
hilo y condos granulo. Las mitocondrias son organelos
intracelulares presentes en prcticamente todas las clulas
eucariotas. Estn encargados de suministrar la mayor parte
de la energa necesaria para la actividad celular, sintetizan
ATP a expensas de glucosa, cidos grasos y aminocidos
por medio de la fosforilacin oxidativa (3).
La mitocondria tiene un tamao variable entre 0.1m
y 0.5m de dimetro y pueden alcanzar una longitud
mxima de 7m, sin embargo ste depende de la actividad
de la clula (4). En promedio hay unas 2000 mitocondrias
por clula, pero las que desarrollan mayor actividad
metablica, como las musculares, tienen un nmero
mayor en comparacin con las poco activas, por ejemplo
las clulas epiteliales (5).
Aspectos estructurales
La mitocondria posee un sistema de doble membrana
una externa y una interna, que separan tres espacios
bien defnidos: el citosol, el espacio intermembranal y
la matriz mitocondrial. Las membranas mitocondriales
se caracterizan por bajos niveles de ciertos lpidos como
el cido fosfatdico, las esfngomielinas y los glicolpidos
caractersticos de las membranas de las clulas eucariotas.
Presenta un bajo porcentaje de colesterol entre el 7%-
11% en comparacin con la membrana de una clula
(25%-34%) (4). El alto contenido de fosfatidilcolina,
fosfatidilinositol, cardiolipinas y la escasa cantidad de
fosfatidilserina, hacen que la membrana mitocondrial sea
semejante a las membranas de ciertas bacterias.
Al igual que las membranas plasmticas, las
mitocondriales poseen una simetra en la distribucin de
los lpidos no slo entre las membranas interna y externa,
sino tambin entre las capas interna y externa de la bicapa
lipdica. De modo que una alteracin en esta distribucin
tiene consecuencias para la funcin y supervivencia de las
mitocondrias y an de la clula misma en el proceso de
la apoptosis (6,7).
La membrana externa es una bicapa lipdica, continua,
uniforme y est constituida por 40% de lpidos y 60%
de protenas que forman poros, llamados porinas o
canales aninicos dependientes de voltaje (del ingls
voltage dependent anion channel: VDAC) que la hacen
permeable a iones, metabolitos y muchos polipptidos (7).
Esto asegura el paso, por transporte pasivo, de molculas
citoslicas de peso molecular igual o inferior a 10.000 Da y
un dimetro aproximado de 20 . Tambin posee enzimas
que convierten sustratos lipdicos en formas que van a ser
subsecuentemente metabolizadas en la matriz, como por
ejemplo la esfngomielinasa que se encarga de metabolizar
la esfngomielina (4).
MitOcONDRiA y MueRte celulAR. P. 190-200/236
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La membrana externa posee receptores de importacin
capaces de reconocer secuencias de direccionamiento de
las protenas citoslicas destinadas a las mitocondrias, por
ejemplo las ADN y ARN polimerasas mitocondriales.
Tambin se observan elementos de translocacin de
protenas o de complejos de importacin sintetizados
en el citoplasma. En el momento de la importacin de
una protena estos complejos se asocian temporalmente
a los complejos de importacin de la membrana interna
y de esta forma las membranas externa e interna quedan
temporalmente unidas (4). Otros complejos favorecen
la importacin del colesterol, que es necesario para la
sntesis de esteroides desarrollados en la mitocondria.
Adems, la membrana externa posee protenas que pueden
establecer, junto con la actina, uniones dependientes de
ATP y protenas antiapoptticas de la familia Bcl-2, cuya
sobre expresin tiene como consecuencia el bloqueo de
la apoptosis (3).
La membrana interna difiere en su organizacin
molecular de la membrana externa. Posee 80% de protenas
y 20% de lpidos. Se caracteriza por formar cierto nmero
de repliegues que se denominan crestas y que incrementan
el rea total de la superfcie interna. Estas crestas aparecen
como estructuras lamelares o tubulares, cuyo nmero est
relacionado con las demandas energticas de la clula
(4). Esta membrana es impermeable a muchos solutos;
todo paso a travs de ella se realiza gracias a protenas
transportadoras, que en su mayora son hidrofbicas.
Tiene un bajo contenido de colesterol y un alto contenido
de cardiolipina (difosfatidil glicerol), lo que permite que
los lpidos citoslicos entren a la matriz para llevar a cabo la
-oxidacin. Estas caractersticas la hacen poco permeable a
ciertos iones, excepto al ATP, ADP, cido pirvico, oxgeno
y agua. Contiene tres tipos de protenas: 1. Las que llevan a
cabo las reacciones de oxidacin de la cadena respiratoria,
2. Un complejo enzimtico llamado ATPasa, que sintetiza
el ATP en la matriz y 3. Protenas transportadoras
especfcas que regulan el paso de metabolitos dentro y
fuera de la matriz (5).
Entre las dos membranas queda delimitado un espacio
intermembranal, compuesto de un lquido similar al
hialoplasma, que contiene todas las molculas que las
porinas de la membrana externa dejan pasar (6). Este
espacio es rico en protones, los cuales proceden del
funcionamiento de los complejos de la cadena respiratoria
y desempean un papel esencial en la fosforilacin de
ADP (4). El espacio intermembranal contiene tambin
componentes claves implicados en la muerte celular de
tipo apopttico, como algunas caspasas, el factor inhibidor
de la apoptosis (AIF) y el citocromo c, que se localiza sobre
la cara interna de la membrana interna (8).
En microscopia electrnica la matriz mitocondrial se
observa ligeramente densa y fnamente granulosa, debido
a los grnulos densos e irregulares de 50nm de dimetro
propios de las acumulaciones de iones de Ca
++
y Mg
++
(7).
Alberga molculas de ADN y ARN mitocondrial, contiene
iones, metabolitos a oxidar y ribosomas tipo 70S similares
a los de las bacterias, llamados mitoribosomas, que realizan
la sntesis de algunas protenas mitocondriales (6.9). En la
matriz mitocondrial tienen lugar diversas rutas metablicas,
por ejemplo las enzimas responsables de la oxidacin del
cido pirvico en el ciclo de Krebs y en la beta-oxidacin
de los cidos grasos (5).
Aspectos funcionales
Eugene Kennedy y Albert Lehninger descubren en
1948 que la mitocondria en los eucariotas es el lugar donde
se realiza la fosforilacin oxidativa, lo que marca el inicio
de la fase moderna de los estudios sobre las transducciones
de energa biolgica (5). En las mitocondrias se desarrollan
distintas reacciones bioqumicas catablicas que liberan
importantes cantidades de energa, la cual se almacena
en forma de ATP y es usada para mantener la actividad
celular (6). En los organismos aerbicos ms del 90% del
ATP proviene de las mitocondrias, el resto se forma en la
gliclisis anaerbica. El ATP es una molcula relativamente
simple, formada por una ribosa, una adenina y tres
fosfatos. La unin entre los fosfatos se conoce como unin
pirofosfato. Cuando el ATP se hidroliza a ADP y fosfato,
se liberan aproximadamente 7.500 caloras por mol (4).
La fosforilacin oxidativa es la culminacin del
metabolismo productor de energa en los organismos
aerbicos. Todos los pasos oxidativos en la degradacin
de glcidos, grasas y aminocidos convergen en esta etapa
de la respiracin celular en la que la energa de oxidacin
impulsa la sntesis de ATP. La oxidacin de la glucosa
se produce en dos etapas. La primera se conoce como
gliclisis y la segunda es la respiracin que est compuesta
193
de dos partes: el ciclo de Krebs y el transporte terminal de
electrones. La gliclisis se produce en el citosol y las dos
etapas de la respiracin en la mitocondria (5).
La gliclisis es un proceso que tiene como objeto la
oxidacin de la glucosa para producir cido pirvico y
formar una pequea cantidad de ATP a partir de ADP
y fosfato. Durante este proceso son transferidos a las
coenzimas aceptoras pocos electrones y sus protones
acompaantes. El sistema dedicado al transporte de
los electrones est compuesto por cuatro complejos
enzimticos fjos y dos transportadores de electrones
mviles: el complejo I o NADH deshidrogenasa que
contiene favina mononucletido (FMN), el complejo II
o succinato deshidrogenasa; ambos ceden electrones al
coenzima Q o ubiquinona; el complejo III o citocromo bc
1

cede electrones al citocromo c y el complejo IV o citocromo
c oxidasa cede electrones al oxgeno para producir dos
molculas de agua, Figura 1 (4).
Protenas transportadoras especfcas en la membrana
interna importan piruvato, ADP y pirofosfato hacia la
matriz mitocondrial, y exportan el ATP. El NADH,
generado en el citosol, no es transportado directamente
a la matriz debido a la impermeabilidad de la membrana.
Un sistema de lanzaderas transporta los electrones desde
el NADH citoslico hacia el NAD+ de la matriz.
El oxgeno se difunde hacia la matriz y el CO
2
lo hace
hacia fuera. Los cidos grasos se unen a la coenzima A
(CoA) en la membrana mitocondrial externa, luego el
grupo acilo se separa de la CoA y se liga a la carnitina
para ser transportado a travs de la membrana interna. El
cido graso se vuelve a unir a un CoA en el lado matricial
de la membrana interna. La oxidacin del piruvato en
el ciclo del cido ctrico genera NADH y FADH2. De
estas coenzimas reducidas se transferen los electrones al
oxgeno a travs de los cuatro complejos transportadores
de electrones y al mismo tiempo se transportan iones de
hidrgeno desde la matriz al espacio intermembranal,
con la cual se genera la fuerza protn motriz. Luego
el complejo F0F1 dirige la fuerza protn motriz para
sintetizar el ATP (4).
Figura 1. Oxidacin aerbica del piruvato en la mitocondria. 1. Transporte de los metabolitos hacia el interior de la membrana. Piruvato
deshidrogenasa, ciclo del cido ctrico y metabolismo de los cidos grasos. 2. Transporte de electrones desde el NADH y el FADH2 hacia el
oxigeno, generacin de fuerza protn motriz. 3 Sntesis de ATP por el Fo-F1 mediante el empleo de la fuerza protn-motriz. Tomada y Modificada
de H. Lodish (4).
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el Potencial de membrana mitocondrial.
La energa que se obtiene a travs de la transferencia
de electrones a lo largo de la cadena transportadora es
usada para bombear protones desde la matriz mitocondrial
hacia el espacio intermembranal, creando un gradiente
electroqumico de protones a travs de la membrana
mitocondrial interna (m: potencial de membrana
mitocondrial). Este gradiente de protones permite a la ATP
sintasa utilizar el fujo de H
+
generados para producir ATP
a partir de adenosina difosfato (ADP) y fosfato inorgnico.
De esta manera, la membrana mitocondrial interna separa
dos compartimientos de diferente concentracin de H
+
,
lo que produce diferencias en la concentracin qumica
(pH) y en la distribucin de la carga (m) a travs
de la membrana. El resultado neto es la fuerza protn
motriz (G) (4).
La regulacin del potencial de la membrana interna de
la mitocondria est dada, en parte, por la va PI3K/Akt.
Se ha demostrado que la activacin de Akt, promueve
la supervivencia celular neuronal por la activacin de
factores de crecimiento que actan contra varios estmulos
apoptticos a travs de la modulacin de la actividad de
la protena Bcl-2 en las neuronas y de Bcl-xL en clulas
de Schwann, ya que regulan la actividad del poro de
permeabilidad transicional de la mitocondria e impiden
la liberacin de protenas apoptoticas (10,11). Adems, los
blancos de sealizacin de PI3K favorecen la transcripcin
de genes como CREB y el factor nuclear B (NF-B), que
codifcan para protenas antiapoptticas (12).
Muerte celular y mitocondria
Aunque no son claros los mecanismos que controlan
la muerte celular, estudios detallados sobre la morfologa
de las clulas que mueren durante el desarrollo, han
permitido identifcar varias formas de muerte celular, entre
ellas: autofaga, muerte celular no lisosomal, catstrofes
mitticas, paraptosis, necrosis y apoptosis muerte celular
programada; de las cuales, las dos ltimas han sido las ms
estudiadas (8). La apoptosis es el mecanismo de muerte
celular que se ha relacionado con mayor frecuencia a las
enfermedades neurodegenerativas del sistema nervioso
central. Por tal razn, se profundizar en sus mecanismos
y su relacin con las alteraciones mitocondriales.
Apoptosis
La apoptosis es un mecanismo regulador esencial que
interviene en la homeostasis tisular y en el desarrollo
normal, eliminando las clulas innecesarias. El trmino
apoptosis (del griego: cada) fue usado originalmente por
los botnicos, pero a principios de la dcada de 1970, los
cientfcos escoceses Kerr, Wyllie y Currie lo reacuaron
para describir la muerte de clulas del hgado, que despus
de encogerse y marchitarse se desprendan de este
rgano como hojas en el otoo (6).
El nemtodo microscpico Caenorhabditis elegans ha
sido utilizado como modelo experimental de apoptosis,
ya que durante su desarrollo, 131 de 1090 clulas
embrionarias mueren por este proceso y adems se conoce
la localizacin y transformacin precisa de todas sus clulas
individuales (13). En este modelo se han identifcado
algunos genes necesarios para promover o impedir la
muerte celular, denominados genes ced (Caenorhabditis
elegan death). La presencia del gen ced-9 protege de la
muerte celular, mientras que ced-3 y ced-4, la favorecen.
En estudios posteriores, diversos investigadores han
encontrado homlogos en los mamferos: la familia de
protenas Bcl-2 y la familia de las caspasas respectivamente
(14,15).
Apoptosis vs. necrosis
La apoptosis y la necrosis se diferencian claramente:
los agentes desencadenantes de la necrosis son de carcter
txico, traumtico o hipxico, siempre patolgicos. Adems,
se observan numerosas clulas vecinas comprometidas en
este proceso. Hay destruccin de la membrana celular lo
que permite el escape al exterior de elementos txicos que
provocan un proceso infamatorio con efecto nocivo en
el organismo. Segn la extensin del proceso, el material
cromatnico muestra un patrn de dispersin irregular y
la desintegracin celular no implica gasto de ATP.
En el proceso apopttico se afectan determinadas
clulas, sin que necesariamente sean contiguas, ni que
se vea comprometida toda la poblacin de clulas que
conforman un rea tisular. La membrana celular no se
destruye, lo que impide el escape de su contenido al
espacio extracelular, favoreciendo un proceso silencioso,
sin infamacin. En el citoplasma se produce granulacin
fna, con conservacin de algunos organelos, en especial
195
las mitocondrias. A nivel nuclear la cromatina se condensa
en varios sectores formando los llamados cuerpos
apoptticos, lo que requiere gasto de ATP. La membrana
celular se recoge sobre las elevaciones globuliformes que
forman los elementos deteriorados del citoplasma y el
ncleo. Finalmente los cuerpos apoptticos externalizan
algunos fosfolpidos de membrana, como la fosfatidil
serina y algunas molculas de adhesin, que los fagocitos
reconocen, lo que impide que se produzca una reaccin
infamatoria en el resto del tejido (16).
las caspasas: enzimas fundamentales para
la ejecucin de la muerte
La mayora de estmulos que conducen a la apoptosis
convergen en la mitocondria y provocan una permeabilizacin
de su membrana externa. Con la permeabilizacin se liberan
una serie de protenas que activan las caspasas (1,2,16). stas
inducen la mayora de los acontecimientos proteolticos de
la apoptosis y son consideradas como responsables fnales
de la muerte celular. En el citoplasma y en el espacio
intermembranal de las mitocondrias se localizan en forma
de procaspasas, las cuales son activadas por clivaje y actan
como ejecutoras que escinden molculas de supervivencia
celular y ponen en marcha las actividades que inducen la
muerte de la clula (17).
Actualmente se han identificado 14 caspasas en
mamferos; todas ellas presentan una secuencia conservada
de 5 aminocidos (QACR(N/Q) G) en el sitio activo.
Las caspasa 1 y 11 funcionan principalmente en el
procesamiento de citocinas, mientras que las caspasas 2, 3,
6, 7, 8, 9, 10 y 12 participan en la regulacin y ejecucin de
la apoptosis (17,2). Las caspasas son divididas en dos grupos:
caspasas iniciadoras con un predominio largo (2,9,10,16)
y caspasas efectoras con un prodomino corto (3,6,7) que
actan sobre las endonucleasas y son las responsables
directas de la fragmentacin del ADN (18,19). La cadena de
degradacin proteica tiene sucesivos clivajes dependientes de
la ubicacin del cido asprtico que se repite en la estructura
de la enzima. La funcin de las otras caspasas est por
describirse (20). Actualmente hay dos vas alternativas para
activar las caspasas. Una es iniciada por seales externas que
activan un receptor de muerte en la superfcie celular (va
extrnseca). La otra es disparada por cambios en la integridad
mitocondrial (va intrnseca) (21,22).
Va extrnseca
Las clulas de los mamferos expresan receptores
localizados en su membrana plasmtica. La unin de
ligandos a estos receptores desencadena la activacin de
las caspasas y una cascada de reacciones que fnalizan con
la muerte celular. Algunos de estos receptores son el Fas,
el receptor-1 del factor de necrosis tumoral (TNF-R1) y
el DR3 (23). La fjacin del Fas ligando a su receptor (Fas)
provoca el reclutamiento citoplasmtico del adaptador
FADD (del ingls Fas-associated death domain protein),
al cual fja la procaspasa 8. Este complejo se realiza por
interacciones homoflicas entre secuencias polipeptdicas
designadas como dominios efectores de muerte (DED,
del ingles death efector domain), que estn presentes en
ambas protenas. La asociacin Fas/FADD y procaspasa 8
forma un complejo denominado Complejo de sealizacin
de muerte (DISC, por sus iniciales en ingls Death
Inducing Signalling Complex). La procaspasa 8 es activada
en el DISC por una protelisis y acta sobre las procaspasas
3, 6 y 7 que coordinan, entonces, la muerte celular. Algo
similar sucede con el receptor TNF-R1 (22, 23).
Va intrnseca: la mitocondria como
mediador en el proceso de apoptosis.
Durante dcadas se consider a la mitocondria
como un organelo encargado exclusivamente de oxidar
sustratos, produciendo agua en un proceso acoplado a la
fosforilacin en la produccin de ATP. En la actualidad
se sabe que en la mitocondria existe un proceso latente de
transporte, conocido como permeabilidad transicional
mitocondrial, cuya activacin se presenta bajo ciertas
condiciones y se traduce en la permeabilizacin de
la membrana mitocondrial a iones que incluyen el
calcio (24). Se ha propuesto que esta permeabilidad
mitocondrial, podra ser una de las vas de conduccin
de molculas pro-apoptticas.
Hoy en da, se sabe que el poro se abre cuando hay un
exceso de calcio y fosfato, lo que despolariza la mitocondria
y desacopla la cadena respiratoria. El poro de permeabilidad
transicional mitocondrial (PTPm), favorece la cascada de
caspasas y favorece la muerte celular al liberar factores
inductores de apoptosis como el citocromo c, factores
de fragmentacin del ncleo y protenas como SMAC/
DIABLO que neutralizan los inhibidores endgenos de
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la apoptosis (AIF, por sus iniciales en ingls Apoptosis
Inducing Factor), Figura 2 (25,26).
La protena de translocacin mitocondrial (TSPO)
de 18 KDa, interacta con VDAC para desempear un
papel en la apoptosis. En este contexto, TSPO parece
participar en la generacin de especies reactivas de oxgeno
(ROS). Esta generacin de ROS induce la activacin de
la va mitocondrial de la apoptosis. ROS son conocidos
por ser capaces de liberacin de citocromo c. (27,28).
Evidencias recientes indican que la caspasa 2 puede estar
directamente involucrada en la liberacin de citocromo c
desde la mitocondria en las clulas apoptticas (27). Esta
caspasa es la ms conservada entre las especies y fue la
primera clonada en humanos. Se activa tempranamente
en respuesta a stress genotxico y puede funcionar
como modulador del camino apopttico mitocondrial.
Recientes estudios han demostrado que la activacin de
la caspasa 2 ocurre dentro de un complejo multiproteco,
con protenas inducidas por el gen supresor tumoral
p53, PIDD (del ingels p53-induced protein with death
domain), las protenas adaptadoras de muerte RAIDD y
otras protenas (30).
La permeabilizacin de la membrana externa y
consiguiente liberacin de citocromo c es considerada
un paso clave y de no retorno en el inicio del proceso
apopttico. Una vez en el citoplasma, el citocromo c,
junto a la molcula adaptadora Apaf-1 participa en la
formacin del complejo del apoptosoma, lo que resulta
en el reclutamiento y procesamiento de la procaspasa 9
hacia su forma activa (caspasa 9), en presencia de ATP.
Figura 2. Mitocondria como mediador en el proceso de apoptosis. Estmulos apotticos activan protenas efectoras que se translocan desde el citosol
a la mitocondria y originan la liberacin de protenas apoptoticas a travs de un mecanismo desconocido que involucra miembros de la familia
Bcl2 y el poro de permeabilidad transicional que ocasiona la liberacin de protena inhibidoras y activadores de la apoptosis. Factor inductor de
la apotosis (AIF), promotor de fragmentacin nuclear EndoG, protena inhibidora de apoptosis (IAP). Tomado y modificado de Parone PA (26).
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Subsecuentemente la caspasa 9 cliva y activa la procaspasa
3 y 7 (caspasas efectoras) que son las responsables del
clivaje de varias protenas que llevan a las caractersticas
bioqumicas y morfolgicas de la apoptosis (31,2).
el poro de permeabilidad transicional
mitocondrial (PtPm)
El PTPm se ubica en los sitios de unin entre las
membranas interna y externa de la mitocondria. Es un
complejo multiproteco capaz de formar poros no selectivos
en la membrana interna. Los componentes estructurales
del poro son: 1. El translocador de nucletidos de adenn
(ANT), ubicado en la membrana interna; 2. La cicloflina
D, ubicada en la matriz y 3. El VDAC o porina, localizado
en la membrana externa. Adicionalmente, se han
encontrado receptores de benzodiacepinas unidos al poro
en la membrana externa, creatn quinasas en el espacio
intermembranal y hexoquinasas II ligadas al VDAC en la
fase citoslica de la membrana externa, as como protenas
Bax/Bcl-2, Figura 3 (32).
El VDAC es normalmente permeable a solutos de 1.5
kDa, lo que permite el libre intercambio de sustratos de
la cadena respiratoria tales como el NADH y el FADH,
el ATP/ADP entre el espacio intermebranal y el citosol.
En contraste, la membrana interna es casi impermeable
lo que permite generar el gradiente electroqumico
Figura 3. Estructura hipottica del poro de permeabilidad transicional mitocondrial. Canales aninicos dependientes de voltaje (VDAC), Translocador
de nucleotidos de andenina (ANT), Receptor perifrico de benzodiacepinas (PBR), creatinina kinasa mitocondrial (mtCK), Ciclofilina D peptidil prolil
isomerasa (Cyp D), familia Bcl-2. Tomado y modificado de Zamzani (32).
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de protones usado en la fosforilacin oxidativa. Sin
embargo, la permeabilidad de ambas membranas puede
ser interrumpida, como se ha demostrado in vitro (32).
De esta forma, la apertura del canal en la membrana
interna disipa el gradiente de H
+
a travs de la membrana,
desacoplando la cadena respiratoria de la produccin de
ATP. Como resultado se hincha la matriz, lo que provoca
la ruptura de la membrana externa permitiendo la salida
de las molculas proapoptticas, Figura 3 (33).
Aunque se ha escrito mucho sobre el papel regulador
que podran tener otras protenas y sobre los factores que
inducen la probabilidad de que el poro se abra, es de
resaltar que los inductores fsiolgicos son importantes en
su funcin. Se conoce que el poro se cierra cuando existe
una baja carga energtica, probablemente para optimizar
la fosforilacin oxidativa, mientras que en presencia de
una alta carga energtica se abre, posiblemente con el fn
de liberar, en forma de calor, la energa producida por
la cadena respiratoria. Es as como la entrada de calcio
al citoplasma puede cerrar el poro, lo que obliga a la
mitocondria a producir el ATP que necesita la clula para
su funcionamiento. Si se comprende la permeabilidad
del poro, es posible que se pueda llegar a controlar la
muerte celular accidental en procesos como la isquemia,
enfermedades neurodegenerativas, entre otras.
la familia bcl-2 y su interaccin con el
mPtP
La familia de protenas Bcl-2 (homlogo del proto-
oncogen responsable del linfoma folicular humano) es
determinante en el control de la vida y la muerte de
la clula. Estas protenas se sintetizan justamente en
la membrana de la mitocondria y juegan un rol pro o
antiapopttico, ya que pueden aumentar la permeabilidad
de la membrana o disminuirla hasta bloquear el escape de
citocromo c y de AIF (34). Las protenas sintetizadas en esta
familia son: Bcl-2, Bcl-xL, Bcl W y BRAG, que inhiben
la apoptosis. Mediante fosforilacin se originan protenas
con accin proapopttica como Bax, Bak, Bad, y Bcl x 5,
pues producen una cada del potencial transmembranal
con el consecuente aumento en la permeabilidad
membranal. Adems, actan como activadores de las vas
proapoptticas Fas y TNF y de algunas caspasas (35).
Un segundo mecanismo, a travs del cual el citocromo
c puede ser liberado al citosol, es a travs de un canal que
se forma en la membrana externa mitocondrial, cuando
protenas de la familia de Bcl-2 como Bax y Bak, que se
encuentra normalmente en el citosol, se translocan a la
mitocondria y se oligomerizan para formar una estructura
de poro durante la apoptosis. Estas protenas forman un
canal que permite la salida de citocromo c (36). Adems del
efecto directo que se cree tienen las protenas de la familia
Bcl-2 sobre la permeabilidad mitocondrial, tambin se ha
reportado que Bax podra tener una funcin independiente
estimulando la salida de calcio del retculo endoplsmico
y dirigindolo hacia la mitocondria. El mecanismo que
favorece este movimiento no se ha determinado, pero se
ha sugerido que podra involucrar los sitios de contacto
entre estos dos organelos (37). Otros autores proponen que
el calcio mitocondrial puede promover la incorporacin
de Bax a la membrana externa (38-40), aunque tambin
se ha reportado la liberacin de citocromo c inducida por
Bax independiente de calcio (41).
La subfamilia BH3 parece ser guardiana del dao
celular y crtica para desencadenar la apoptosis. Son
protenas inductoras de muerte que subyacen a varios
mecanismos de control (42,43). Algunas protenas se
regulan a nivel transcripcional, como es el caso de noxa
hrk(44), cuya expresin se induce en respuesta a estmulos
proapoptticos. Otras lo hacen a travs de modifcaciones
postransduccionales como Bid (45), que se mantiene
inactivo hasta que es cortadas por una caspasa, lo que
genera el fragmento tBid, o Bim, que es secuestrado por
los microtbulos al interactar con la dineina LC8 (46).
Bad es un ejemplo de la regulacin de la actividad por
fosforilacin (47,48), cuando est desfosforilada se asocia
a Bcl-X
L
en la mitocondria y promueve la muerte, en
cambio, al ser fosforilada se encuentra en el citoplasma
asociada a la protena chaperona 14-3-3, que se unen a
protenas fosforiladas en serinas y pierde la capacidad de
interactuar con Bcl-X
L
. La cinasa Akt es la responsable de
la activacin e inactivacin de Bad (49,50).
Proyecciones
Es ahora claro que la mitocondria juega un papel crtico
en la muerte celular en la regulacin tanto de la apoptosis
como de la necrosis. La permeabilizacin de la membrana
mitocondrial y liberacin de protenas al espacio
intermembranal son caractersticas importantes de estos
dos mecanismos. La apoptosis es un proceso complejo
199
que merece ser estudiado no slo por su relevancia en el
funcionamiento normal de los organismos, sino porque
su desregulacin favorece el surgimiento de enfermedades
como el cncer o las que involucran degeneracin celular
como en las enfermedades neurogenerativas. Entender
los mecanismos moleculares implicados en la regulacin
de la muerte celular y su relacin con las vas de
sealizacin, incrementa el conocimiento y comprensin
sobre la formacin y funcionamiento de los organismos
y permite el diseo y la creacin de nuevos potenciales
teraputicos.
Agradecimientos
Financiado por la DIB - Universidad Nacional de
Colombia, cdigo No. 8009100 y Colciencias cdigo No.
110145221189.
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