METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACARIDOS Y POLISACARIDOS)

1. RESUMEN Las propiedades bioqumicas y las reacciones caractersticas de las diferentes biomolculas dependen de los distintos grupos funcionales que las constituyen. En esta prctica se analiz una de las principales macromolculas (Carbohidratos) y se realizaron algunas reacciones qumicas especficas que permiti la identificacin de dicho grupo. 2. INTRODUCCION Los carbohidratos tambin llamados azcares, osas o sacridos, son polihidrxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos polimricos que por hidrlisis producen polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas. Segn el nmero de unidades de azcares sencillos que posean se clasifican en: MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS cuando contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando contienen el grupo cetona. Los monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares y pueden tener entre tres y hasta siete tomos de carbono. DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre s por enlaces glucosdicos. OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos tambin por enlaces glucosdicos. POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de unidades de azcar sencillo ligadas entre s. De acuerdo con lo anterior, adems de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es fcilmente oxidable o no, es decir si es un AZCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si es disacrido o polisacrido.

Una secuencia que permite hacer el reconocimiento diferenciacin de carbohidratos se esquematiza en:

Ensayo de Molish: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con a-naftol formando un color prpura violeta. Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de carbohidratos reductores. Al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict contiene ion cprico en medio alcalino que se reduce hasta xido cuproso en presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre. Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los disacridos. Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una coloracin azul-violeta intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de coloracin roja. Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la conversin de la cetosa en 5-hidro-metilfurfural y su posterior condensacin con resorcinol formando as complejos coloreados. Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual forma complejos de coloracin slo con las pentosas. A travs de esta prctica se logro la identificacin por mtodos colorimtricos cuantitativos de carbohidratos: monosacridos, disacridos y polisacridos.

3. MATERIALES Y METODOS 12 tubos de ensayo Pipeta de 10 o 5 ml Pipeta de 1 ml Estufa para bao de Maria microscopio Reactivos: Molish Barfoed Bial Seliwanoff Fenilhidrazina H2SO4

Mediante los siguientes procedimientos se analiz un carbohidrato (sustancia problema), continuando con el estudio de Hidrlisis cida de disacridos respectivamente (Maltosa y Sacarosa). 3.1. Anlisis para monosacridos, disacridos y polisacridos.

Sustan cia proble ma ml 1 1

Prueba

Volum en

Procedimiento

Molish Barfoed

2 gotas 2.5 ml

1 1 2

Bial Seliwanof f Fenilhidra zina

1.5 ml 2 ml 0.5 ml

Se llevo a bao de Mara por 10 minutos, y se observaron resultados Se mezclo y se llevo a bao de Mara, una vez apareci el precipitado rojo, se sacaron del calor y se anotaron los resultados Se llevo a bao de Mara durante 3 min y se observaron los resultados. Se llevo a bao de Mara por 10 minutos, y se observo la coloracin que indicaba la presencia de pentosa Se llevo a bao de Mara durante 10 min y posteriormente se enfri el tubo en agua y se dejo reposar durante 5 min, para identificar bien los cristales se examinaron con ayuda de un microscopio

3.2.

Hidrlisis cida de disacridos.

tub o

soluci n

disacr ido (ml)

HCl 1N (ml)

H2 O (ml )

Neutral izacin Se Hirvieron simultne amente a bao de Mara + 0.5 ml de benedict y se llevo a bao de Mara por 2 min 7 gotas de NaOH 1N 7 gotas de agua

1 2 3 4

Maltos a Sacaro sa Maltos a Sacaro sa

1 1 1 1

1 1 0 0

0 0 1 1

Se observ y se registr los resultados obtenidos.

4. RESULTADOS Y DISCUCIONES 4.1. Anlisis para monosacridos, disacridos y polisacridos.

Identificacin de carbohidrato Prueba Cambios Resultado Molish Anillo violeta carbohidrato Barfoed Precipitado rojo antes Monosacridos de los 6 minutos Bial No cambio su color Hexosa naranja Seliwanof Leve coloracin Glucosa o f galactosa fenilhidra Cristales en forma de GLUCOSA zina palma

Tabla1 Se realiz la prueba con el reactivo de Molish y se observo una reaccin con la solucin problema. Por lo tanto se infiri que este reactivo sirve para la identificacin general de carbohidratos (hidrlisis de polisacridos y disacridos con el cido sulfrico hasta monosacridos). Seguidamente se aplic el reactivo de Barfoed a la solucin problema y se obtuvo que la solucin en estudio correspondi a un Monosacrido, puesto que no tardo ms de 6 minutos en presentarse un precipitado rojo; esto se debe a la rapidez con que el cido cprico es reducido a oxido cuproso. (Mayor rapidez de oxidacin en presencia de monosacridos que en presencia de disacridos). Despus de esto, se mezclo la solucin problema con el reactivo de Bial y no se percibi ningn cambio de coloracin, lo cual indico que la solucin problema era una hexosa. (Este reactivo slo toma coloracin en presencia de pentosas).

Cuando se realiz la prueba con Seliwanoff, se determin solo una leve coloracin en la solucin, lo cual evidenci la ausencia de grupos cetonicos, por lo que se poda tratar de Glucosa o Galactosa (solucin problema). Para finalizar se realiz la mezcla de solucin problema con el reactivo de fenilhidrazina y se logr demostrar que nos encontrbamos en presencia de un azcar reductor GLUCOSA.

4.2.

Hidrlisis cida de disacridos.

Hidrolisis acida de carbohidratos Disolucin de Cambio observado disacrido Maltosa (HCl-NaOH) Rojo ladrillo Sacarosa (HCl-NaOH) Naranja ladrillo Maltosa (Agua) Naranja zanahoria Sacarosa (Agua) No cambio color (verde claro)

Tabla2

El fundamento de esta reaccin radic en que en un medio alcalino (NaOH), el in cprico (otorgado por el sulfato cprico) fue capaz de reducirse por efecto del grupo aldehdo del azcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observ como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al xido cuproso (Cu2O). El medio alcalino facilit que el azcar se tornara a su forma lineal, puesto que el azcar en solucin forma un anillo piransico. Una vez que el azcar se encontr linealmente, su grupo aldehdo pudo reaccionar con el ion cprico en solucin. En este ensayo se observo que la Maltosa fue capaz de dar positivo. Esto ocurri por las condiciones en que se realiz la prueba: en un medio alcalino caliente este disacrido se tautomeriza a glucosa (que es capaz de reducir al ion cprico). La sacarosa (enlace (1 2) O), es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres puesto que estn siendo utilizados en el enlace glucosdico, por lo que carece de poder reductor. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molcula de agua y se descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y

fructosa, que s son reductores. La prueba que se realiz demostr la hidrlisis de este disacrido dando un resultado positivo: aparicin de un precipitado naranja ladrillo, lo cual demuestra que se rompi el enlace O-glucosdico de esta. 5. CONCLUSIONES 1. Monosacridos como la glucosa y disacridos como la maltosa a excepcin de la sacarosa son azucares reductores. 2. La maltosa presenta en su estructura el OH hemiacetlico por lo que es un azcar reductor, es decir tienen su OH anomrico libre, y stos son los que dan positivo en la prueba de Benedict. 3. La sacarosa no es un azcar reductor, pero en presencia de HCl (medio cido caliente) esta puede hidrolizarse a sus monosacridos que la componen (Glucosa- Fructosa) lo que da positivo en la prueba de Benedict. 4. En la reaccin con el cido sulfrico los disacridos y polisacridos se hidrolizan logrando la identificacin de los monosacridos que los componen. 6. PREGUNTAS 1. Cules son estudiadas las aplicaciones prcticas de las pruebas

Ayudan a la determinacin especfica de carbohidratos en general sin importar si son monosacridos, disacridos o polisacridos (Molish). Las dems pruebas son usadas para la determinacin especifica de azucares segn sus grupos funcionales y el nmero determinado de sus carbonos. 2. Escriba la glucosa en forma de silla

3. Defina los siguientes trminos: carbono anomrico, centro quiral, levorrotatorio. Carbono anomrico: hace referencia al carbono carbonlico que se transforma en un nuevo centro quiral tras una ciclacin hemicetal o hemiacetal. Centro quiral: es un tomo unido a cuatro sustituyentes diferentes. Una molcula que posee. Un centro quiral tiene una imagen especular no superponible con ella, denominada enantimero. Levo rotatorio: (levo: griego, al contrario) o levgiro Se denomina as a los monosacridos que poseen actividad ptica y desvan el plano de la luz polarizada hacia la izquierda, en sentido opuesto a las manecillas del reloj, y se indica con el signo (-) o la letra l. 4. Dibuje los monosacridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa, clasifquelos segn el nmero de tomos de carbono y la funcin principal.

Hexosa s Glucosa Galacto sa

Funcin es la fuente principal de energa de las clulas, mediante la degradacin catabolica La galactosa se convierte en glucosa en el hgado e intestinos, de manera que sirva de combustible metablico para las clulas. Es sintetizada en las glndulas mamarias para la produccin de lactosa. Adems es constituyente de glucolipidos y glucoproteinas.

Pentos a Ribosa

funcin Principal fuente de energa para el corazn

Fructos a

La fructosa se convierte en glucosa en el hgado e intestinos, de manera que sirva de combustible metablico para las clulas.

5. Efectu un enlace hemiacetalico y uno hemicetalico, escriba las diferencias entre ambos enlaces.

El enlace hemiacetalico se forma por reaccin entre el carbonilo de un grupo cetona con un grupo hidroxilo de un alcohol. Y el enlace hemicetalico se da entre el carbonilo de un grupo aldehdo con un hidroxilo de un alcohol. 6. Escriba las funciones: aldehidica, cetonica, alcohlica, acida, colquelas en orden de reactividad y explique el por qu de ese orden.

7. Explique en qu consiste la hidrlisis acida de disacridos Disacridos: (ejemplo, la sacarosa), producen dos molculas de monosacrido por hidrlisis. Rompimiento de enlace glucosidico. La sacarosa (enlace (1 2) O), es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres puesto que estn siendo utilizados en el enlace glucosdico, por lo que carece de poder reductor. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molcula de agua y se descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y fructosa, que s son reductores, lo cual demuestra que se rompi el enlace O-glucosdico de esta.

8. Escriba y compare las formulas de la maltosa y la trealosa.

La maltosa resulta de la unin de dos glucosas de manera que el carbono anomrico de una se une al grupo -OH en el carbono 4 de otra, quedando la primera de ellas en configuracin a-. Por eso el nombre sistemtico de la maltosa es a-D-glucopiranosil- (1,4)D-glucopiranosa. Al quedar el carbono anomrico libre en la segunda, la maltosa tendr propiedades reductoras y formas anomricas a- y b-.

La trehalosa es un disacrido formado por dos glucosas unidas por su carbonos anomricos respectivos. Al no quedar ningn carbono anomrico libre, la trehalosa recibe el siguiente nombre sistemtico: a-Dglucopiranosil -a-D-glucopiransido. Obsrvese el sufijo sido para indicar su carcter no reductor; igualmente, al hacer la denominacin sistemtica hay que nombrar el carcter anomrico de ambos residuos (a- y a- en este caso)

9. Defina los siguientes trminos: azcar reductor y azcar no reductor, cite ejemplos. Azucares reductores: son los monosacridos (todos las aldosas, es decir aquellos que presentan un grupo aldehdo en su estructura lineal, por ejemplo: glucosa, manosa, fructosa, galactosa, ribosa, etc.) y los disacridos (no todos, ejemplos son la maltosa, lactosa y celobiosa). Experimentalmente se puede demostrar que son reductores mediante un ensayo sencillo como Fehling o Tollens. Azucares no reductores: Los azcares No Reductores son aquellos que se unen por enlaces glucosdicos de tipo Alfa o Beta, cuando 2 monosacridos iguales o diferentes se unen forman un Disacrido, los Disacridos por condensacin liberan una molcula de agua y son azcares no reductores ya que el grupo Oxidrilo ( OH ) de una hexosa se combina con el grupo Aldehdo ( CHO ) de otra hexosa liberando 1 molcula de H20, el licor de Feeling no tiene efecto sobre ellos lo cual los determina como azcares no reductores, por ej la Sacarosa ( glucosa + fructosa ) Maltosa ( 2 unidades de alfa glucosa), Trehalosa, etc. Cul es la importancia energtica del almidn.

10.

El almidn es la sustancia con la que las plantas almacenan su alimento en races (yuca), tubrculos (patata), frutas y semillas (cereales). Pero, no slo es una importante reserva para las plantas, tambin para los seres humanos tiene una alta importancia energtica, proporciona gran parte de la energa que

consumimos los humanos por va de los alimentos. Se encuentra en las patatas, el arroz, los cereales, las frutas, etc. En una dieta sana, la mayor parte de la energa la conseguimos a partir del almidn y las unidades de glucosa en que se hidroliza. 11. Efectu un enlace glucosdico.

BIBLIOGRAFIA CHANG WILLIAMS, Raymond. QUIMICA SEPTIMA EDICION. Colombia; McGraw-Hill MAYO 2005. HORTON ROBERT. BIOQUIMICA. Hispanoamericana, 1995. Mexico; Prentice-hall

Briceo, C.O y Rodrguez de Cceres Lilia. Qumica General. Curso universitario De Pime, 1988.