Informe ENZIMOLOGIA 3 Terminado

Universidad Santo Tomás
Facultad de Recursos Naturales

Escuela de Biotecnología
Bioprocesos BTE 023
Informe de Laboratorio N°2:

CULTIVO CELULARES, MONTAJE Y USOS:
“Cultivos celulares para proteínas recombinantes”
Integrante:
Paula Cruz Gutiérrez
Docente:
Darío Ocaranza Bueno
Fecha:
3/10/2021
1
Introducción:
La producción de proteínas recombinantes (PR) es una de las aportaciones más

importantes de la biotecnología moderna. El hospedero bacteriano más importante
para la producción de PR es Escherichia coli, aunque otros como Bacillus subtilis y
Bacillus megaterium están cobrando cada vez más importancia. Debido a su
impacto económico y el aporte al sector de la salud humana. La expresión de
proteínas recombinantes en bacterias requiere la inserción de un fragmento de
ADN (marco de lectura abierto, ORF ) en un vector de expresión, habitualmente un
vector plásmido y la transferencia de este vector a células bacterianas
( transformación ). A continuación, las células se cultivan y se inducen para que
expresen la proteína deseada. Las células se recolectan por centrifugación, las
muestras se preparan y las proteínas se detectan mediante electroforesis en gel
de poliacrilamida y posterior tinción del gel con Coomassie Brilliant Blue o tinción
de plata o mediante inmunotransferencia.ting. La expresión de proteínas en
bacterias es altamente escalable y se puede ajustar desde crecimiento sólido
(expresión de colonias) hasta matraces cónicos para cultivos líquidos (hasta 3 l),
hasta cámaras de reacción de fermentación (a menudo más de 100 l de volumen).
Las proteínas de interés industrial o médico a menudo se producen en cantidades

muy bajas por sus huéspedes naturales. Sin embargo, para casi todas las
aplicaciones se necesitan tanto en alto rendimiento como en pureza para
satisfacer las demandas de seguridad y viabilidad. Esto implica la necesidad de
una expresión de proteínas recombinantes de alta calidad en huéspedes de
producción heterólogos. Los sistemas procariotas como Escherichia coli son
baratos, rápidos y están bien establecidos, pero a menudo no producen proteínas
en las cualidades requeridas, mientras que, por otro lado, la producción por
cultivos celulares requiere mucho tiempo y es costosa.
Como alternativa, también están las levaduras combinan la facilidad de

manipulación genética con una alta productividad y la capacidad de realizar el
procesamiento de proteínas eucariotas. Además, la ampliación a la producción a
gran escala está bien establecida.Hoy en día, la velocidad, el costo y la seguridad
son las consideraciones principales para las mejoras de procesos en la fabricación
de proteínas recombinantes. Los líderes de la industria biofarmacéutica se
esfuerzan por lograr mejoras continuas para aumentar el rendimiento, reducir los
costos y que sean más seguros y eficaces. Esto se puede lograr mediante
avances en la ingeniería de líneas celulares, desarrollo de procesos de cultivo
celular, desarrollo de medios químicamente definidos y mayor énfasis en la
caracterización del producto.
2
Producción de Insulina Recombinante en Cultivo Celular
La insulina estimula el crecimiento y la proliferación de una variedad de células

somáticas en cultivo y la evidencia sugiere que la insulina también es un
importante regulador del crecimiento in vivo
3
kLa es el coeficiente volumétrico de transferencia de O2 a la fase liquida x área
interfacial específica, debido a la dificultad de medir kL y a por separado,
usualmente el producto kLa es el que se mide y este parámetro, conocido como el
coeficiente volumétrico de transferencia de masa, caracteriza el transporte de
oxigeno del gas a líquido. También se puede medir a través del método
desgasificación de Wiseman, donde el fermentador se llena solo con agua o medio
de cultivo estéril y luego se remueve el oxígeno por desgasificación con nitrógeno.
La aireación es iniciada y el aumento en la concentración de oxígeno disuelto es
registrada usando un electrodo de oxígeno, y posterior se calcula como ln(C* - CL)
= - kLa * t, donde la pendiente es el kLa
Esto libera solo la energía suficiente para producir dos moléculas de ATP.
Con oxígeno, los organismos pueden descomponer la glucosa hasta
convertirla en dióxido de carbono. Esto libera suficiente energía para
producir hasta 38 moléculas de ATP. Por tanto, la respiración aeróbica libera
mucha más energía que la respiración anaeróbica.
4
Referencias :
Sanders ME Klaenhammer TR (2001) Invited review: the scientific basis of Lactobacillus

acidophilus NCFM functionality as a probiotic. J Dairy Sci84: 319–331.
Tamime AY (2002) Fermented milks: a historical food with modern applications – a review.
Eur J Clin Nutr56: 2–15.
Shah NP (2007) Functional cultures and health benefits. Int Dairy J17: 1262–1277.
Yerlikaya, O., 2014. Starter cultures used in probiotic dairy product preparation and
popular probiotic dairy drinks. Food Sci. Technol. 34 (2), 221–229.
Rogosa, M., Mitchell, J.A., Wiseman, R.F., 1951. A selective media for isolation and
enumeration of oral and fecal lactobacilli. J. Bacteriol. 62, 132–133
Vinicius De Melo Pereira, G., De Carvalho Neto, D.P., Junqueira, A.C.D.O., Karp, S.G.,
Letti, L.A., Magalhães Júnior, A.I., Soccol, C.R., 2019. A review of selection criteria for
starter
culture development in the food fermentation industry. Food Rev. Int. 1-33, 16–17
Mavhungu, N.J., 2007. Isolation and Characterization of Lactic Acid Bacteria from "Ting" in
the Northern Province of South Africa. Doctoral dissertation, University of Pretoria.
5
Referencias:
1.- Mathews, Van Holde, Adhern. Bioquímica 2ª edición. Madrid: Pearson Addison
Wesley, 2002, pag. 596
2.- Canosa, F. E. (2021). FEDUCHI:Bioqumica 2a Edición.
3.- Nelson, University David L & Cox, University Michael M. (2017). Lehninger Principles of
Biochemistry (7th ed.). W. H. Freeman.
4.- Ingledew WJ, Poole RK (September 1984). "The respiratory chains of Escherichia coli".
Microbiological Reviews. 48 (3): 222–71. doi:10.1128/mmbr.48.3.222-271.1984. PMC
373010. PMID 6387427.
5.- Kracke, F. (2015, junio). «Microbial electron transport and energy conservation - the
foundation for optimizing bioelectrochemical systems». Frontiers.
https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00575

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2.- Canosa, F. E. (2021). FEDUCHI:Bioqumica 2a Edición.

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